齐墩果酸对CCl4诱导小鼠急性肝损伤保护作用的实验研究

郗艳丽，吴启坤，冯 威，张洋婷，宋春梅，马洪波，王舒然

(吉林医药学院公共卫生学院，吉林 吉林132013)

·论 著·

齐墩果酸对CCl4诱导小鼠急性肝损伤保护作用的实验研究

郗艳丽，吴启坤，冯 威，张洋婷，宋春梅，马洪波，王舒然*

(吉林医药学院公共卫生学院，吉林 吉林132013)

目的 研究齐墩果酸对CCl4诱导小鼠急性肝损伤保护作用。方法 30只雄性昆明小鼠随机分成正常对照组、模型组和齐墩果酸组。齐墩果酸组以300 mg/kg齐墩果酸豆油溶液灌胃，模型组和正常对照组以相同剂量的豆油灌胃，共2 d。末次灌胃给药后，模型组和齐墩果酸组按3 mL/kg剂量皮下注射CCl4原液，正常对照组皮下注射同等体积的生理盐水。24 h后处死小鼠，摘取肝脏，比较各组小鼠肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量，并观察肝脏组织的脏器系数及病理学改变。结果 齐墩果酸能显著升高CCl4引起的SOD降低(P＜0.05)，降低CCl4导致的MDA的升高(P＜0.05)。与模型组相比，齐墩果酸组肝脏的脏器系数有下降的趋势，同时减轻了肝脏的病理损害。结论 齐墩果酸对CCl4所引起的急性肝损伤具有一定的保护作用。

齐墩果酸;急性肝损伤;保护作用

齐墩果酸(Oleanolic acid，OA)又名土当归酸，是一类广泛存在于多种植物中的五环三萜类化合物，目前被证实其具有降糖、降脂、抗菌、抗病毒、抗肿瘤及保肝护肝等多种药理作用［1-2］。本实验研究齐墩果酸对四氯化碳(CCl4)诱导的急性肝损伤的保护作用，并探讨其作用机理。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

齐墩果酸购于西安文竹生物科技有限公司(HPLC≥98%)，其他试剂为国产分析纯。722型分光光度计:中国厦门分析仪器厂;离心机(TDZ5-WS):湖南湘仪离心机仪器有限公司;电子天平(BS224S):北京赛多利斯;电动玻璃匀浆机(DY89-Ⅱ):宁波新芝生物科技股份有限公司。尼康科研级正置荧光显微成像系统;Leica半自动轮转式切片机(RM2245);Leica组织包埋机(EG1150H+C)。

1.2 动物分组及给药方法

30只健康雄性昆明小鼠，普通级，体重(27±2) g，购于吉林大学动物室。全部动物随机分成3组，每组10只，分别为正常对照组、模型组和齐墩果酸组。齐墩果酸组给予齐墩果酸豆油溶液(300 mg/kg)灌胃。正常对照组和模型组以等体积豆油灌胃，1次/ d，连续2 d，末次给药后30 min，模型组和齐墩果酸组均皮下注射CCl4原液(3 mL/kg)，禁食，不禁水。正常对照组皮下注射同等剂量的生理盐水。24 h后处死小鼠。取肝脏备检。

1.3 肝脏脏器系数的测定

称量每只小鼠活体重，处死后称量肝脏湿重。肝脏脏器系数 =肝脏湿重(g)/小鼠活体重(g)× 100%。

1.4 病理组织学检测

切取肝脏右叶置于10%福尔马林溶液中固定，脱水，石蜡包埋，切片，HE染色并镜检。

1.5 超氧化物歧化酶检测

切取肝脏左叶0.5 g，加入4.5 mL生理盐水，置于电动玻璃匀浆机制备成10%的肝脏组织匀浆。1 500 rpm持续 1 min，研杵上下移动 15次。3 000 rpm离心10 min，取上清，邻苯三酚法检测肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)含量。

1.6 丙二醛检测

切取肝脏左叶0.5 g，加入4.5 mL 150 mmol/L KCl溶液，置于电动玻璃匀浆机制备成10%的肝脏组织匀浆。1 500 rpm持续1 min，研杵上下移动15次。3 000 rpm离心10 min，取上清，硫代巴比妥酸法检测肝组织匀浆中丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量。

1.7 统计学方法

2 结果

2.1 齐墩果酸对小鼠肝脏脏器系数的影响

由表1可知，模型组与正常对照组的肝脏脏器系数经方差分析比较差异有统计学意义(P＜0.05)，模型组肝脏的脏器系数高于正常对照组，说明利用CCl4所制备的急性肝损伤模型造模成功。利用齐墩果酸提前干预的齐墩果酸组的肝脏脏器系数与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)，与模型组比较差异也无统计学意义(P＞0.05)，但是齐墩果酸组的肝脏脏器系数明显地低于模型组，而与正常对照组比较，略有增高。这一结果表明，齐墩果酸对CCl4诱导的急性肝损伤有一定的保护作用。

表1 齐墩果酸对小鼠肝脏脏器系数的影响

2.2 肝脏的病理改变

光镜下可见正常对照组肝小叶结构正常，未见肝细胞肿胀、病变以及坏死。模型组肝脏细胞可见明显的肿胀，体积增大，伴有炎性细胞浸润。齐墩果酸组部分肝脏细胞可见肿胀，与模型组比较，细胞体积虽有增大，但不明显，正常肝细胞数目较多。

2.3 齐墩果酸对小鼠肝脏SOD含量的影响

模型组与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，模型组SOD活性与对照组相比明显降低。齐墩果酸组与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。齐墩果酸组与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，齐墩果酸组SOD活性与模型组相比明显升高。SOD活性检测结果表明，齐墩果酸可以改善由CCl4所引起的SOD活性降低，提高动物机体的抗氧化能力(图1)。

