新疆维吾尔族患者CYP2C9和VKORC1基因多态性分布及不同种族间的比较Δ

安琳娜，曹红，林筱琦（新疆医科大学第一附属医院药学部，乌鲁木齐830054）

华法林为口服抗凝药，可广泛用于血栓栓塞性疾病。大量研究表明，CYP2C9和VKORC1基因多态性是影响华法林维持剂量的主要遗传因素[1]。CYP2C9是人体重要的代谢酶，携带CYP2C9*2或CYP2C9*3突变基因的患者比携带CYP2C9*1的患者应给予更低的华法林维持剂量[2-3]。VKORC1是维生素K依赖性凝血因子生成过程的限速酶，华法林可通过抑制该酶而产生抗凝作用。研究表明，该基因与华法林的剂量相关，CYP2C9和VKORC1的基因变异频率在不同人群中差异较大[1]。在本研究中笔者对新疆维吾尔族患者CYP2C9和VKORC1的基因多态性进行了研究，以为建立适合此类患者的华法林个体化给药模型提供研究基础。

1 资料与方法

1.1 资料来源

选取2011年7月－2014年6月我院住院的无血缘关系的维吾尔族患者200例，入院后开始服用华法林。排除标准：肝、肾血清白蛋白水平异常；充血性心力衰竭；服用阿司匹林、氯吡格雷及维生素K等影响国际标准化比值（INR）的药物；入组前3周服用过利福平；进食不佳；妊娠期或哺乳期妇女。本研究方案经我院医学伦理委员会批准，所有患者均签署了知情同意书。

1.2 药品与仪器

华法林钠片，规格：2.5 mg/片，生产厂家：上海信谊九福药业；血液基因组DNA提取试剂盒、华法林敏感性基因检测试剂盒、聚合酶链式反应扩增仪、e-Hyb全自动杂交仪、BE-2.0生物芯片识读仪均由上海百傲科技股份有限公司提供。

1.3 研究方法

1.3.1 DNA提取方法 采集所有患者术前2 d外周静脉血2 ml，加入乙二胺四乙酸-k2抗凝，置－20℃冰箱保存。使用血液基因组DNA提取试剂盒快速提取基因组DNA，置－20℃保存。采用基因芯片法检测CYP2C9基因和VKORC1基因的基因型。

1.3.2 用药方法 所有患者于每日16：00时口服华法林，起始剂量为2.5 mg/d，3 d后根据INR调整用药剂量。

1.4 观察指标

观察患者CYP2C9和VKORC1基因型及等位基因频率分布、不同种族人群基因型及等位基因频率分布。

1.5 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件对数据进行分析。采用频数计数法计算各基因型及等位基因频率。采用R×C列表的χ2检验比较不同种族间基因型频率及基因频率之间的差异。所有统计检验均为双侧概率检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者基本资料

本研究共纳入患者200例，其中男性89例，女性111例；年龄19～77岁，平均44.02岁；身高147～185 cm，平均167.27 cm；体质量47～88 kg，平均66.23 kg。

2.2 CYP2C9基因型及等位基因频率分布

200例患者中，CYP2C9基因型以*1/*1最为多见，*3/*3基因型频率较低，未发现*2/*2和*2/*3突变型，结果详见表1。

表1 CYP2C9基因型及等位基因频率分布Tab 1 Distribution of frequencies of genotypes and alleles of CYP2C9

2.3 VKORC1基因型及等位基因频率分布

200例患者中，VKORC1-1639G＞A基因型以AA型较为多见，GG型较少；VKORC1-1173C＞T基因型以TT型较为多见，CC型较少，-1639G＞A与-1173C＞T两个多态性位点呈现完全连锁不平衡，结果详见表2。

表2 VKORC1基因型及等位基因频率分布Tab 2 Distribution of frequencies of genotypes and alleles of VKORC1

