丹红注射液对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及其对白细胞介素-8的影响

于洪艳 朱 丹 丁 宁

丹红注射液对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及其对白细胞介素-8的影响

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目的 探讨丹红注射液对大鼠心肌缺血/再灌注损伤（MI/RI）的保护作用及其对白细胞介素-8（IL-8）的影响。方法 SD大鼠完全随机分为假手术组、模型组、丹红注射液组，每组12只，采用结扎冠状动脉左前降支前30 min，再灌注120 min制备大鼠MI/RI模型。在结扎前15 min予以静脉注射丹红注射液8 ml/kg。观察丹红注射液对MI/RI模型大鼠心肌组织病理、血清IL-8水平、心肌组织IL-8 mRNA及IL-8蛋白表达水平。结果 丹红注射液能改善MI/RI模型大鼠心肌组织病理形态，降低血清中IL-8含量和心肌组织IL-8mRNA、IL-8蛋白表达水平。结论 丹红注射液能够通过对IL-8的调节减轻心肌缺血/再灌注损伤。

心肌缺血-再灌注；丹红注射液；白细胞介素-8

心肌缺血-再灌注损伤（Myocardial ischemia/ reperfusion injury,MI/RI）是经皮冠状动脉成形术、冠状动脉溶栓术、冠状动脉旁路移植术、冠状动脉内支架植入术等进行有效的心肌再灌注缩小心肌梗死面积治疗后发生的损伤[1]。MI/RI已成为影响心肌梗死患者缺血/再灌注后心脏结构和功能恢复的主要因素。研究表明，心肌缺血能够引起急性炎性反应，再灌注后会加剧炎性反应，导致不可逆的细胞损伤[2]。本实验通过大鼠建立MI/RI模型，研究丹红注射液对MI/RI的保护作用及其对白细胞介素-8（IL-8）的影响，为丹红注射液的临床应用提供依据。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选取SD大鼠36只，体质量（200± 20）g，雌雄各半。由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，动物许可证编号为：SCXK（京）2007-0001。适应性驯养1周，自由饮水、摄取标准颗粒饲料。室温20～23 ℃，相对湿度40%～80%。将大鼠完全随机分为3组，即假手术组、模型组、丹红注射液预处理组，每组12只。

1.2 试剂及试药 心电图记录仪（日本 KOHDEN公司）；全自动生化仪（美国TECHICON公司）；小动物呼吸机（成都泰盟科技有限公司）；普通光学显微镜（日本OLYMPUS公司）；IL-8多克隆抗体（武汉博士德生物工程有限公司）；甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）抗体（上海北诺生物科技有限公司）；荧光定量PCR仪（西安天隆科技有限公司）；Western blot印迹转移电泳仪（君意东方电泳设备有限公司）。IL-8酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）试剂盒（南京森贝伽生物科技有限公司）。丹红注射液由山东省步长制药有限公司提供。

1.3 模型制备[3]采用20%乌拉坦50 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，仰卧固定。将心电图记录仪的针状电极分别插入四肢皮下，接心电图记录仪，记录标准肢体Ⅱ导联心电图。颈部备皮，行气管插管，接大鼠呼吸机通气。距离胸骨左缘0.5 cm处，从第3、4肋间开胸，剪开心包膜，暴露心脏。在肺动脉圆锥左缘与左心耳右缘之间暴露冠状动脉左前降支。用4-0无损伤缝合线在左心耳根部下方2 mm处，以深1～2 mm、宽2～3 mm穿于带凹槽的细聚乙烯管制成的冠脉阻断小环，穿过心肌表层。假手术组不结扎。模型组、丹红注射液预处理组均结扎冠状动脉左前降支30 min，造成心肌缺血后，在凹槽部剪断结扎用的无损伤缝合线，再灌注120 min制备大鼠MI/RI模型。其中结扎缺血模型成功标准为心电图示ST段明显抬高，并与T波融合，心肌颜色变浅红色；再灌注模型成功标准为剪断结扎用的无损伤缝合线后ST段降低≥1/2，心肌逐渐红润。

表1 3组MI/RI大鼠血清IL-8水平、心肌组织IL-8mRNA、IL-8蛋白相对表达量比较(±s)

表1 3组MI/RI大鼠血清IL-8水平、心肌组织IL-8mRNA、IL-8蛋白相对表达量比较(±s)