2.4 齐墩果酸对小鼠肝脏MDA含量的影响

模型组与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，模型组肝脏MDA含量与对照组相比明显升高。齐墩果酸组与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。齐墩果酸组与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，齐墩果酸组肝脏MDA含量与模型组相比明显降低。MDA含量检测结果表明，齐墩果酸可以改善由CCl4所引起的MDA水平降低，抑制由CCl4导致的氧化损伤(图2)。

图1 齐墩果酸对小鼠肝脏SOD含量的影响

图2 齐墩果酸对小鼠肝脏MDA含量的影响

3 讨论

肝损伤模型的造模方法有很多种，其中由CCl4诱导的急性肝损伤模型是最常见的肝损伤模型之一。造模原理是由于CCl4易溶解脂肪，是一种非常典型的肝脏毒物。CCl4进入体内后，会引起细胞的脂质过氧化损伤，其中由磷脂双分子层组成的细胞膜结构和功能受损严重，引起细胞膜的通透性增高，最终导致肝细胞出现肿胀，甚至是坏死，出现急性肝损伤的症状［5-6］。本实验所制备的急性肝损伤模型组，其肝脏的脏器系数明显高于正常对照组，且组织切片检测结果表明肝脏细胞出现了肿胀，这表明由于CCl4的作用导致肝脏出现了炎性浸润的症状，细胞膜的通透性增加，进而导致了肝脏的脏器系数增高，这一结果与前人的研究结果一致［7］。

SOD是生物体内清除自由基的重要物质，能够对抗自由基对细胞造成的氧化损伤，并能够使受损的细胞修复，可作为急性肝损伤的检测指标之一。当机体受到自由基损伤以后，SOD的生物活性会受到影响，导致活性降低。CCl4作用于机体后会导致机体内自由基含量升高，SOD活性降低。实验小鼠提前给予齐墩果酸作用后，当接触CCl4后对机体产生了一定的保护作用，SOD的活性受CCl4的影响不大。

MDA是生物体脂质发生氧化反应的终产物，其具有细胞毒性作用。因此，MDA的大量产生表明体内受大量自由基作用。CCl4作用实验小鼠以后，模型组MDA的含量明显高于正常对照组，表明CCl4已经造成了急性肝损伤，模型制备成功。齐墩果酸组MDA的含量与对照组相比明显下降，表明齐墩果酸对CCl4诱导的急性肝损伤有保护作用。齐墩果酸可能是通过清除氧自由基、抑制脂质过氧化反应，起到保护肝脏的作用。提前服用齐墩果酸，可以避免肝脏的急性损伤，尤其是氧化应激引起的急性损伤。齐墩果酸在保肝、护肝方面具有很大的开发前景。

［1］ 张小丽，韦晟.齐墩果酸对大鼠星形胶质细胞糖原代谢的影响［J］.中国临床药理学杂志，2013，29(4):293-295.

［2］ 董静，李明珠，毕克滨，等.原位末端标记法检测齐墩果酸诱导细胞凋亡的实验研究［J］.中医药信息，2013，30 (3):134-135.

［3］ 熊筱娟，陈武，肖小华，等.乌索酸与齐墩果酸对小鼠实验性肝损伤保护作用的比较［J］.江西师范大学学报:自然科学版，2004，28(6):540-543.

［4］ 罗奕，刘文.齐墩果酸对四氯化碳所致大鼠肝纤维损伤的保护作用［J］.中国药师，2014，17(3):378-381.

［5］ 林冬静，金政.决明子提取物对急性肝损伤保护作用的实验研究［J］.时珍国医国药，2006，17(2):214-215.

［6］ 陈红霞，吴咖，黄仁彬，等.相思藤总黄酮对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用及机制［J］.广西医学，2012，34 (2):138-141.

［7］ 路朋，曾阳，郭凤霞，等.丝毛飞廉总黄酮对CCl4肝损伤的保护作用［J］.青海师范大学学报:自然科学版，2010 (2):42-43.

The protective effects of oleanolic acid against carbon tetrachloride-induced acute liver injury in m ice

XIYanli，WU Qikun，FENGWei，ZHANG Yangting，SONG Chunmei，MA Hongbo，WANG Shuran*
(School of Public Health，Jilin Medical College，Jilin City，Jilin Province，132013，China)

Objective To study the protective effects of oleanolic acid against carbon tetrachloride-induced acute liver injury in micee.Methods Thirtymalemice were randomly divided into normal group，model group and oleanolic acid group.Oleanolic acid group was pretreated with oleanolic acid and soybean oilmixture solution by intragastric administration at the dosage of 300 mg/kg for 2 days;model and normal groupswere pretreated with the same volume of soybean oil.On the last day of intragastric administration，model and oleanolic acid groupswere subcutaneous injected with 3 mL/kg carbon tetrachloride，and normal group was subcutaneous injected with the same volume of physiological saline.Twenty-four hours after subcutaneous injection，themice were sacrificed and liverswere removed.The contents of SOD and MDA from liver homogenate serum were determined，and the organ coefficient and pathological changes of liver were alsomeasured.Results Oleanolic acid significantly increased the low level of SOD and decreased the high level of MDA-induced by carbon tetrachloride.Compared with themodel group，the organ coefficient and pathological damage of liver in oleanolic acid group was slightly decreased.Conclusion Oleanolic acid has protective effects against acute liver injuryinduced by carbon tetrachloride.

oleanolic acid;acute liver injury;protective effects

R285.5

A

1673-2995(2015)01-0001-03

2014-08-04)

郗艳丽(1981－)，女(汉族)，讲师，博士.

王舒然(1968－)，男(汉族)，教授，博士.