HPLC法测定心舒宁片中奇壬醇的含量

邵卫绪

（山东省蓬莱市中医院急诊科，蓬莱265600）

HPLC法测定心舒宁片中奇壬醇的含量

邵卫绪

（山东省蓬莱市中医院急诊科，蓬莱265600）

目的建立心舒宁片中奇壬醇的含量检测方法。方法采用高效液相色谱法对心舒宁片中奇壬醇的含量进行检测，色谱柱为Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-水溶液梯度洗脱，流速为1.0 mL·min-1，检测波长为215 nm。结果奇壬醇在0.2008～4.0160 μg·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9997），平均回收率97.36%，RSD=3.03%（n=6）。结论该法操作简便，准确可靠，可作为心舒宁片中奇壬醇的含量测定方法。

心舒宁片；奇壬醇；高效液相色谱法

心舒宁片是由毛冬青、银杏叶、葛根、益母草、豨莶草等多种药材制成的糖衣片，有活血化瘀的功效。临床主要用于心脉淤阻所致的胸痹、心痛、冠心病、心绞痛等症［1］。目前对于心舒宁片质量标准的研究多集中在葛根［2］和银杏叶［3］成分的含量测定，对豨莶草成分的测定却鲜见报道。

豨莶草系菊科植物豨莶（Siegesbeckia 0rientalis L．）、腺梗豨莶（Siegesbeckia pubescens Makino）和毛梗豨莶（Siegesbeckia glabrescens Makino）3种植物的地上部分，具有祛风湿、利关节、解毒之功效，用于风湿痹痛、腰膝酸软、四肢麻痹、半身不遂、高血压、风疹湿疮等症。奇壬醇是豨莶草中主要有效成分，具有多种药理作用，豨莶草抗血栓有效部位中主要是以奇壬醇为主的二萜类成分，且其中奇壬醇的含量大于10%［4］。复方发挥疗效依靠的是多药物协同作用，目前仅以葛根和银杏叶中化学成分含量评价心舒宁片的质量不够客观，为了完善其质量控制标准，我们建立了高效液相色谱法测定心舒宁片中奇壬醇含量的方法，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器LC-20AT高效液相色谱仪，包括四元高压梯度泵系统，紫外检测器，柱温控制系统，自动进样系统（日本岛津公司）；电子分析天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；DS电热三用水浴锅（北京医疗设备厂）。

1.2 试药心舒宁片（广州奇星药业）；奇壬醇对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111726-200802），甲醇、乙腈（美国Fisher公司，色谱纯）；娃哈哈纯净水；其他为分析纯，均购自北京高华伟业化学品有限责任公司。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：Kromasil C18柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水溶液梯度洗脱，流速：1.0 mL/min，检测波长：215 nm；柱温：30℃。梯度洗脱条件见表1。

表1 奇壬醇梯度洗脱条件（%）

2.2 对照品溶液制备精密称取奇壬醇对照品10.04 mg，加甲醇超声溶解，定容至25 mL容量瓶，制成每1 mL含奇壬醇0.4016 mg的对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备将本品除去糖衣，研细，精密称量3 g，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流提取5 h，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.4 系统适应性依上述色谱条件，分别精密吸取奇壬醇对照品溶液10 μL、供试品溶液20 μL，分别进样。在对照品溶液和供试品溶液色谱图相应位置上，有相同保留时间的色谱峰。结果见图1。

图1 高效液相色谱图

2.5 线性关系考察精密吸取奇壬醇对照品溶液（每1 mL含奇壬醇0.4016 mg）各0.5、2、4、6、8、10 μL注入液相色谱仪，测定色谱峰峰面积。以对照品进样量（X）为横坐标，色谱峰峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，奇壬醇回归方程分别为：Y=798199X+ 15769，r=0.9997。表明奇壬醇进样量在0.2008-4.0160 μg范围内线性关系良好。

2.6 精密度考察取心舒宁片供试品溶液，重复进样6次，每次20 μL，测定奇壬醇色谱峰峰面积，计算RSD为1.71%（n=6）。表明精密度良好。

2.7 重复性考察称取6份心舒宁片，每份约3 g，按“2.3供试品溶液制备”项下方法制备供试品溶液，测定奇壬醇色谱峰峰面积，计算含量，奇壬醇的平均含量为0.1635%（RSD=2.91%）。结果表明重复性良好。

