兽医实验室血清学诊断注意事项

2015-12-07李娟黄仁树四川省什邡市动物疫病预防控制中心

中国畜牧业 2015年5期

文│李娟黄仁树（四川省什邡市动物疫病预防控制中心）

兽医实验室血清学诊断注意事项

文│李娟黄仁树（四川省什邡市动物疫病预防控制中心）

随着畜牧业的发展，兽医实验室在动物疫病防控体系的作用日趋凸显，而实验室检测结果的准确性，直接影响后续畜牧生产指导和动物疫病防控的方向。目前兽医实验室诊断主要分三大类：血清学诊断、病毒学诊断、细菌学诊断。细菌学与病毒学检测工作在基层实验室开展得不多，使用最普遍的是血清学诊断。由于基层兽医实验工作起步晚、人员素质参差不齐等原因，在血清学诊断实验实施和操作中常出现一些问题，笔者就该实验应该注意的问题进行了总结和分析，旨在提高动物疫病的实验室检测能力和水平，增强动物疫病防控的针对性和有效性。

一、血液样品的采集、保存和运送

1.血液采集和血清制取中应注意问题。在血清学诊断中，诊断样品主要是血清。对于不同的畜禽采血方法较多，通过实践，笔者发现家禽采用翅下静脉采血、小猪采用卧式采血、中猪和大猪采用立式采血以及奶牛采用尾静脉采血的方式，是畜禽应激最小、最为方便的方式。在血清学诊断中应注意采血的时间，需在抗体的高峰期进行血样采集。

在血样采集过程中，应严格遵守无菌操作，针头、血样容器、采血部位须全部消毒。采样人员务必熟练掌握采血技术，选用合适的注射器及针头，做好保定工作，选准采血进针的部位。例如猪的前腔静脉越往头部越浅，但也越细；越靠胸部越粗，但也越深。在采血过程中要掌握好一定的方向、角度和深度，针尖进入血管后应顺着血管的方向向前推进，推偏刺穿血管会引起血肿。

2.血清的制取。血清的制取通常有两种方法：第一种自然析出法，采血后，应使注射器活塞向后拉一两厘米，留血清析出的空隙，并放在30度左右夹角上静置，让血清自然析出，通常温度高血清析出快，夏日一般一个小时血清即可析出；另一种方法是离心法，该方法是立即将注射器内的血液沿容器壁（血清管壁）徐徐注入，不能用力挤，也不能震荡，否则易使红细胞破裂而发生溶血，待容器内的血液凝固后，用离心机4000转5分钟左右离心，上层即是血清，须凝血后再离心，否则离心出来是血浆。

3.血液样品的保存和运送。血清制备后，应4℃冷藏，在24小时内送到实验室。如24小时内不能送达，则将血清置于冰箱-20℃冻存，切记不可反复冻融。样品运输过程中，为避免因剧烈震动使容器破损，样品装入冷藏箱前应铺设衬垫并用柔软的东西互相隔开防止碰撞，而且要保持温度在必要的范围内（通常加入冰袋）。需要注意的是所有盛装送检样品的容器，应贴上可防止因各种原因（冷冻、挤碰等）脱落的标签，同时填完整采样单，标明采样时间、地点、编号和样品名称、畜禽品种、免疫情况等。

二、实验室血清学诊断

1.试剂、器具的选择。在血清学诊断中的试剂要选择有批文批号的，并注意试剂的有效期。特别要注意的是诊断试剂的有效期通常比较短，甚至有的有效期只有3个月。化学试剂应主要选择分析纯，并注意试剂的保存方法。

另外，移液器量程的选用也要注意，因为其准确性直接影响实验结果。选用最大量程与所量体积最为接近的移液器，误差会较小。

在血清学检测中经常会用到96孔血凝板，通常猪瘟的间接血凝试验选用110度V型板，而禽流感和新城疫的血凝试验选用90V型度板，因为在同等时间内不同型号的板血沉降效果是不同的。

2.实验室仪器的校正。在血清学诊断中，常用的仪器有电子天平、水浴锅、酶标仪、纯水器、灭菌锅、移液器和恒温箱。电子天平应注意在第一次使用、长时间未使用、天平移动位置和天气温差变化等情况下都要做校准，才能保证结果的准确性。应经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有±1℃的误差。对酶标仪应经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能，因为不同试剂盒要求采用不同的波长。纯水器应注意器滤芯、反渗透膜和纯化柱子是否超出使用寿命，如果失效，立即更换，否则影响纯水的质量。灭菌锅的安全阀、温度表、压力表要定期校验，以确保设备的安全和正常使用。移液器可用分析天平称量所取纯水的重量并计算的方法，来校正取液量。恒温箱的电动机轴承应每半年加油一次，经常检查恒温箱所示的温度和温箱内实测温度是否一致。

3.实验室操作的规范。实验室操作的规范性，直接影响着实验结果的准确性。在血清学诊断中，一是应注意所用的器皿都要洗净，配好的溶液需要进行灭菌，并注明日期和名称，放置低温或冷冻保存。二是所用的电子仪器设备在使用之前都应提前10分钟打开，让仪器预热，达到最佳的工作状态。三是在移液器的使用时，为获得的较高的精度，吸头最好预先吸取一次样品溶液，然后正式移液；吸液时应保证枪头内没有气泡；每次实验后务必将刻度调整至最大，让弹簧恢复原型以延长移液枪的使用寿命。四是对于所用溶液和试剂，尽量做到取多少用多少，对于取出又未用完的溶液或试剂，绝不能倒回瓶中。五是实验中应注意控制好实验环境温度，通常温度控制在20～25℃，对于特定的实验要控制好相应的实验环境温度。

4.实验室检测中的生物安全。作为基层兽医实验室，一般不从事高致病性病原微生物实验活动，但是在做人畜共患病检测（比如布鲁氏菌病血清学检测）时对实验室工作人员仍有潜在危险，实验室的其他血清学监测的生物安全也有隐患。所以实验室工作人员应提高防护意识，懂得生物安全对自身和环境的重要性，而且在实验时应该做好防护措施。

对于实验室环境应定期或不定期的通过紫外灯或消毒剂进行消毒；每次实验结束后都应对实验室、实验台面进行消毒，废弃物不能随便丢弃，对其消毒后，做统一处理；对于个人，应佩戴好手套、口罩、鞋套和实验服，每次实验结束都要洗净双手。

三、实验室记录

采样记录应一式两份，一份随样品送实验室，一份采样单位备案。通常血清学实验的采样记录，包括以下几方面的内容：畜主的姓名、电话、畜禽场的地址、动物种类、数量、日龄和免疫情况。采样记录单一定要填写详实，因为它对实验结果的分析起着很关键的作用。在实验室血清学诊断中的实验也应做好原始记录，记录应包括：检测时间、样品名称、检测项目、实验方法、实验设备、环境温度和湿度、检查结果以及检查人员等。