茶叶中甲基对硫磷的检测

刘超 李英

（乐山市食品药品检验检测中心，四川乐山 614000）

茶叶中甲基对硫磷的检测

刘超 李英

（乐山市食品药品检验检测中心，四川乐山 614000）

本文采用高效液相色谱串联三重四级杆质谱法对绿茶、红茶、普洱茶、乌龙茶中甲基对硫磷进行检测。建立了以Inertsil ODS-3为液相色谱柱，以甲醇、0.1%乙酸水为流动相，质谱使用电喷雾离子源，正离子扫描，以264.0/125.0为定量离子对的LC-MS/ MS检测方法。该方法所测得的甲基对硫磷在0～2.0ng/mL内具有良好的线性，检出限为0.47ng/kg，加标回收率在83.5%～106.3%之间。该方法适合绿茶、红茶、普洱茶、乌龙茶中甲基对硫磷残留量的分析。

茶叶；甲基对硫磷；液相色谱串联三重四级杆质谱

茶，属双子叶植物，约30个属，500个种，分布于热带和亚热带地区。中国有14个属，397种，主要生长于长江以南各地。茶叶含儿茶素、胆甾烯酮、咖啡碱、肌醇、叶酸、泛酸等成分，可以增进人体健康。茶叶是我国传统的经济作物，同时也是我国主要的出口商品之一。近年来，茶叶的农药残留问题日益引起人们的关注，也成了国际贸易中的壁垒。茶叶中有机磷农药残留一般用气相色谱法、高效液相色谱法、气质联用法进行检测[1-3]。气相色谱法检测有机磷农药具有回收率低、稳定性不高等缺点；高效液相色谱法经常遇到灵敏度低、选择性差等问题[4]。而高效液相色谱串联质谱仪则具有灵敏度高、稳定性好等优点，因此在茶叶农残检测中较为常见[5,6]，但用其检测茶叶中的甲基对硫磷在国内鲜有报道。为此，研究高效液相色谱串联四级杆质谱法检测茶叶中甲基对硫磷具有非常重要的意义。

本试验用乙腈提取，用Cleanert TPT小柱净化，以高效液相色谱串联三重四级杆质谱仪测定茶叶中甲基对硫磷残留，具有前处理简单、选择性好、稳定性好、灵敏度高等优点；适用于茶叶中甲基对硫磷的实际检测工作。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

绿茶：碧螺春，犍为县兴顺精制花茶厂，生产日期为2015年07月02日，20℃下保存，保质期为18个月；

红茶：碧潭飘雪，马边荞坝茶叶专业合作社，购买日期为2015年4月24；

普洱：云南普洱茶，云南普洱茶有限公司，购买日期为2015年4月19日；

乌龙茶：铁观音，森秋茶叶有限公司，购买日期为2015年4月27日。

乙腈、甲苯、正己烷、丙酮，均为色谱纯；

无水硫酸钠，用前650℃灼烧4h，储于干燥器中，冷却后备用；

甲基对硫磷，100μg/mL，1mL，GSB05-1870-2008，农业部环境保护科研检测所；

水，GB/T6682规定的一级水。

1.2 仪器与设备

仪器液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源，美国AB公司API3200；

分析天平（精确度0.01mg），德国赛多利斯集团CP225D；

高速组织捣碎机，九阳股份有限公司JYL-C012；

旋转蒸发仪，莱博泰克科技有限公司EV331；

氮吹仪，北京普立泰仪器有限公司EVA50A；

低速离心机，四川蜀科仪器有限公司TD420；

均质器，艾卡仪器设备有限公司T25；

微孔滤膜（尼龙），13mm×0.22μm；

Cleanert TPT固相萃取柱，规格为2.0g/10mL。

1.3 样品的提取

准确称取5.00g经粉碎的绿茶于50mL离心管中，加入10mL乙腈，均质提取1min，4200r/min离心5min，取上清液于50mL比色管中。残渣用10mL乙腈重复提取2次，合并上清液，于40℃氮吹至1mL左右，待净化。

1.4 净化

用10mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）预洗Cleanert TPT固相萃取柱，弃去流出液，下接鸡心瓶，放入固定架上，将样品提取液转移至Cleanert TPT固相萃取柱中，用4mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）分两次洗涤样液瓶，并将洗涤液移入柱中，用25mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）洗涤小柱，收集所有流出液于鸡心瓶中。流出液于40℃水浴中旋转浓缩至约0.5mL，乙腈定容至1mL，供LCMS/MS用。

1.5 色谱条件

1.5.1 液相色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-3（150mm×2.1mm，5μm）；

进样体积：10μL；

流速：0.2mL/min；

柱温：40℃；

流动相：A：甲醇，B：0.1%乙酸，梯度洗脱见表1。

表1 流动相梯度洗脱条件Table 1Mobile phase condition

1.5.2 质谱条件

离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；电喷雾电压：4500V；气帘气：30psi；雾化气压力：30psi；碰撞气：5psi；辅助气：30psi；离子源温度为450℃。