2.8 稳定性考察取心舒宁片供试品溶液，分别于制备后0、2、4、6、8、10、12、24 h进样每次20 μL，测定奇壬醇色谱峰峰面积，计算RSD为2.38%。结果表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

2.9 回收率试验称取已知含量的心舒宁片（奇壬醇的含量为0.1635%）各6份，每份约3 g，精密称定，置圆底烧瓶中，分别精密加入奇壬醇对照品溶液（0.4016 mg/mL），按“2.3供试品溶液制备”项下方法制得供试品溶液，分别精密吸取20 μL，注入液相色谱仪，测定奇壬醇峰面积，计算奇壬醇含量和回收率。平均回收率为97.36%，RSD=3.03%。结果见表2。

表2 心舒宁片中奇壬醇回收率实验结果（n=6）

2.10 样品含量测定分别称取3批心舒宁片，按“2.3供试品溶液制备”项下方法制备供试品，按“2.1色谱条件”项下色谱条件测定，采用外标一点法计算奇壬醇的含量，结果见表3。

表3 3批心舒宁片中奇壬醇含量测定结果（n=3，%）

3 讨论

3.1 检测波长的选择据2010年版《中国药典》［5］及相关文献［6］报道，奇壬醇最大吸收波长在215 nm处，故选用215 nm作为测定波长。

3.2 提取溶剂的考察本文分别采用了甲醇、70%甲醇、50%甲醇、乙醇进行提取，结果发现不同溶剂对奇壬醇的提取率仅有微小差异，其中甲醇的提取率最高，因此最终确定以甲醇为提取溶剂。

3.2 提取方法的考察心舒宁片供试品制备的方法主要有超声提取和回流提取，本文对两种方法进行了考察，结果发现回流提取法提取的奇壬醇含量明显高于超声提取，回流提取效果更好，超声提取可能无法将奇壬醇完全提取出来，故选用回流提取法。

3.3 流动相的选择本文曾尝试等度洗脱，但分析时间过长且奇壬醇与杂质峰分离效果不好，故采用梯度洗脱，分析时间相对较短，且奇壬醇与杂质峰分离度较好。本文比较了甲醇-水系统和乙腈-水系统，甲醇-水系统在进行梯度洗脱时，基线漂移很严重，故选用乙腈-水作为流动相系统。

心舒宁片因具有良好的治疗冠心病、心绞痛等疾病的疗效而在临床上广泛应用。本文通过HPLC法测定心舒宁片中奇壬醇含量，所建立的方法有良好的专属性，操作简便，结果准确可靠，有利于今后更合理、全面、科学地对心舒宁片进行质量评价和控制，有利于生产和生产质量保证。

［1］林达，洪美华.薄层色谱法鉴别心舒宁片中的豨莶草［J］.现代食品与药品杂志，2007，17（4）：41-42.

［2］梁洁怡，刘军，冯毅凡，等.HPLC法测定心舒宁片中葛根素的含量［J］.广东药学院学报，1997，13（4）：242-243.

［3］洪美华，赖珊，张映娜.薄层色谱法鉴别心舒宁片中银杏叶的主要成分［J］.中国药师，2007，10（2）：187-188.

［4］邵露.豨莶草炮制前后质量控制方法研究［D］.北京：北京中医药大学，2014.

［5］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：26.

［6］程志红，侴桂新，王峥涛.豨莶草的质量标准研究［J］.中国中药杂志，2005，30（4）：257-259.

Content Determination of Kirenol in Xinshuning Pill by HPLC

SHAOWeixu

(EmergencyDepartment，PenglaiHospitalof TraditionalChineseMedicine，ShandongProvince，Penglai265600，China)

Objective To establish a method for content determination of kirenol in Xinshuning pill by HPLC.Methods The experimental condition of the HPLC method was as follows：Kromasil C18 column(4.6 mm×250 mm，5 μm)，with gradient elution using acetonitrile and water(55∶45)；the detected wavelength was 215 nm，and the flow rate was 1.0 mL/min.Results Kirenol demonstrated good linear relationship in the range 0.2008～4.0160 μgomL-1(r=0.9997)，the average recovery rate was 97.36%with RSD of 3.03%.Conclusion The method is simple，reliable，accurate，reproducible and stable，and it could be used in the determination of kirenol in Xinshuning pill.

Xinshuning pill；kirenol；HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.12.076

1672-2779（2015）-12-0150-02

：张文娟本文校对：张文娟

2015-05-15）