糖尿病易感基因TCF7L2基因rs12255372位点多态性与女性乳腺癌发病的关系

刘桂红，刘静普，张松，张怡梅，周卫华，张玉娜，刘月芹，朱铁年

(1河北医科大学第四医院，石家庄050011;2白求恩国际和平医院;3河北医科大学第三医院)

目前认为，乳腺癌的发病是遗传因素和环境因素共同作用的结果。2型糖尿病同乳腺癌一样，具有很强的遗传易感性。流行病学调查发现，糖尿病患者乳腺癌的发病风险明显升高［1，2］。临床研究也发现，乳腺癌与2型糖尿病不仅具有相同的病因，在临床表现、群体遗传学背景等方面也有很多相似性。因此，不少学者将2型糖尿病的易感基因作为乳腺癌发病的候选基因。本研究即探讨了糖尿病易感基因核转录因子7类似物2(TCF7L2)基因rs12255372位点多态性与女性乳腺癌发病的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2011年1月～2012年1月河北医科大学第四医院收治的女性乳腺癌患者564例(乳腺癌组)，年龄(49.1 ±9.6)岁，BMI(25.5 ±3.6)kg/m2，均经术后病理检查确诊。术后标本参照中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2013版)进行组织学分级、肿瘤分期及分子分型观察;同时收集患者淋巴结转移情况，癌组织中雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER-2)、p53、Ki-67表达及肿瘤直径等资料。同期另选在白求恩国际和平医院体检健康者394例(对照组)，均为女性，年龄(47.8 ±9.6)岁，BMI(24.4±3.5)kg/m2。两组年龄比较无统计学差异，BMI比较有统计学差异。

1.2 TCF7L2基因rs12255372位点基因分型检测两组清晨空腹抽取肘静脉血2 mL，置于EDTA抗凝管中，-80℃冰箱保存。采用DNA提取试剂盒提取基因组DNA，-80℃保存备用。采用LDRPCR技术检测TCF7L2基因rs12255372位点基因分型。PCR扩增引物:上游引物 5'-ATTGTCCCTTGAGGTGTACTG-3'，下游引物 5'-GGCAGCGGAGATGAGGCAGA-3'，PCR 产物长度 195 bp。15 μL PCR反应体系中含基因组 DNA 1 μL，10×PCR buffer 1.5 μL，MgCl21.5 μL，10 mmol/L dNTPs 0.3 μL，10 pmol/L 引物各0.25 μL，5 U/μL 热启动Taq DNA 聚合酶0.2 μL，进行PCR扩增。PCR扩增参数:94℃2 min，94 ℃ 20 s，56 ℃ 20 s，72 ℃ 40 s，35 个循环后，72℃延伸3 min。TCF7L2基因rs12255372位点探针:通用探针:5'-P-ACCATATTCTGATAATTACTCAGG-FAM-3';分型探针 1:5'-CCCAGGAATATCCAGGCAAGAATG-3'，产物长度48 bp;分型探针2:5'-TTTCCCAGGAATATCCAGGCAAGAATT-3'，产 物长度51 bp。配制10 μL LDR体系:10×连接酶buffer 1 μL，2 μL PCR 产物，10 pmol/L 分型探针及通用探针各 0.01 μL，40 U/μL Taq DNA 连接酶0.125 μL。反应程序:94 ℃ 30 s、56 ℃ 3 min，共30个循环。取1 μL连接产物，加10 μL上样 loading buffer，95℃变性3 min，立即冰水浴，在ABI 3730XL测序仪上检测基因型及频率分布。

1.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。两组基因型频率行Hardy-Weinberg平衡检验，基因型频率比较采用χ2检验。采用Logistic回归分析评估TCF7L2基因rs12255372位点不同基因型乳腺癌的发病风险，并以BMI进行校正。单因素分析不同基因型与乳腺癌患者临床病理参数的关系。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TCF7L2基因rs12255372位点基因型频率分布及其发病风险评估 两组TCF7L2基因rs12255372位点基因型频率符合Hardy-Weinberg平衡，说明样本具有群体代表性。两组均未检测出TT基因型，乳腺癌组GG、GT基因型频率分别为98.2%(554/564)、1.8%(10/564)，对照组分别为 97.7%(385/394)、2.3%(9/394)，经 BMI校正后，GG 基因型患乳腺癌的风险是GT基因型的1.586倍(OR=1.586，95%CI为0.615～4.086)，但差异无统计学意义(P ＞0.05)。

