山东省规模化猪场伪狂犬病感染流行率调查

马慧玲 郑 霞 陈 静 王苗利 孙圣福 蔺晓月 徐 鸿 徐 聪（山东省动物疫病预防与控制中心 山东 济南 250022）

山东省规模化猪场伪狂犬病感染流行率调查

马慧玲 郑 霞 陈 静*王苗利 孙圣福 蔺晓月 徐 鸿 徐 聪（山东省动物疫病预防与控制中心 山东 济南 250022）

2013年3月，规模场在95%的置信度下，预期流行率为40%，可接受误差9.5%的情况下对山东省规模猪场估计流行率采样；场内在95%的置信度下，预期流行率为10%，试验敏感性100%的情况下对场内个体采用发现疫病策略采样，通过对山东省14个地市102个规模猪场的2835份血清样品进行野毒抗体检测，结果显示，在95%的置信度下，山东省内猪场的血清野毒抗体阳性率为65.59%，猪样品血清野毒抗体阳性率为44.10%；西北地区阳性检出率最高，为57.67%；中部地区最低，为31.83%，东部地区和西南地区分别为48.33% 和37.75%不等；种猪野毒感染阳性率最高，为67.84%，其次是育肥猪和保育猪，分别为47.83% 和35.20%，初生仔猪最低，为21.05%；大型猪场为33.48%，中型猪场为44.89%，小型猪场为55.42%；春冬季节阳性率较高，分别为53.54%和57.92%；夏秋季节相对较低，分别为33.25%和35.05%；结果表明，山东省内普遍存在猪伪狂犬病毒感染状况。

伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由疱疹病毒科、α-疱疹病毒亚科的伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus，PRV)引起的多种家畜和野生动物共患的急性接触性传染病，其主要症状为发热、奇痒(猪除外)、繁殖障碍、脑脊髓炎等[1]。猪是伪狂犬病的主要传染源和自然贮存宿主[2]，感染仔猪主要表现神经症状，成年猪主要为流产、死胎等繁殖障碍和呼吸道症状[3]。我国自1948年，刘永纯年报道过伪狂犬病以来[4]，该病已经扩大到黑龙江、吉林、上海、广东、陕西、河南、甘肃、山东等30多个省、市、自治区，其中台湾已成功根除[5]。给畜牧业造成了巨大的经济损失，严重阻碍了我国养猪业的可持续发展，是困扰猪场发展的重要疾病因素之一。该病常见的传播方式：（1）直接接触传播：易感猪与感染猪直接鼻对鼻的接触将病毒传播，及破损的皮肤和配种接触等发生病毒感染[6]；（2）空气传播：空气传播为该病主要的方式，病毒从排毒猪的鼻分泌物以及唾液中排出，逐渐形成气溶胶，然后随空气的气流传播至同一猪场，甚至随风传到9km或更远的猪场的易感猪群；（3）垂直感染：PRV可经胎盘、乳汁传播给子代[7]，但是母体的免疫球蛋白不能传递给子代，因此通过垂直传播导致仔猪死亡率达到100%[8]。（4）间接传播：经病毒污染后的器具、尸体、饲料、饮水以及带病的鼠类、猫等被易感猪食入后，经消化道感染[9]。

山东省是畜牧大省，养猪业是本省养殖业的重要组成部分之一。随着近几年来的迅速发展，猪群的疫病也越来越严重，严重制约着养猪业的发展，造成了直接的经济损失。猪伪狂犬病是目前危害我省养猪业的重要疾病之一，有必要对猪伪狂犬病的流行现状进行调查，掌握该病的感染和流行情况。

1 调查材料

1.1 材料 2013年3月，山东省14个地市的102个不同规模的猪场，采集及送检的2835份血清样品，其中包括新生仔猪血清703份，保育猪血清659份，育肥猪血清646份，种猪血清827份。

