胸腔积液腺苷脱氨酶检测联合酶联免疫斑点实验在结核性胸膜炎诊断中的价值

黄红丽施承宏

胸腔积液腺苷脱氨酶检测联合酶联免疫斑点实验在结核性胸膜炎诊断中的价值

黄红丽①施承宏①

目的：研究胸腔积液腺苷脱氨酶（ADA）检测联合酶联免疫斑点实验（T-SPOT）在结核性胸膜炎诊断中的价值。方法：选取112例结核性胸膜炎患者作为观察组，42例非结核引起的渗出性胸腔积液患者为对照组，两组患者均进行胸腔积液ADA检测及T-SPOT实验。结果：两组患者胸腔积液检测结果，ADA敏感性87.50%，特异性88.09%；T-SPOT敏感性为89.28%，特异性为92.85%。两种方法联合检出阳性率为95.54%，与T-SPOT.TB（89.28%）及胸腔积液ADA（87.50%）阳性率比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：两种方法联合检测可提高结核性胸膜炎诊断率，对结核性胸膜炎诊断提供很好的依据，是结核性胸膜炎较好的实验室诊断手段，具有较高的应用价值和广阔的应用前景。

胸腔积液腺苷脱氨酶； 酶联免疫斑点实验； 结核性胸膜炎； 诊断

结核病是严重危害人类健康的慢性传染性疾病，是单一致病菌所致的传染性疾病中死亡率最高的疾病，是全球共同关注的一个严重公共卫生问题。据世界卫生组织估计，2011年全世界范围新增结核患者870万例，死于结核的人数约140万[1]。由于结核菌复杂的生物学特性，导致结核病的诊断较复杂，易误诊、漏诊。世界卫生组织2004年的报告显示，结核病的确诊率仅37%，即使在发达国家也仅有50%的结核病例通过细菌学方法被证实[2]。结核性胸膜炎的诊断同样较为困难。因此寻找一种快速、准确、可靠的诊断方法十分迫切，可避免误诊、漏诊，对于控制结核病疫情亦十分重要。为提高结核性胸膜炎的诊断率，现将本院154例胸腔积液患者作胸腔积液腺苷脱氨酶（ADA）检测及酶联免疫斑点实验（T-SPOT）检测结果进行分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院2010年1月-2014年3月收治的胸腔积液患者154例为研究对象。根据患者的临床症状、胸腔积液常规实验室检查及肺部影像学等检查诊断的结核性胸膜炎112例为观察组，其中男84例，女28例，年龄6～80岁，平均（35.28±14.38）岁。非结核引起的渗出性胸腔积液42例为对照组，其中男30例，女12例，年龄11～77岁，平均（49.94±17.14）岁。对照组中有8例为恶性胸腔积液（6例肺癌，1例白血病，1例胸膜间皮瘤），29例为肺炎引发的渗出性胸腔积液，1例胸腔积液与肺间质纤

维化有关，1例与自身免疫性溶血有关，2例为心衰所致，1例为尿毒症所致。所有患者均经组织学、病理学活检确诊。两组患者在性别、年龄等一般资料上比较差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 ADA仪器、试剂、检测方法及结果判断 采用奥林巴斯Au5400型全自动生化分析仪器，采用宁波美康公司生产的试剂盒，参照试剂盒中提供的方法，用速率法检测ADA活性，正常参考值为（14.4±7.1）U/L。具体方法：给予患者常规胸穿，取大约5 mL胸腔积液，离心之后取清液进行送检。当患者的胸腔积液腺苷脱氨酶（ADA）含量大于45 U/L时，可被确诊为结核性胸膜炎，记为显性[3-4]。

