细胞毒素相关蛋白毒力型幽门螺杆菌感染与冠心病患者血清炎性因子及同型半胱氨酸水平的相关性研究*

沈云峰，胡远贵，张洪波

细胞毒素相关蛋白毒力型幽门螺杆菌感染与冠心病患者血清炎性因子及同型半胱氨酸水平的相关性研究*

沈云峰，胡远贵，张洪波

目的： 探讨幽门螺杆菌（HP）及细胞毒素相关蛋白毒力型HP（HP-CagA）感染对冠心病患者血清炎性因子及同型半胱氨酸（Hcy）水平影响以及HP-CagA感染与冠心病的相关性。

方法：应用酶联免疫吸附分析法测定105例冠心病患者（冠心病组）和76例同期住院非冠心病患者（对照组）的血清HP特异性IgG抗体及其CagA特异性IgG抗体；采用乳胶增强散射免疫比浊法测定血清高敏C反应蛋白（hs-CRP）；采用化学发光法测定血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α） 、白细胞介素-6 （IL-6）和Hcy水平，并比较HP感染的冠心病患者与非HP感染患者之间的差异，以及HP-CagA-IgG阳性患者与HP-CagA-IgG阴性患者之间的差异。应用多元Logistic回归分析危险因素对冠心病的影响，用调整后的比值比（OR）和95%可信区间（CI）评估HP抗体阳性对患冠心病的危险性。

结果：冠心病组与对照组HP-IgG抗体的阳性率分别为52.3%和35.5%，差异有统计学意义（P＜0.05）；冠心病组血清hs-CRP、TNF-α、IL-6和Hcy水平高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；冠心病组HP-IgG阳性患者中，HP-CagA-IgG阳性患者hs-CRP、TNF-α、IL-6和Hcy血清浓度水平高于HP-CagA-IgG阴性患者 （P均＜0.05）。应用Logistic多元回归分析，在排除其他传统因素后，HP-IgG阳性和HP-CagA-IgG阳性对患冠心病存在相对危险性（OR=2.278，3.297； 95%CI：1.20～4.32，1.50～7.27；P=0.012，0.003）。

结论：冠心病的发生可能与HP感染有关系， HP-CagA感染可能通过刺激机体产生更多的炎性因子和Hcy，加快冠心病的发生、发展，是冠心病的危险因素之一。

幽门螺杆菌；细胞毒素相关蛋白A；冠心病；高敏C反应蛋白；肿瘤坏死因子-α；白细胞介素-6；同型半胱氨酸

Methods: Our research included 2 groups: CAD group, n=105 and Control group, n=76 patients without CAD. The serum Hp-IgG antibody and HpCagA-IgG antibody were measured by ELISA. Blood levels of Hs-CRP, TNF-α, IL-6 and Hcy were examined and compared between 2 groups. The differences between CAD patients with HP infection and without HP infection were compared, and the differences between CAD patients with positive HPCagA-IgG and negative HPCagA-IgG were compared Logistic regression analysis was conducted to study the risk factors of CAD, the adjusted OR and 95% CI were used to evaluate the positive Hp for CAD risk.

Results: The positive rate of HP-IgG in CAD group and Control group were 52.3% and 35.5%; compared with

Control group, CAD group had the increased levels of Hs-CRP, TNF-α, IL-6 and Hcy; in CAD group, the patients with positive HP-IgG showed the higher levels of Hs-CRP, TNF-α, IL-6 and Hcy than those with negative HP-IgG, and the patients with positive HpCagA-IgG presented the higher levels of Hs-CRP, TNF-α, IL-6 and Hcy than those with negative HPCagA-IgG, all P＜0.05. Logistic regression analysis indicated that with adjusted traditional risk factors, the positive HP-IgG and positive HpCagA-IgG were the risk factors for CAD (OR=2.278, 95% CI 1.20-4.32, P=0.012 and OR=3.297, 95% CI 1.50-7.27, P=0.003).

Conclusion: HP infection might be related to CAD, and the patients with HP infection and positive HPCagA-IgG could have CAD occurrence and development.

(Chinese Circulation Journal, 2015,30:119.)

