高效液相色谱法测定饲料添加剂中糖精钠含量

潘 城， 黄永辉， 黄何何， 谢 勇， 胡朝阳， 高 希

（福建省产品质量检验研究院，福建福州 350002）

糖精化学名为邻磺酰苯甲酰胺，是一种人工甜味剂。糖精钠以钠盐的形式存在，呈无色至白色结晶，易溶于水，无臭或微有芳香味，在生物体内不被分解。糖精钠属于食品添加剂，在味觉上能引起甜味，但对生物体没有任何营养价值。当食用过多的糖精时，会影响肠胃消化酶的分泌，同时降低了小肠的吸收功能，使食欲降低 （晓唐，2004）。研究表明，糖精钠会引起生理性质的变化，具有致癌作用（刘宁和沈明浩，2007）。

目前，对糖精钠的测定方法包括分光光度法（周彤和戈早川，1999）、薄层色谱法（叶蔚云和罗健，1997）、毛细管电泳法（衷明华和李云，2009）、高效液相色谱法（谢丽琪等，2003；尹艳春和李智红，2003）、离子色谱法（卜宇宏等，2011）以及液相色谱-质谱法（秦昉等，2005）等。分光光度法、薄层色谱法和毛细管电泳法容易产生假阳性，不能准确定量，而且耗时较长；液相色谱-质谱法具有很高的特异性，能够准确地进行定性与定量，但费用高，无法普遍使用；高效液相色谱法具有分离效率高，选择性好，检测灵敏度高等特点，是常用的检测方法。本实验采用高效液相色谱法建立简单、快速、准确的饲料添加剂中糖精钠分离检测技术。该方法的建立可为饲料添加剂中糖精钠的合理、应用提供有效的技术支撑。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 Waters 2695高效液相色谱仪配光电二极管阵列检测器 （美国Waters公司）；DS-8510超声波发生器 （上海生析超声仪器有限公司）；Milli Q超纯水制备器（美国Milipor公司）。

甲醇，色谱纯，山东禹王实业有限公司；其他试剂为分析纯。糖精钠（纯度≥98.0%），购于美国sigma试剂公司。

1.2 标准储备液和工作溶液配制 标准储备液的配制：准确称取糖精钠标准品0.1 g，用超纯水溶解并定容至100 mL，配制成浓度为1.0 mg/mL的标准储备液。

标准工作液的配制：将糖精钠标准储备液采用逐级稀释的方法配制成浓度为0.01～0.5 mg/mL系列标准工作溶液，所有标准储备液和标准工作溶液均置于0～4℃冰箱中保存。

1.3 样品前处理 称取饲料添加剂样品0.01 g于100 mL的烧杯中，加入50 mL超纯水，于超声波振荡器中超声萃取20 min后，转移至100 mL容量瓶中，加入200 g/L乙酸锌溶液和100 g/L亚铁氰化钾溶液各1 mL沉淀蛋白，超纯水混匀定容至刻度。提取液经10000 r/min离心5 min后，取上清液，以0.45 μm滤膜过滤，滤液供分析用。

1.4 色谱条件 色谱柱：C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，美国 Welch 公司）；柱温：35 ℃；检测波长230 nm；流速 1.0 mL/min；进样量 10 μL。 流动相A：甲醇；流动相B：20 mmol/L乙酸铵溶液。梯度洗脱程序：0～ 13 min，7%A；13～13.5 min，7%A 线性增长至 60%A；13.5～15min， 保持 60%A；15～15.5 min，60%A 线性降低至 7%A；15.5～ 20 min，保持7%A。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件优化 C18色谱柱以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS），固定相较为稳定，被广泛运用。本方法采用C18柱可以很好地将糖精钠与其他化合物分离。同时实验比较了甲醇-水和甲醇-乙酸铵 （20 mmol/L）溶液两种流动相体系，在甲醇-乙酸铵（20 mmol/L）溶液流动相体系下，目标物糖精钠具有更好的峰形，因而选择后者作为流动相。糖精钠标准溶液色谱图、饲料添加剂样品色谱图和饲料添加剂样品加标色谱图见图1。

2.2 前处理条件优化 糖精钠具有较好的水溶性，实验结合超声波振荡器可充分萃取饲料添加剂样品中的糖精钠。提取液中的蛋白质等化合物可能会对测定样品中的糖精钠产生干扰，实验通过选用乙酸锌和亚铁氰化钾作为沉淀剂，降低了其他化合物对检测准确性的影响。

图1 糖精钠标准溶液色谱图（A）、饲料添加剂样品色谱图（B）和饲料添加剂样品加标色谱图（C）

2.3 线性方程、线性关系、检出限及定量限 配制糖精钠系列标准工作溶液，浓度为0.01～0.5 mg/mL，以糖精钠的峰面积对浓度进行线性回归，线性方程、相关系数、检出限及定量限见表1。结果表明，糖精钠为0.01～0.5 mg/mL时具有很好的线性关系，相关系数R为1.0000。以3倍信噪比（S/N=3）为检出限，以10倍信噪比（S/N=10）为定量限，糖精钠的检出限为1.5 mg/g，定量限为5 mg/g。

表1 回归参数和最低检测限

2.4 回收率和精密度 在优化后的测试条件下，取空白饲料添加剂样品进行加标回收率测试，加标水平分别为255、510、100 mg/g，每个水平重复分析3次，结果见表2。从表2可知，该方法的加标回收率为88.2%～98.6%，相对标准偏差RSD为0.4%～3.0%，结果表明，该方法适用于饲料添加剂中糖精钠的日常分析检测。

表2 糖精钠加标回收率实验结果

3 结论

本实验采用超声萃取法结合高效液相色谱-光电二极管阵列检测器，建立了饲料添加剂中糖精钠含量的测定方法。该方法操作简单，准确可靠，灵敏度高，适用于饲料添加剂样品中糖精钠含量的测定。

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