1.3 T-SPOT.TB仪器、试剂、检测方法及结果判断 采用海尔Biosafety Cabinet生物安全柜，REVCO CO2孵育箱。T-SPOT.TB试剂盒由上海长征复星公司提供。具体检测方法：按照试剂盒说明书采集外周静脉血4 mL，肝素抗凝，分离外周血单个核细胞（PBMCs），用细胞培养基AIMV 重悬细胞，并将浓度调整至2.5×106/mL。在已包被抗IFNγ单抗的96孔板上，分别加入50 μL细胞培养基作为空白对照，50 μL植物血凝素作为阳性对照，以50 μL结核分枝杆菌特异性ESAT-6和CFP-10作为刺激原。然后在每个孔中加入100 μL上述细胞悬液。把96孔板放在37 ℃孵箱培养16～20 h后， 用PBS液洗板4次，加入碱性磷酸酶标记的二抗，在2～8 ℃下孵育1 h。孵育后再用PBS液洗板4次。最后每孔加入显色底物BCIP/NBTPLUS， 室温中静置7 min后蒸馏水终止反应。阳性结果判断标准：（1）如果空白对照孔斑点数＜5个，检测孔斑点数减去空白对照孔斑点数≥6；（2）如果空白对照孔斑点数≥6个，检测孔斑点数必须＞2倍的空白对照孔斑点数[2]。

1.4 治疗 112例结核性胸膜炎患者均给予规范抗结核药物治疗，即口服“异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇”片（具体用量根据患者体重按照药品说明书中要求给予）强化治疗2～3个月后，再继续口服“异烟肼、利福平”片巩固治疗至9～12个月。大量胸腔积液患者在抗结核治疗的同时给于加用糖皮质激素（强的松片）后，逐渐减量至停用。所有患者全身症状消失，血沉正常，胸腔积液逐渐吸收，病情稳定后出院，给予门诊督导化疗，随访病情无反复。

1.5 统计学处理 应用SPSS 13.0软件进行统计学分析，计数资料用率或构成比表示，多个样本率的比较采用 χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ADA检测不同性质胸腔积液敏感性及特异性比较 ADA检测结核性胸膜炎的敏感性为87.50%，特异性为88.09%。见表1。

表1 ADA检测不同性质胸腔积液敏感性及特异性比较

2.2 T-SPOT.TB检测不同性质胸腔积液敏感性及特异性比较 T-SPOT.TB检测结核性胸膜炎的敏感性为89.28%，特异性为92.85%。见表2。

表2 T-SPOT.TB检测不同性质胸腔积液敏感性及特异性比较 例（%）

2.3 112例结核性胸膜炎胸腔积液ADA检测联合T-SPOT.TB检测阳性率为95.54%。见表3。与胸腔积液ADA（87.50%）及T-SPOT.TB（89.28%）阳性率比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

表3 112例结核性胸膜炎胸腔积液ADA检测联合T-SPOT.TB检测结果 例

3 讨论

胸腔积液病因较复杂，肿瘤、炎症、结核等均可导致患者出现胸腔积液，结核性胸膜炎是国内非恶性胸腔积液最常见的病因。目前主要是依据患者的临床症状，给予胸腔穿刺，行胸腔积液常规实验室检查，再结合肺部影像学、结核菌素试验、结核抗体等检查来诊断结核性胸膜炎，随后给予诊断性抗结核治疗，再根据疗效来印证诊断的正确性，有时难免会出现误诊、漏诊。诊断结核性胸膜炎的金标准是胸腔积液中找到抗酸杆菌，但胸腔积液涂片找抗酸杆菌的阳性率低，仅7%～13%[5-6]。虽然胸膜病理组织学活检的阳性率较高，可达50%～80%，经胸腔镜诊断阳性率可高达86%～97%，但这些都是有创性检查，不可能常规应用于临床实践[7]。而胸膜活检、内科胸腔镜创伤性大，存在一定危险，不容易被患者所接受，且受医院条件制约，不易广泛推广。