近年来，幽门螺杆菌（HP）与冠心病的发病及其进展中的关系越来越受到国内外学者关注，但具体机制尚不清楚，可能与炎症、免疫反应、高同型半胱氨酸血症等因素有关[1-5]。HP有尿素酶基因（UreA）、细胞毒素相关蛋白（CagA）、空泡细胞毒素基因（VacA）等多种毒力基因型，其中HP-CagA是HP引起冠心病的主要毒力因子之一，在动脉粥样硬化的发病中起到重要作用[6,7]。本文旨在探讨冠心病患者HP及HP-CagA的感染状况以及了解HP-CagA感染者血清炎性因子和同型半胱氨酸水平，间接证实HP-CagA感染与冠心病发生的相关性。

1 资料与方法

研究对象：选择2012-07至2013-07在我院心血管科住院治疗患者共105例，采用选择性冠状动脉造影，左主干、左前降支、左回旋支及右冠状动脉至少一支狭窄程度≥50%者诊断为冠心病，其中男性65例，女性40例，平均年龄为（67.9±11.8）岁。对照组76例为同期住院非冠心病患者，其中男性46例，女性30例，平均年龄（64.6±12.5）岁。所有研究对象均排除消化系统疾病、近期各种急性感染、贫血和抗HP治疗等。两组具有可比性。

方法：①标本收集：所有研究对象清晨空腹，常规无菌采集静脉血，分离血清，-20℃贮存待测。②标本检测：应用酶联免疫吸附法测定患者血清中抗 HP-IgG型抗体和抗HP-CagAIgG型抗体，试剂分别为北京贝尔有限公司和上海酶联生物科技有限公司出品。血清高敏C反应蛋白（hs-CRP）采用乳胶增强散射免疫比浊法，采用美国Dade Behring公司产特定蛋白分析仪（BN．Prospect）及原装配套试剂。采用化学发光法测定血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α） 、白细胞介素-6 （IL-6）和同型半胱氨酸（Hcy）。仪器采用西门子公司生产的IMMULITE 1000全自动化学发光仪和ADVIA Centaur XP全自动化学发光仪，检测试剂由西门子公司配套提供。全部操作按仪器规程和试剂说明书提供的操作步骤进行，全部项目均在质控范围内。

统计学分析：采用SPSS 16.0统计软件分析数据，主要统计指标均进行正态性检验，符合近似正态分布，计量资料均以x±s表示，各组间均数比较采用单因素方差分析；应用卡方检验统计组间的感染率有无统计学差异。应用多元Logistic回归分析危险因素对冠心病的影响，调整后的比值比（OR）和95%可信区间（CI）用于评估HP抗体阳性对患冠心病的危险性。校准水准α=0.05，P＜0.05为差异有统计学意义。

表1 两组一般临床资料的比较

2 结果

冠心病组与对照组一般临床资料比较：两组在年龄、性别、吸烟史、是否合并高血压和糖尿病及高脂血症等基本资料的比较，差异无统计学意义（P均＞0.05）。 表1

两组HP感染阳性率、hs-CRP、IL-6、TNF-α、Hcy含量的比较：冠心病组和对照组中的HP感染阳性率分别为52.3%和35.5%，冠心病组明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。冠心病组血清中的hs-CRP、IL-6、TNF-α、Hcy含量也明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01） 。表2

表2 两组HP感染阳性率及hs-CRP、IL-6、TNF-α、Hcy含量比较

表2 两组HP感染阳性率及hs-CRP、IL-6、TNF-α、Hcy含量比较

注：HP：幽门螺杆菌 hs-CRP：高敏C反应蛋白 IL-6：白细胞介素-6 TNF-α：肿瘤坏死因子-α Hcy：同型半胱氨酸

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HP-CagA感染对冠心病的影响：将冠心病组患者根据HP-IgG和HP-CagA-IgG检测结果进行比较：HP-IgG+/HP-CagA-IgG+者31例、HP-IgG+/ HP-CagA-IgG-者24例、HP-IgG-/HP-CagA-IgG-者50例，在HP-IgG阳性患者中，HP-CagA-IgG阳性患者血清Hs-CRP、TNF-α、IL-6、Hcy的含量较HP-CagA-IgG阴性患者升高，差异有统计学意义（P＜0.01）， 在HP-CagA-IgG阴性患者中，HPIgG阳性患者血清hs-CRP、TNF-α、IL-6、Hcy的含量较HP-IgG阴性患者升高，差异有统计学意义（P＜0.01）。表3

