依达拉奉对大鼠创伤性脑损伤的早期保护作用

周传广 冷晓磊 矫永庆 崔 鹏

1）辽宁大连市第三人民医院神经外科 大连 116033 2）大连医科大学附属三院神经外科 大连 116000

目前，因交通事故等所造成的颅脑创伤呈加速递增趋势，是导致创伤病人伤残和死亡的主要原因，严重危害人类健康，给社会和家庭带来沉重负担，深入研究创伤性脑损伤（TBI）的发病机制及其伤后病理生理变化，探索行之有效的脑保护治疗途径，将有助于提高TBI病人的生存率及生存质量。依达拉奉作为一种新型的自由基清除剂，对缺血性脑损伤保护作用的报道众多［1-3］。本文旨在探讨依达

拉奉对早期创伤性脑损伤的作用。

1 材料

1．1 实验动物及分组 选取健康成年SD 大鼠54 只，雄性，购于辽宁医学院实验动物中心。分为3 组：假手术组18 只，仅开骨窗，不致伤；损伤组18 只，制大鼠自由落体脑撞击伤模型；依达拉奉组18 只，予尾静脉注射依达拉奉注射液处理。

1．2 药品及试剂 依达拉奉注射液（商品名比存，南京先声药业有限公司，规格每支20mL：30mg）；伊文思蓝（EB）试剂（上海生物试剂站）；MDA 及SOD 试剂盒（南京建成生物工程研究所）。

2 方法

2．1 动物模型制作 采用经典的自由落体撞击伤模型。本实验选用改进的Feeney’s自由落体硬膜外撞击方法［4］。

2．2 给药途径及方法 依达拉奉组在伤后立即于大鼠尾静脉滴注依达拉奉0．5mg·kg-1（溶解于生理盐水100mL中）30min滴完。伤后每12h再给药1次，剂量及给药途径均一致。余2组仅注射同体积的生理盐水。

3 观察指标

3．1 脑含水量测定 于伤后24h、48h及72h各组分别取大鼠断头处死，开颅取脑，于伤灶周围取200 mg脑组织，电子分析天平称取脑湿质量，然后将标本置于90 ℃红外线干燥箱中24～48h至恒质量，称取值为干质量。脑水含量用湿重的百分比表示，即脑组织含水量（%）＝（湿质量-干质量）／湿质量×100%。

3．2 BBB 通透性测定 按Belayer法［5］使用伊文思蓝（evens blue，EB）作为示踪剂。于伤后24h、48h及72h各组分别取大鼠断头处死，在处死前2h，按20mg／kg自股静脉注入2%的EB 溶液。取伤灶后外标本100mg，加甲酰胺3 mL 加盖避光在54℃水浴箱中提取24h，提取液在紫外分光光度计下测量光密度值（OD 值），波长为632nm，脑组织EB含量（OD／g湿脑组织）代表BBB通透性。

3．3 脑组织MDA 含量测定及SOD 活力检测 于伤后24 h、48h 及72h将大鼠迅速断头取脑，于冰浴中迅速分离脑组织，取损伤侧半球脑组织称质量，按1∶10比例（每1g组织加10mL 生理盐水）加入冰生理盐水，用组织匀浆机分别制成10%组织匀浆，离心10min，并用生理盐水将上清液稀释成1%组织匀浆，测定MDA 含量及SOD 活力。

3．4 统计学处理 采用SPSS 14．0统计软件进行Oneway-ANOVA 分析，计量资料均以±s表示。组间比较用LSD检验，P＜0．05 为差异有统计学意义。

4 结果

4．1 脑含水量测定结果 在3个时间点，损伤组和依达拉奉组均高于假手术组，而依达拉奉组明显低于损伤组，差异有统计学意义（P＜0．05）。见表1。

表1 各组脑组织含水量（%）比较 （±s，n＝18）

表1 各组脑组织含水量（%）比较 （±s，n＝18）

注：与损伤组相应时间点比较，＊P＜0．05

组 别24h 48h 72h假手术组95．82±0．34 95．90±0．41 95．73±0．38损伤组 98．48±0．52 110．62±0．59 118．37±0．63依达拉奉组 97．02±0．48＊ 103．92±0．54＊ 110．82±0．60＊

