真性红细胞增多症患者血清快速分离条件探讨

门万琪，孙礼权，陈晓宇

(安徽医科大学第四附属医院检验科，安徽合肥 230022)

离心技术应用广泛，主要根据物质粒子作匀速圆周运动，同时受到一个向外的离心力的过程而发展起来的一种分离技术，一般实验室使用常规低速离心机制备符合实验要求的血清标本，但临床工作中常能遇到一些特殊类型标本，如真性红细胞增多症(polycythemia vera，PV)患者标本在使用常规离心手段时，不能产生足够试验用量的血清，需要反复离心，即浪费宝贵检验时间，也可能会影响检验结果，尤其是血糖的结果［1］，这可能因为PV患者红细胞数量多，血液黏度大，标本前处理时间过长，会影响一系列生化检测结果的准确性。由于使用常规3 000～3 500 rpm转速的离心方法很难取得足够临床生化、免疫等检查所需的血清，本文即探讨怎样快速、简便、有效的分离PV患者标本，方便临床实验室实际工作的开展。

1 资料

1.1 一般资料 随机选取2012年9月1日—2013年3月31日安徽医科大学第四附属医院收治的PV患者12例，早晨空腹采集全血。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 用普通生化管采集检测对象清晨空腹静脉血，37℃水浴箱放置20 min，分离血清。所有试验对象均在采血后立即送检，各指标均在3 h内检测完毕。

1.2.2 分离血清 将采集的每个病人的血标本分成4组，均置37℃水浴箱20 min，使用中佳KDC－28型低速离心机，第一组采用3 000 rpm转速，第二组采用3 500 rpm转速，第三组采用4 000 rpm转速，第四组采用4 500 rpm转速，以上各组均离心5 min，取其血清。

1.2.3 生化指标测定 采用德国SIEMENS Dimention全自动生化仪，试剂由SIEMENS公司提供。按操作说明书进行操作。测试的生化指标包括下列常用的16项:总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、总胆红素(TBiL)、直接胆红素(DBiL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰转肽酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、尿酸(URCA)、葡萄糖(GLU)、钾(K)、钠(Na)、氯(Cl)、钙(Ca)。

1.3 结果判断 在使用不同离心速度条件下产生的血清检测的生化指标，其结果是否具有统计学差异。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0软件进行统计学分析，计量资料采用(±s)表示，采用单因素方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 比较不同离心速度分离血清的效果 4 500 rpm离心速度下有3支标本发生溶血(1/4标本发生溶血，不采用此方法)，3 000 rpm 组平均产生 315.8 μL 血清、3 500 rpm 组平均产生 448.3 μL 血清、4 000 rpm 组平均产生 723.3 μL血清，见表1。

2.2 比较不同离心速度对生化检测指标的影响 取不同离心速度分离后的血清做生化检测，比较各项检测指标，差异没有统计学意义(P＞0.05)，见表2。

表1 3 000 rpm组、3 500 rpm组与4 000 rpm组血清离心效果比较(血清产生量μL/5 mL标本)

表2 3 000 rpm组、3 500 rpm组与4 000 rpm组血清生化指标比较(n=12，±s)

表2 3 000 rpm组、3 500 rpm组与4 000 rpm组血清生化指标比较(n=12，±s)

注:3 000 rpm组，3 500 rpm组，4 000 rpm，三组相比，P ＞0.05 。

项目 3 000 rpm组 3 500 rpm组 4 000 rpm组F TP/g·L－175.33 ±4.36 75.40 ±4.27 75.43 ±4.28 3.31 ALB/g·L－1 42.21 ±1.36 42.19 ±1.39 42.02 ±1.42 2.58 TBiL/μmol·L－1 12.12 ±0.55 12.13 ±0.51 12.17 ±0.59 2.69 DBiL/μmol·L－1 5.31 ±0.26 5.33 ±0.22 5.35 ±0.27 3.31 ALT/U·L－1 47.32 ±2.91 47.30 ±2.66 47.31 ±2.79 3.12 AST/U·L－1 31.75 ±1.87 31.70 ±2.88 31.72 ±4.36 2.54 GGT/U·L－1 36.06 ±2.11 36.05 ±2.48 36.04 ±2.45 3.01 LDH/U·L－1 399.04 ±8.47 399.04 ±8.35 399.03 ±8.16 3.22 BUN/mmol·L－1 5.73 ±0.13 5.79 ±0.12 5.72 ±0.12 3.19 CREA/μmol·L－1 73.32 ±3.30 73.31 ±3.51 73.30 ±3.41 2.58 URCA/μmol·L－1 389.31 ±3.55 389.20 ±3.22 389.02 ±3.42 3.29 GLU/mmol·L－1 6.75 ±0.34 6.70 ±0.38 6.72 ±0.39 3.14 K/mmol·L－1 4.15 ±.0.22 4.18 ±0.26 4.14 ±0.25 2.79 NA/mmol·L－1 145.72 ±4.60 145.30 ±4.80 145.20 ±4.80 2.88 CL/mmol·L－1 102.03 ±3.30 102.08 ±3.50 104.08 ±3.55 2.68 CA/mmol·L －12.23 ±0.26 2.26 ±0.21 2.25 ±0.28 2.79