表3 冠心病组患者hs-CRP、IL-6、TNF-α、Hcy含量比较（

表3 冠心病组患者hs-CRP、IL-6、TNF-α、Hcy含量比较（

注：与HP-IgG+/HP-CagA-IgG-者比较*P＜0.01；与HP-IgG-/HP-CagA-IgG-者比较△P＜0.01。CagA：细胞毒素相关蛋白。 余注见表2

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HP-IgG阳性和HP-CagA-IgG阳性对患冠心病的危险性分析：以患有冠心病为因变量，以年龄、性别、合并高血压、合并糖尿病、吸烟史、体重指数、甘油三酯、总胆固醇、HP-IgG阳性和HP-CagA-IgG阳性为自变量，应用Logistic多元回归分析危险因素，在排除传统因素后，HP-IgG阳性和HP-CagA-IgG阳性对患冠心病相对危险性的比值比分别为2.278和3.297，表明HP-IgG阳性和HP-CagA-IgG阳性是罹患冠心病的危险因素之一，而且HP-CagA-IgG阳性（OR=3.297，95%CI：1.50～7.27）比HP-IgG阳性（OR=2.278，95%CI：1.20～4.32）相对危险度更大（P＜0.05）。表4

表4 Logistic回归分析结果

3 讨论

1994年，Mendall等[8]首次报道HP可能与冠心病发生有关，国内外学者开始对冠心病与HP之间的关系和相关发病机理进行了大量研究。目前，许多实验表明HP的感染与冠心病的发生有密切关系，绝大多数学者认同了两者之间的关系。HP具有较强的感染性，通过人与人直接或间接接触传播，HP感染可直接作用于动脉壁，引起局部炎症，诱发炎症因子大量产生，促使内皮细胞损伤或功能障碍，平滑肌细胞增殖，促进凝血，促使同型半胱氨酸积聚，最终导致动脉粥样硬化的形成和发展，导致冠心病[9，10]。从本文研究结果可以显示：冠心病组HP感染阳性率和对照组中的感染阳性率分别为52.3%和35.5%，冠心病组HP感染阳性率明显高于对照组，可以间接证实冠心病与HP感染相关。

同时研究发现HP的致病作用与不同的毒力因子有关。Pasceri等[11]报道细胞毒素相关蛋白A是HP的主要毒力因子。Franceschi等[12]发现，多克隆CagA抗体与人正常脐静脉组织和动脉硬化组织中的平滑肌细胞、内皮细胞表面抗原发生交叉反应，在动脉硬化形成过程中，内皮细胞功能受损，平滑肌细胞和成纤维细胞大量增殖，导致了动脉粥样硬化发展。CagA阳性菌株的脂多糖是一种特殊的内毒素，其增强的毒力和细胞毒性产物可能与冠心病相关。HP感染后可能通过致病因子CagA基因启动炎症过程诱发动脉粥样硬化的发生与发展[13，14]。本文研究应用Logistic多元回归分析冠心病危险因素的影响情况显示，在排除年龄、性别、高血压、糖尿病、吸烟史、体重指数、甘油三酯、总胆固醇等传统因素后，HP-IgG阳性和HP-CagAIgG阳性对患冠心病相对危险性的比值比为2.278和3.297，说明HP-IgG和HP-CagA-IgG阳性均为冠心病的独立危险因子，并且HP-IgG、HP-CagA-IgG均阳性的危险性明显高于仅HP-IgG阳性者，差异有统计学意义（P＜0.05），说明HP-CagA感染与冠心病的发生关系密切。

CagA型HP感染后，诱导抗原引起自身免疫反应以及全身性或动脉局部炎症反应，可能通过产生高敏C反应蛋白，促使补体的激活，从而诱导组织因子和细胞粘附因子的表达，介导内皮巨噬细胞吞噬低密度脂蛋白，使单核细胞粘附到血管壁并促进