表2 质谱条件Table 2Condition list of rod mass spectrometry

2 结果与分析

2.1 检出限

由自动进样器吸取0.2ng/mL的甲基对硫磷标准工作溶液10μL，注入色谱仪中，平行进样3次，求出仪器检出限的平均值，而后求出方法检出限，结果见表3。

由表3可知，仪器的平均检出限为0.00932ng/mL，方法检出限为1.88ng/kg，可见该仪器和方法灵敏度很高。

表3 甲基对硫磷的检出限Table 3Detection limit of methyl parathion

2.2 线性范围

根据甲基对硫磷的灵敏度，用空白样品提取液分别配成浓度为0ng/mL、0.2ng/mL、0.4ng/mL、0.6ng/mL、0.8ng/ mL、1ng/mL和2ng/mL系列标准溶液。4℃保存，现用现配。此标准系列供LC-MS/MS用，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得标准曲线方程，见图1。

图1 甲基对硫磷标准曲线回归方程：Fig.1Standard curve regression equation of methyl parathion

图1显示，甲基对硫磷标准曲线为y=77978x+386.96，R2值为0.9991，由此可见，甲基对硫磷在0～2.0ng/mL范围内，具有良好的线性。

2.3 回收率

准确称取9份研磨均匀的5.00g空白试样于50mL具塞比色管中，分别准确移取0.02mL、0.03mL、0.04mL浓度为100ng/mL的甲基对硫磷准液标准液各3份至9份试样中，加入10mL乙腈溶液在高度组织捣碎机上以15000r/min匀浆提取1min。4200r/min离心5min，取上清液于50mL比色管中。残渣用10mL乙腈重复提取2次，合并上清液，于40℃氮吹至1mL左右，用10mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）预洗Cleanert TPT固相萃取柱，弃去流出液，下接鸡心瓶，放入固定架上，将样品提取液转移至Cleanert TPT固相萃取柱中，用4mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）分两次洗涤样液瓶，并将洗涤液移入柱中，用25mL乙腈-甲苯（3:1，V/V）洗涤小柱，收集所有流出液于鸡心瓶中。流出液于40℃水浴中旋转浓缩至约0.5mL，乙腈定容至1mL，供LC-MS/MS用。

式中：C1—标准曲线上得到的加标样品的浓度，ng/mL；

C2—标准曲线上得到的样品的浓度，ng/mL；

M—加标质量，ng；

表4 甲基对硫磷加标回收率Table 4Adding standard recovery of methyl parathion

甲基对硫磷方法回收率为83.5%～106.3%，符合GB/T27404-2008实验室质量控制规范食品理化检测中的规定（70%～120%）。

2.4 重复性

准确称取6份研磨均匀的10.00g空白试样于50mL具塞比色管中，分别准确移取0.80mL浓度为10ng/mL的甲基对硫磷标准液，加入30mL乙腈溶液在高度组织捣碎机上以15000r/min匀浆提取1min。以下步骤同1.3、1.4的步骤，得到净化的样品提取液。

由自动进样器吸取净化后的样品溶液10μL，注入色谱仪中，记录色谱图，测定峰面积。计算出RSD值。结果发现，RSD为2.82%，说明该方法重复性良好。

3 实际样品检测

用建立的方法对试验中准备的绿茶、红茶、普洱、乌龙茶进行测定，结果表明：甲基对硫磷在这4种样品中均未检出。原因可能是所测样品是市面上抽检的，为明前茶，由于温度较低，明前茶的农药施用量较少，农残较低，因此未检测出甲基对硫磷。

4 结论

建立了高效液相色谱串联质谱仪检测茶叶中的甲基对硫磷残留，此方法检出限为0.47ng/kg，线性范围为0～2.0ng/mL，方法回收率为83.5%～106.3%，方法精密度为2.82%。因此，所建方法能够满足实际检测的需要。

[1]罗逢健,刘光明,陈宗燮.茶叶中23种农药残留的多检出分析技术[J].现代科学仪器,2003,(1):13-16.

[2]汪庆华,鲁成银.茶叶中多种有机磷农药残留量的测定方法[J].农业质量标准,2003,(6):20-23.

[3]楼国柱,徐倩,白晓荣,等.不同提取剂对茶叶中多种残留检测影响的研究[J].食品科学,2004,25(12):165-168.

[4]叶江雷,弓振斌,林芳,等.茶叶中水胺硫磷、亚胺硫磷、甲基对硫磷和伏杀硫磷农药残留的高效液相色谱法测定[J].厦门大学学报,2007,46(3):41.

[5]白吉洪,张文圣,等.高分子多孔微球富集-HPLC法测定水体中有机磷[J].分析测试学报,1995,14(3):50-53.

[6]乔雄梧,朱九生,李捷.土壤中残留对硫磷和甲基对硫磷的高效液相色谱分析[J].环境化学,1995,14(3):255-257.

Detection of Methyl Parathion in Tea

LIU Chao LI Ying
(Leshan Food and Drug Inspection and Testing Center,Leshan 614000,China)

In this paper,we tested methyl parathion in green tea,black tea,Puer tea,oolong tea with LC-MS/MS method. The method was developed based on novel HPLC column Inertsil ODS-3 with methanol and 0.1%acetic acid as mobile phase,combined with MS,which used positive ion scanning,and quantification ion pair was 264.0/125.0.A good linear in 0～2.0ng/mL was obtained.And the detection limit was 0.47ng/kg.The adding standard recovery was 83.5%～106.3%.This method is suitable for methyl parathion residues analysis in green tea,black tea,Puer tea,oolong tea.

Tea;methyl parathion;LC-MS/MS

O657

A

1008-1038(2015)08-0024-04

2015-04-20

刘超（1984—），男，助理工程师，研究方向为食品安全