1.2 主要试剂 PRV(gpI)抗体检测试剂盒(IDEXX)。

1.3 主要仪器 酶标仪洗板机(BioTek公司，美国)、酶标仪(EXL 800 Universal Microplate Reader，美国)、高速离心机(Thermo，美国)、电子分析天平(美国双杰公司)、电热恒温水浴锅(嘉兴市中新医疗仪器有限公司)。

2 调查方法

2.1 采样设计 在95%的置信度下，预期流行率为40%，可接受误差9.5%的情况下，对山东省规模猪场采用估计流行率策略进行采样。在95%的置信度下，预期流行率为10%，试验敏感性100%的情况下对场内个体采用发现疫病策略采样。样品涵盖山东省14个地市102个规模猪场的2835份血清样品进行野毒抗体检测，其中包括新生仔猪血清703份，保育猪血清659份，育肥猪血清646份，种猪血清827份。

2.2 PRV(gpI)野毒抗体检测 按照PRV(gpI)抗体检测试剂盒(IDEXX)的操作方法进行：（1）首先将猪伪狂犬野毒抗体检测试剂盒恢复至室温，按照1:9的比例用蒸馏水将10倍浓缩洗涤液稀释倒入洗板机，备用。（2）取干净的96孔样品稀释板，在A1、A2孔加入阴性对照50μl，A3、A4孔加入阳性对照50μl；然后按纵向每孔依次加入50μl的待检样品，然后每孔加入50μl的样品稀释液，备用。（3）取出PRV抗原包被板，将稀释好的样品转移到对应位置。（4）室温孵育1h，或放置4℃冰箱过夜孵育。（5）设置洗板机，每孔300μl，每板洗涤3次，进行洗涤。最后一次洗涤结束，将包被板残留液体扣拍在吸水纸上。（6）每孔加入辣根过氧化物酶标记的PRV抗gpI抗体100μl。（7）室温下孵育20min。（8）重复步骤5。（9）每孔加入TMB底物100μl。（10）避光条件下室温孵育15min。（11）每孔加入终止液50μl，终止反应。（12）使用酶标仪读取A(650)下的，样品与对照结果。

3 结果

3.1 山东省规模化猪场PRV血清野毒抗 送检的102个规模化猪场中，阳性场数67个，场阳性率65.69% ；2835份血清中1250份阳性样品，样品野毒抗体平均阳性率为44.10 %。

3.2 山东省规模化猪场不同地区PRV血清野毒抗体 根据山东省地理位置的差异，对采样的14个地级市进行以下划分：东部地区包括潍坊、东营、青岛、威海；中部地区包括济南、泰安、淄博、临沂；西北地区包括德州、聊城、滨州；西南地区包括菏泽、济宁、枣庄。西北地区阳性检出率最高，为57.67%；中部地区最低，为31.83 %，东部地区和西南地区分别为48.33% 和37.75%不等，表明山东各地区规模化猪场猪伪狂犬病野毒感染情况仍较为普遍，结果见表1。

表1 山东省不同地区猪伪狂犬病抗体检测结果 (个、%、份)

3.3 不同生长阶段的猪PRV血清野毒抗体 对不同阶段猪群统计，结果显示种猪野毒感染阳性率最高，为67.84%，其次是育肥猪和保育猪，分别为47.83% 和35.20%，初生仔猪最低，为21.05%。结果在卡方检验和极大似然估计下P值都是小于0.05的，因此不同阶段猪阳性率存在显著差异，结果见表2。

表2 不同生长阶段猪伪狂犬病抗体检测结果 (份、%)

3.4 不同规模养殖场的猪PRV血清野毒抗体 根据存栏母猪头数对102个猪场进行划分，山东地区不同规模的猪场均存在PRV野毒感染现象，大型猪场为33.48%，中型猪场为44.89%，小型猪场为55.42%。结果在卡方检验和极大似然估计下P值都是小于0.05的，因此不同规模猪场阳性率存在显著差异，结果见表3。

表3 不同规模猪场猪伪狂犬病抗体检测结果 (个、%、份)