注：与假手术组比较，#P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.01

组别 例数 血清IL-8(µg/L) 心肌组织IL-8mRNA相对表达量 心肌组织IL-8mRNA相对表达量假手术组 12 36±8 0.42±0.09 0.45±0.07模型组 12 94±11# 0.87±0.14# 0.92±0.16#丹红注射液预处理组 12 63±9* 0.65±0.11* 0.69±0.12*

1.4 方法 假手术组大鼠仅对左冠状动脉前降支用4-0缝合线穿过心肌表层，不进行结扎。穿缝合线后予以静脉注射0.9%氯化钠注射液8 ml/kg。模型组大鼠在结扎冠状动脉左前降支前15 min予以静脉注射0.9%氯化钠注射液8 ml/kg。丹红注射液组大鼠在结扎冠状动脉左前降支前15 min予以静脉注射丹红注射液8 ml/kg。

1.5 观察指标 采用ELISA法检测血清中IL-8的水平；采用反转录-聚合酶链式反应检测IL-8 mRNA表达；采用蛋白免疫印迹法检测IL-8蛋白表达。

1.6 统计学分析 采用SPSS 18.0统计软件进行分析，计量资料以±s表示，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 丹红注射液预处理对MI/RI大鼠心肌组织病理形态学的影响 假手术组大鼠心肌细胞结构完整，排列整齐，无心肌纤维的破坏；核内物质分布均匀，无水肿断裂，胞间间隙正常。模型组大鼠心肌细胞结构模糊，边界不清，心肌纤维变长呈波浪形、排列紊乱，发生断裂，细胞内水肿明显，有炎性细胞浸润。丹红注射液预处理组大鼠散在少量细胞结构模糊，边界不清，仅少量炎性细胞浸润。可见，丹红注射液预处理能够抗 MI/RI，具有保护心肌细胞的作用。

2.2 血清IL-8水平、心肌组织IL-8 mRNA、IL-8蛋白相对表达量 与假手术组大鼠比较，模型组大鼠血清IL-8水平、心肌组织IL-8mRNA和蛋白表达水平均明显升高，差异有统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较，丹红注射液预处理组大鼠血清IL-8水平、心肌组织IL-8mRNA和蛋白表达水平均明显降低，差异有统计学意义（P＜0.01），见表1。

3 讨论

致炎因子、炎性介质及其介导的炎性反应在MI/RI的病理生理中起重要作用[4]。中性粒细胞、单核/巨噬细胞、淋巴细胞以及内皮细胞等在心肌缺血再灌注时，通过细胞内信号转导机制发生细胞炎症级联反应，导致白细胞介素-6、肿瘤坏死因子、血小板活化因子、血栓素等多种炎性细胞因子大量生成，生成的炎性细胞因子被激活后又能合成和释放有趋化作用的炎性介质，进一步扩大了炎性反应，导致组织的损伤和破坏。IL-8是巨噬细胞和上皮细胞等分泌的细胞因子，是炎症早期最具影响的介质之一，能够结合趋化因子受体对中性粒细胞有细胞趋化作用而实现其对炎性反应的调节，促使炎性介质释放和诱导其他炎性因子启动炎症级联放大反应，使受损心肌的恶性循环加重[5]。本研究发现，采用结扎冠状动脉左前降支前30 min，再灌注120 min制备大鼠MI/RI模型，模型组心肌组织病理表现出明显的损伤，同时伴有IL-8明显升高，其参与了MI/RI的发生和发展，参与了炎症级联反应，使心肌组织受损。而通过丹红注射液预处理后血清中IL-8含量和心肌组织 IL-8 mRNA表达水平、IL-8蛋白相对表达量明显下降。提示丹红注射液可能是通过对IL-8的调节减轻MI/RI。

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[5] 王震,董化江,何文彤,等.蕨麻正丁醇提取物对心肌缺血再灌注损伤大鼠白细胞介素-8的影响[J].新乡医学院学报,2013,30(7): 509-511.

R542.2

A

1673-5846(2015)08-0020-02

1齐齐哈尔市中医医院，黑龙江齐齐哈尔 161000

2黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江哈尔滨 150001

于洪艳（1973.10-），本科学历，副主任药师，副院长。从事药理学研究

丁宁（1968-），本科学历，副主任医师。研究方向：心脑血管疾病的诊断学研究。E-mail：ningning_680512@163.com