3 讨论

真性红细胞增多症(polycythernia vera，PV)是一种病因不明的原发于造血干/祖细胞的骨髓增殖性疾病(myeloproliferattive disorders，MPD)，以红系造血干细胞异常增殖为主，由于多能造血干细胞克隆性紊乱，导致形态较正常的红细胞、白细胞、血小板及其祖细胞在缺乏特异性刺激因素的条件下也能异常增生并累积，但以红系增生为主［2］。PV临床特点表现为发病缓慢、病程较长、全血容量增多、血沉(ESR)明显缓慢，血液黏滞性增高［3］，可导致成人全身各脏器血流缓慢和组织缺血，及皮肤、黏膜呈红紫色，肝脾肿大等临床症状［4］，还能影响新生儿全身各器官的血流速率，导致缺氧、酸中毒及营养供应减少。PV实验室检查特点是红细胞计数和血红蛋白含量明显升高，红细胞形态通常为小细胞低色素性，网织红细胞(Ret)计数正常，但出血后可升高［5］。常可检测到血小板形态和功能的异常，瑞氏染色薄血片可见成堆的血小板，偶可见巨型和畸形血小板［6］。患者血清LDH水平高于正常值，且与血红蛋白量呈正相关，可通过血清LDH水平反映PV患者骨髓造血细胞的恶性增殖程度及判断预后［7］。通过本次试验可以看出，标本在前处理条件且离心时间相同，仅为离心转速不同的情况下，其16项常规生化指标结果没有显著差异(P＞0.05)，而在4 500 rpm离心速度下标本易溶血，以4 000 rpm速度离心所得血清比3 000或3 500 rpm速度离心所得血清平均多一倍，足够常规生化、免疫检测的使用。这可能是由于PV患者血细胞数量(尤其是红细胞数量)和血液黏度的增加等因素影响，导致使用常规3 000 rpm和3 500 rpm转速的离心方法很难取得足够临床生化、免疫等试验所需的血清。所以在日常工作中遇到PV患者时，可根据临床检测生化、免疫等项目的需要，要求护士抽取2～3管血标本，每管4 mL以上，收到标本后置37℃水浴箱20 min，而后离心时可以将离心机转速调整至4 000 rpm，离心5 min，一般不会导致溶血，且可以得到足够试验用的血清。

［1］谢勇丽，张雅薇，袁拓萍，等.慢性增殖性血液病假性低血糖10例分析［J］.南昌大学学报(医学版)，2011，51(12):56 －58.

［2］叶任高，陆再英 主编.内科学［M］.6版.北京:人民卫生出版社，2006:638.

［3］边红放，殷 丽.血液病与血流变学检测结果分析与探讨［J］.中国血液流变血杂志，2005，15(4):535，565.

［4］郭志雄.真性红细胞增多症26例临床分析［J］.中国实用医刊，2012，39(13):90.

［5］宋 军，史 敏，高占玺，等.真性红细胞增多症与原发性血小板增多症的实验室检查特征［J］.临床检验杂志，2013，31(4):312.

［6］苗 苗，胡 荣，杨 威.真性红细胞增多症转急性髓系白血病1 例［J］.中国实用内科杂志，2012，32(3):325－326.

［7］Xin CH，Xu JQ，Sui JR，et al.Analysis on 71 patients with polycythemia vera［J］.Journal of Experimental Hematology，2012，20(3):667－670.