4．2 脑组织EB含量测定结果 在3个时间点，损伤组和依达拉奉组EB含量均有不同程度升高，但依达拉奉组的变化，各时间点均明显低于损伤组（P＜0．05）。见表2。

表2 各组脑组织EB含量（OD／g）比较 （±s，n＝18）

表2 各组脑组织EB含量（OD／g）比较 （±s，n＝18）

注：与损伤组相应时间点比较，＊P＜0．05

组 别24h 48h 72h假手术组0．296±0．026 0．295±0．022 0．297±0．028损伤组 0．762±0．075 0．843±0．083 0．927±0．091依达拉奉组 0．721±0．072＊ 0．801±0．079＊ 0．845±0．082＊

4．3 MDA 含量及SOD 活力变化 在3个时间点，损伤组和依达拉奉组MDA 含量均有不同程度升高，SOD 活力呈下降趋势。但与损伤组比较，依达拉奉组MDA 含量均显著降低（P＜0．05），SOD 活力则下降缓慢（P＜0．05）。见表3。

表3 各组MDA 含量及SOD 活力比较 （±s，n＝18）

表3 各组MDA 含量及SOD 活力比较 （±s，n＝18）

注：与假手术组相应时间点比较，＊P＜0．05，与损伤组相应时间点比较，＊＊P＜0．05

组 别 时间 MDA 含量（mmol／mL）SOD 活力（Nu／mg）假手术组24h 117．51±5．82 119．88±4．69 48h 119．32±5．93 120．38±4．92 72h 118．42±5．89 121．34±5．23损伤组 24h 146．47±7．82＊ 90．01±7．11＊48h 156．71±9．15＊86．34±6．27＊72h 175．24±11．43＊ 80．29±5．51＊依达拉奉组 24h 143．12±7．13＊＊ 93．35±7．52＊＊48h 149．25±8．02＊＊ 90．39±7．32＊＊72h 160．41±10．12＊＊ 88．46±7．03＊＊

5 讨论

颅脑损伤是当今威胁人类生命的主要疾患之一，其发生率和病死率仅次于癌症和心血管疾病而居第3位，在暴力性死亡中颅脑损伤的病死率居首位。随着我国现代化进程的加快，交通、建筑事业的发展以及运动损伤、意外事故和自然灾害等致伤因素的存在，创伤发生率增多，颅脑损伤已成为威胁人们生命的主要疾病。目前颅脑损伤的实验研究主要围绕颅脑损伤后继发性损伤机制展开，如脑组织能量代谢紊乱、兴奋性氨基酸毒性、细胞内钙超载、自由基损伤、神经细胞凋亡、炎症反应等多环节。而创伤性脑损伤后引起的出血、缺血及缺血再灌注等均伴有大量的氧自由基产生，由于细胞膜脂质内含有大量的胆固醇及多不饱和脂肪酸，易遭受自由基的侵害，发生脂质过氧化反应，致细胞膜通透性改变，细胞水肿坏死［6］。SOD 是一种金属酶，可催化超氧自由基发生歧化反应，能够清除氧自由基，保护生物膜免受自由基的伤害。自由基可使脑组织MDA 含量升高，SOD 活性下降。通过研究脑组织线粒体MDA 和SOD 水平的变化，可以反映药物治疗的效果是否通过对抗自由基而发挥其治疗作用［7］。依达拉奉是一种新型自由基清除剂，分子量小，具有亲脂基团，可清除具有高度细胞毒性的羟基基团，降低羟自由基的浓度，抑制脂质过氧化作用［8］。本实验结果表明损伤组伤后脑组织MDA 含量明显增加，而SOD 活力则有显著下降，但依达拉奉治疗组，伤后早期MDA 含量升高及SOD 活力下降趋势得到显著的抑制。从本实验脑含水量及EB含量的变化观察，我们考虑依达拉奉能通过清除自由基，抑制细胞膜和毛细血管的脂质过氧化，降低BBB 的通透性，从而能在脑损伤早期起到减轻脑水肿的作用。故依达拉奉作为一种安全、有效的自由基清除剂，对脑损伤早期具有积极的保护作用。

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