胸腔积液腺苷脱氨酶（ADA）检测是目前常用于诊断结核性胸膜炎的实验室检查项目之一。腺苷脱氨酶是前T淋巴细胞分化淋巴细胞过程中不可缺少的酶，体内分布广泛，ADA活性与淋巴细胞的激活和分化有关，ADA的增高考虑存在细胞免疫反应。结核性胸膜炎因为结核分枝杆菌对单核巨噬系统起到了激活作用，显著增多了淋巴细胞，在人体组织中，含有较多腺苷脱氨酶的细胞和组织主要有淋巴细胞与肺组织[4]。结核引起的细胞免疫由T淋巴细胞介导，腺苷脱氨酶不断释放入血，因此腺苷脱氨酶在胸腔积液的含量比较高。结核性胸腔积液中ADA含量明显高于恶性胸腔积液[8-9]。测定胸水中ADA活性不仅对结核性胸膜炎的诊断具有重要意义，而且对渗出液的鉴别诊断具有非常重要的参考价值[10]。本文结核性胸膜炎患者胸腔积液ADA敏感性87.50%，特异性88.09%，与文献报道基本一致[11]。腺苷脱氨酶用于结核性胸膜炎的早期诊断具有重要的价值，能够提高诊断的特异性，目前已被广泛应用。

酶联免疫斑点试验是一种新型的免疫学技术，从单细胞水平检测分泌抗体细胞或分泌细胞因子细胞，由ELISPOT发展而来的T-SPOT.TB技术用于检测结核感染后特异性T细胞分泌的90%以上，且r干扰素对结核的特异性和敏感性均非常高；T-SPOT.TB检测只与外周血液中结核特异抗原刺激产生效应T细胞有关，与感染部位无关，采血简便易行，实验室血液检查2 d可得到检验结果，可使患者得到早期诊断与及时治疗。因肺外结核不容易得到细菌学证据，T-SPOT.TB检测的优势亦加明显。

2008年Pai等[12]对T细胞IFN-r释放试验的应用研究进行了综述， T-SPOT.TB总的敏感性为90%（86%～93%），总特异性为93%（86%～100%）。霍菲菲等[11]对肺外结核的研究结果提示T-SPOT.TB对肺外结核诊断的敏感性为93.5%。杜岩清等[14]对结核性胸膜炎的研究结果提示T-SPOT.TB在结核性胸膜炎的诊断中敏感性91.9%，特异性90.6%，诊断准确率91.3%。本组研究提示其敏感性为89.28%，特异性为92.85%，与国内外报道相当。T-SPOT.TB是结核性胸膜炎良好的实验室诊断手段。

ADA等单项指标用于鉴别诊断时都存在假阳性和假阴性，只分析一个指标是不足于有效鉴别胸腔积液的性质[15]，而联合检测可以提高胸腔积液性质的确诊率。本组资料显示：胸腔积液ADA联合T-SPOT.TB检查阳性率（95.54%）与T-SPOT.TB（89.28%）及胸腔积液ADA（87.50%）阳性率比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

综上所述，T-SPOT.TB技术简便、快速，有较高的敏感性和特异性，胸腔积液ADA也具有较高的敏感性和特异性，两种方法联合检测可提高结核性胸膜炎诊断率，能为结核性胸膜炎的诊断提供很好的依据，是结核性胸膜炎较好的实验室诊断手段，具有较高的应用价值和广阔的应用前景。

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The Value of Adenosine Deaminase from Pleural Effusions and T-SPOT in Diagnosis of Tuberculous Pleurisy/

HUANG Hong-li，SHI Cheng-hong.//Medical Innovation of China，2015，12（08）：010-012

Objective：To study the value of adenosine deaminase from pleural effusions and T-SPOT in diagnosis of tuberculous pleurisy.Method：Selected 112 cases of tuberculous patients as the observation group，42 cases of patiens with non-tuberculous exudative pleural effusion to the control group， two groups of patients were detected both ADA and T-Spot.Result：Two groups of patients with Pleural effusion test results，the sensitivity of ADA and T-Spot were 87.50% and 89.28%，respectively.The specificity of ADA and T-Spot were 88.09% and 92.85%.Combination of two methods of detection positive rate was 95.54%.Two detection methods there was statistically different （P＜0.05）. Conclusion：Combination of two methods can improve the positive rate，the diagnosis of tuberculous pleurisy provide a good basis，a better laboratory diagnostic tool，has a high value and broad application prospects.

ADA； T-Spot； Tuberculous pleuritis； Diagnosis

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.08.004

2014-10-21） （本文编辑：陈丹云）

①昆明市第三人民医院 云南 昆明 650041

黄红丽

First-author’s address：The Third People’s Hospital in Kunming， Kunming 650041，China