2.4 不同种族CYP2C9基因型及等位基因频率分布

新疆维吾尔族*1/*1基因型频率低于中国汉族、日本、韩国、美国，高于土耳其（P＜0.05），与瑞典、英国比较差异无统计学意义（P＞0.05）；*1/*2杂合突变型频率低于土耳其、瑞典、英国，高于中国汉族、日本、韩国（P＜0.05），与美国比较差异无统计学意义（P＞0.05）；*1/*3杂合突变型频率高于中国汉族、日本、韩国、英国、美国（P＜0.05），与土耳其、瑞典比较差异无统计学意义（P＞0.05）；未检出*2/*2、*2/*3基因型；*3/*3基因频率高于上述人群（P＜0.05）。新疆维吾尔族*1等位基因频率明显低于中国汉族、日本、韩国、美国，高于土耳其（P＜0.05），与瑞典、英国比较差异无统计学意义（P＞0.05）；*2等位基因高于中国汉族、日本、韩国，低于土耳其、瑞典、英国（P＜0.05），与美国比较差异无统计学意义（P＞0.05）；*3等位基因高于中国汉族、日本、韩国、瑞典、英国和美国（P＜0.05），与土耳其比较差异无统计学意义（P＞0.05），结果详见表3。

2.5 不同种族VKORC1基因型及等位基因频率分布

表3 不同种族CYP2C9基因型及等位基因频率分布（%）Tab 3 Distribution of frequencies of genotypes and alleles of CYP2C9 in different ethnic populations（%）

新疆维吾尔族AA基因型频率高于美国、瑞典、英国，低于中国汉族、中国台湾、日本、新加坡；AG型频率明显高于中国汉族、中国台湾、日本、新加坡，与美国、瑞典、英国比较差异无统计学意义（P＞0.05）；GG型频率高于中国汉族、中国台湾、日本、新加坡，低于美国、瑞典、英国；新疆维吾尔族A型等位基因低于中国汉族、中国台湾、日本、新加坡，高于美国、瑞典、英国；G型等位基因高于中国汉族、中国台湾、日本、新加坡，明显低于美国、瑞典、英国（P＜0.05），详见表4。

表4 不同种族VKORC1基因型及等位基因频率分布（%）Tab 4 Distribution of frequencies of genotypes and alleles of VKORC1 in different ethnic populations（%）

3 讨论

华法林已被广泛用于血栓栓塞性疾病或有血栓栓塞高危的患者，目前临床尚无其他抗凝药物可代替华法林。由于华法林治疗窗窄，其治疗剂量非常接近发生抗凝过量的剂量，但维持剂量个体间差异大，其剂量范围可能为0.5～10 mg/d。华法林药物基因组学的研究解释了华法林个体差异存在的原因，与华法林作用通路相关的基因变异都可能会影响华法林的稳定维持剂量，CYP2C9和VKORC1基因的多态性是影响华法林维持剂量的主要遗传因素。

本研究结果显示，CYP2C9基因型以*1*1最为多见，*3/3基因型频率较低，未发现*2/*2和*2/*3突变型；与世界其他地区人群相比，*1/*2杂合突变型频率低于土耳其、瑞典、英国，高于中国汉族、日本、韩国；*1/*3杂合突变型频率高于中国汉族、日本、韩国、英国、美国。这表明，CYP2C9基因多态性分布具有显著的地区和种族差异，携带CYP2C9*2或CYP2C9*3突变等位基因的患者需要降低华法林维持剂量。因此，如果不考虑其他基因因素，仅考虑CYP2C9基因型，新疆维吾尔族患者服用华法林时，可能需要比亚洲其他地区人群更低的给药剂量。

本研究结果还显示，VKORC1-1639A/G的AA、AG、GG基因型频率与VKORC1-1173T/C的TT、TC、CC基因型频率完全一致。这表明，在今后的研究中，只需对其中一个位点进行检测。此外，新疆维吾尔族AA型频率高于美国、瑞典、英国，低于中国汉族、中国台湾、日本、新加坡；AG型频率高于中国汉族、中国台湾、日本、新加坡；GG型频率高于中国汉族、中国台湾、日本、新加坡，低于美国、瑞典、英国。有研究表明，在不考虑其他变异基因的影响下，GG基因型患者所需华法林剂量最高，AG基因型剂量次之，AA基因型最低[13]。因此，如果不考虑其他基因因素，仅考虑VKORC1基因型，新疆维吾尔族患者服用华法林时，可能需要比亚洲其他人群更高的给药剂量。

综上所述，建议临床有必要在探讨CYP2C9和VKORC1基因对华法林维持剂量和抗凝治疗效果影响的同时，考虑药物基因组学、人口学特征和临床资料等因素，建立新疆维吾尔族患者华法林个体剂量预测模型，以更精确地评估不同患者的用药剂量，减少华法林剂量调整时间，降低治疗初始阶段因华法林过量而导致的严重出血风险。

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