牛结核病PPD皮内变态反应和ELISA检测方法对比分析

于青海 李玉杰 孔祥华 姜秀云 陈静 马慧玲 蔺晓月 刘丽平 徐鸿 孙圣福 田夫林

（山东省动物疫病预防与控制中心 250022）

牛结核病PPD皮内变态反应和ELISA检测方法对比分析

于青海 李玉杰 孔祥华 姜秀云 陈静 马慧玲 蔺晓月 刘丽平 徐鸿 孙圣福*田夫林*

（山东省动物疫病预防与控制中心 250022）

本试验采集了2个牛场的10头疑似结核病的血清，采用ELISA方法进行牛结核病抗体检测，同时对该10份样品进行了PPD皮内变态反应，通过两种检测方法的比较，以期筛选出切实可行牛结核病的检测方法，为牛结核病的净化提供基础。

牛；结核病；PD皮内变态反应；ELIS；检测方法

牛结核病 （Bovine tuberculosis）是由牛结核分支杆菌（Mycobacterium bovis） 和结核分支杆菌 （Mycobacterium tuberculosis）所引起的一种人畜共患的传染病，主要引起组织器官的肉芽肿性结核结节和化脓性或干酪样或钙化的坏死病灶为特征，牛结核病在世界各国均有发生，在我国是常见的多发性疫病，牛结核病的流行严重影响畜牧业的健康发展，更严重威胁着人身安全。世界卫生组织 （OIE）将其列为必须通报疫病，农业部将其列为二类动物传染病，列为检疫扑杀对象[1]。

目前，结核病的监测主要采取PPD皮内变态反应试验进行，PPD皮内变态反应需要现场操作，操作过程繁琐，通量小，需要有人保定、剪毛、测皮厚，操作者有一定的风险，时间长，需要120h才能完成。因此亟需一种简便易操作的方法替代该方法，我们引入了IDEXX的结核杆菌ELISA检测试剂盒，采集牛血清进行抗体检测，同时进行PPD皮内变态反应，比较两种方法的一致性、敏感性和特异性。

1 材料和方法

1.1 被检血清及被检牛

2014年秋季山东省2个养牛场的疑似结核牛血清样品10份。

1.2 试剂

牛结核菌素由黑龙江生物制品一厂提供；牛结核分支杆菌抗体ELISA检测试剂盒由IDEXX公司提供。

1.3 试验方法

1.3.1 ELISA

按照IDEXX牛分支杆菌抗体检测试剂盒操作说明书进行。

1.3.2 PPD皮内变态反应

将牛只颈侧中部上三分之一处剪毛，直径约10cm，用游标卡尺测量中央皮皱厚度，记录；测量完毕，用75%酒精消毒术部，皮内注射0.1m l提纯结核菌素；观察反应：皮内注射72h后判定，观察局部有无热痛、肿胀等炎性反应，并用游标卡尺测量皮皱厚度，做好记录，疑似牛和阴性牛，96h和120h再分别观察一次，并记录皮厚。

2 结果

2.1 牛结核病不同检测方法结果

2.1.1 ELISA监测结果

对2个养牛场的10头牛采集血清进行抗体检测，根据IDEXX的试剂盒说明书的结果判定标准，S/P值≥0.3判定为阳性，10份样品全部为阳性。

表1 ELISA监测结果

2.1.2 PPD皮内变态反应结果

对2个养牛场的10头牛进行PPD皮内变态反应试验，每头牛颈部注射0.1ml结核菌素，72h后观察结果，有3头牛皮厚差≥4mm，96h后观察结果，有6头牛皮厚差≥4mm，120h后观察结果，有6头牛皮厚差≥4mm。

3 结论

（1）通过采用IDEXX的牛分支杆菌抗体检测试剂盒与传统PPD皮内变态反应两种结核病的监测方法的比较，发现两种方法存在一定的差异，本试验采用ELISA方法筛选的阳性样品进行PPD皮内变态反应，10份样品中PPD皮内变态反应有6份样品为阳性，阳性符合率为60%。

表2 PPD皮内变态反应结果

（2）ELISA方法试验操作简单，进行94份样品的检测，只需要不到3h的时间即可检出结果，而PPD皮内变态反应需要120h才可出具结果，而且操作复杂，需要辅助人员保定，剪毛、测量皮厚等过程。从检测方法的便捷程度以及通量来看，ELISA方法较PPD皮内变态反应有很大的可操作性。

（3）从两种方法的检测结果来看，ELISA方法可以用来结核病的筛查，而筛查的阳性样品可以用PPD皮内变态反应来确诊。两种方法相结合，对于牛场的结核病的净化消除具有较高的可操作性。杨显超等人建议采用变态反应PPD皮内结合ELISA方法进行牛结核病的监测净化[2]。李金岭等采用PPD皮内变态反应和ELISA结合的方式进行牛结核病的监测，建议ELISA监测阳性的进行扑杀，监测阴性而PPD皮内变态反应阳性的观察，隔离、淘汰[3]。

[1]王曲直,刘佩红,沈素芳,等.牛结核病诊断方法研究进展[J].中国兽医杂志,2015,51(2)：56-59.

[2]杨显超,吴秀娟,李凯航,等.皮试法与ELISA法结核病检测中的对比试验[J].上海畜牧兽医通讯,2015(2)：10-12.

[3]李金岭,郭宏军,高明辉,等.欧盟皮内变态反应比较试验法结合ELISA检测牛结核病的研究[J].中国动物检疫,2007,24(7)：28-29.

山东省动物疫病监测防治项目。

于青海 （1957-），男，山东省济南市人，助理兽医师，主要从事动物疫病监测与工作。*

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