TNF-α、IL-6和内皮素等炎性因子的分泌，参与动脉粥样硬化的形成和发展。hs-CRP是一种非特异性急性时相反应蛋白，机体受到炎症状态刺激时由肝细胞大量合成，其本身具有补体作用，是动脉粥样硬化的启动因子之一，可促进补体激活导致免疫损伤。TNF-α是由激活的单核细胞、巨噬细胞及Thl细胞产生的一种非糖基化转膜蛋白，具有多种生物学效应，参与内皮细胞损伤，促进炎性细胞的聚集和炎性递质释放，可导致炎症、细胞坏死，引起血管壁的损伤，因而它具有促进动脉硬化形成的作用。TNF-α可作为预测冠心病患者病情严重程度及动脉粥样硬化斑块不稳定性指标。IL-6主要来源于活化的单核细胞、纤维母细胞和内皮细胞，是肝脏释放急性期蛋白的最强刺激因子，TNF-α和IL-6作为重要的初级炎症因子，是在损伤反应时由巨噬细胞、单核细胞、内皮细胞等释放的多肽类物质。在炎症期间IL-6与TNF-α可以相互作用，TNF-α可促使IL-6的产生和释放，但IL-6又可以对它发挥调节作用[15-18]。本研究结果显示：冠心病组hs-CRP、TNF-α和IL-6水平高于对照组，在HP阳性感染的冠心病患者中，HP-CagA-IgG阳性患者血清hs-CRP、IL-6和TNF-α水平显著高于HP-CagA-IgG阴性患者，hs-CRP、IL-6和TNF-α浓度分别达到了（10.1±1.3） mg/L， （19.5±3.0） ng/L，（28.8±3.2）ng/L，可能是CagA型HP感染后通过刺激机体产生更多的hs-CRP、TNF-α和IL-6等炎性因子，从而引发了冠状动脉粥样硬化，间接证实了CagA型HP菌株感染可影响冠心病的发生与发展。

同型半胱氨酸是一种含巯基的氨基酸，为蛋氨酸循环过程中的正常代谢产物。当体内同型半胱氨酸代谢紊乱，浓度升高，就会形成同型半胱氨酸巯基内酯，可与低密度脂蛋白形成复合体，随后被巨噬细胞吞噬，形成堆积动脉粥样硬化斑块上的泡沫细胞，从而加速动脉粥样硬化的过程，Hcy作用于内皮细胞，细胞内氧自由基的产生和一氧化氮的降解，最终导致内皮细胞功能障碍，诱发并加重心血管事件发生[19]。本实验结果提示：HP感染与Hcy水平有着密切的关系，冠心病组Hcy水平高于对照组，在HP阳性感染的冠心病患者中，HP-CagA-IgG抗体阳性患者血清Hcy水平显著高于HP-CagA-IgG抗体阴性患者，Hcy浓度达到了（22.6±2.0）μmol/L。HP感染可能通过影响Hcy水平而在冠心病的发生、发展中起着一定的作用。

综上所述，冠心病的发生可能与HP感染有关，CagA阳性的 HP感染可能诱发更多的炎症因子释放和Hcy水平升高，增加罹患冠心病的风险，成为冠心病的危险因素之一。

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Relationship Between Helicobacter Pylori Infection and Inflammatory Cytokines, Homocysteine in Patients With Coronary Artery Disease

SHEN Yun-feng, HU Yuan-gui, ZHANG Hong-bo.
Department of Clinic Laboratory, Wuhan No.6 Hospital, Wuhan (430015), Hubei, China

Objective: To study the relationship between helicobacter pylori (HP) infection and inflammatory cytokines, homocysteine (Hcy) in patients with coronary artery disease (CAD), and the relationship between cytotoxin associated protein A toxins of HP (HPCagA) and CAD occurrence.

Helicobacter pylori; Cytotoxin associated protein A; Coronary Artery disease; Hs-CRP; TNF-α; IL-6; Hcy

2014-05-24）

（编辑：汪碧蓉）

武汉市卫生局临床医学科研项目（编号：WX11B14）

430015 湖北省，武汉市第六医院 检验科

沈云峰 副主任技师 硕士 主要从事临床免疫学工作 Email： 2940778780@qq.com 通讯作者：胡远贵 Email：wuhanliuyiyuan@hotmail.com

R54

A

1000-3614( 2015 )02-0119-04

10.3969/ j. issn. 1000-3614. 2015.02.006