3.5 不同季节的猪PRV血清野毒抗体 根据季节的划分，对山东省部分地区规模化猪场PRV血清野毒抗体结果可以看出，春冬季节阳性率较高，分别为53.54%和57.92%；夏秋季节相对较低，分别为33.25%和35.05%。结果在卡方检验和极大似然估计下P值都是小于0.05的，表明不同季节PRV阳性率存在显著差异。结果见表4。

表4 不同规模猪场猪伪狂犬病抗体检测结果 (个、%、份)

4 讨论

4.1 不同阶段的猪阳性率 种猪的阳性率最高为67.84%，这表明母猪的带毒现象非常普遍，PRV仍然是山东省母猪繁殖障碍疾病的重要原因之一。新生仔猪及保育猪的抗体阳性率较低，分别为21.05%和35.20%，分析其主要原因是由于体内存在有较高水平的母源抗体；另一方面是PRV感染仔猪的死亡率高，而所采集的血清样本来自于被认为健康的猪群，这也是导致初生仔猪抗体阳性率的原因之一。因此初生仔猪与保育猪仍然是防控的重点，当母源抗体降低到一定水平后，将成为猪伪狂犬病感染的主要易感猪群。

4.2 不同季节的猪阳性率 猪伪狂犬病一年四季均有发生，冬春季节感染率较高，夏秋季节相对感染率较低。分析原因主要是：第一，由于PRV存在热敏感的生物学特性，因此，在低温条件下更有利于病毒的生存。第二，冬春季节气候较为寒冷，导致猪的应激能力增强，因而免疫力下降，对各种疾病的易感性增强。第三，冬春季节由于气候寒冷，因此养殖场多封闭进行饲养，导致圈舍内空气流通不良，促进疾病传播。

4.3 不同规模的猪场阳性率 大型猪场阳性率最低，其次是中型猪场，小型猪场阳性率最高。分析原因为大型猪场对猪伪狂犬病的防疫比较重视，另外饲养管理比较到位。小型猪场卫生环境较差，防疫比较混乱，人员流动频繁，导致PRV的扩散与传播。可见良好的饲养环境及防控措施对于疾病的预防非常重要。

4.4 不同地区的猪场阳性率 本次调查范围基本覆盖了山东省，证明了猪伪狂犬病在山东省内普遍存在，应引起各地区的高度重视。

[1] 王莉娟, 陆明哲, 陈义平等. 伪狂犬病检测技术研究进展[J]. 中国畜牧兽医. 2005(6): 42-44.

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[3] NSECA A A, MAGALH ES C G, SALES E B, et al. Genotyping of the Pseudorabies Virus by Multiplex PCR Followed by Restriction Enzyme Analysis[J]. ISRN Microbiology, 2011: 1-4.

[4] 刘澜, 龙冬, 朱万光等. 山东省规模化猪场伪狂犬病血清学调查[A]. 首届中国兽药大会-兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集[C], 2008, 226-7.

[5] 孙刚, 韩波. 仔猪伪狂犬病的诊断与防制[J]. 黑龙江畜牧科技. 1999(1): 38-39.

[6] Christensen L S. Evidence of long distance airborne transmission of Aujeszky's Disease(Pseudorabies)virus. Vet Rec, 1990, 127: 471-474.

[7] Gloster J, Donaldson A l.Hough M N.Analysis of a series ofoutbreaks of Aujeszky's Disease in Yorkshire in 198l-82: The possibitity ofairborne disease spread. Vet Rec, 1984(114): 234-239.

[8] B.E斯特劳. 猪病学(第8版)[M]. 北京: 中国农业大学出版社, 2000: 239-251.

[9] 牛建强, 蓝天等. 伪狂犬病免疫净化方案的评价[J]. 养猪, 2007(5): 55-56.

S858.28

A

1007-1733(2015)11-0055-03

2015-09-02）

种畜禽场疫病净化技术示范与推广项目

*通讯作者