2.2 TCF7L2基因rs12255372位点基因型与乳腺癌患者临床病理参数的关系 见表1。

3 讨论

TCF7L2基因位于人类10号染色体长臂25区，长度约为215.9 kb，其编码产物是一种含有高迁移率组盒的转录因子［3］。TCF7L2基因表达产物能与细胞核内β-catenin结合，启动细胞表面的Wnt信号传导通路，调节相关基因的表达，在细胞增殖、正常胚胎形成及肌肉调节、脂肪组织形成等方面起关键作用［4］。多项研究表明，TCF7L2基因 rs12255372位点多态性与2型糖尿病密切相关［5～7］。TCF7L2基因异常表达可改变Wnt信号，通过上调c-myc和cyclinD的表达间接发挥致癌作用［8］。TCF7L2基因在肠内高表达，与结直肠癌的发病密切相关［9，10］。Burwinkel等［11］通过TaqMan探针技术检测了TCF7L2基因rs12255372位点多态性在家族性乳腺癌中的作用，结果显示TCF7L2基因rs12255372位点多态性能增加家族性乳腺癌的发病风险。基于TCF7L2基因与乳腺癌、糖尿病发病均有关，本研究探讨了TCF7L2基因rs12255372位点多态性与国内女性乳腺癌发病的关系。

目前，国内外对糖尿病易感基因TCF7L2基因rs12255372位点多态性与女性乳腺癌发病关系的研究结果并不一致。Goode等［12］研究发现，rs12255372基因多态性与ER、PR无关，但其未分析基因多态性与组织学分级和淋巴结转移状态的关系;Wang等［13］进行的Meta分析显示，TCF7L2基因rs12255372位点多态性可增加乳腺癌的发病风险;Naidu等［14］研究发现，TCF7L2 基因 rs7903146 位点T变异可能增加乳腺癌患病风险，且与淋巴结转移有关，有可能成为乳腺癌的候选易感基因，但rs12255372位点GT杂合子或TT纯合子和携带T等位基因或T基因型均与乳腺癌风险无关，且与临床病理特征无关。本研究结果显示，两组TCF7L2基因rs12255372位点均未检测出TT基因型，两组该位点GG、GT基因型频率比较差异无统计学意义。经BMI校正后，GG基因型的患病风险是GT基因型的1.586倍，但差异无统计学意义。单因素分析显示，TCF7L2基因rs12255372位点多态性与患者各临床病理参数无关。说明TCF7L2基因rs12255372位点多态性与乳腺癌的发病风险无关，但这一结论仍需进一步加大样本量来验证。

表1 TCF7L2基因rs12255372位点基因型与乳腺癌患者临床病理参数的关系［例(%)］

［1］ Michels KB，Solomon CG，Hu FB，et al.Type 2 diabetes and subsequent incidence of breast cancer in the Nurses'Health Study［J］.Diabetes Care，2003，26(6):1752-1758.

［2］Wu AH，Yu MC，Tseng CC，et al.Diabetes and risk of breast cancer in Asian-American women［J］.Carcinogenesis，2007，28(7):1561-1566.

［3］Duval A，Busson-Leconiat M，Berger R，et al.Assignment of the TCF-4 gene(TCF7L2)to human chromosome band 10q25.3［J］.Cytogenet Cell Genet，2000，88(3-4):264-265.

［4］Etheridge SL，Spencer GJ，Heath DJ，et al.Expression profiling and functional analysis of wnt signaling mechanisms in mesenchymal stem cells［J］.Stem Cells，2004，22(5):849-860.

［5］Grant SF，Thorleifsson G，Reynisdottir I，et al.Variant of transcription factor 7-like 2(TCF7L2)gene confers risk of type 2 diabetes［J］.Nat Genet，2006，38(3):320-323.

［6］Scott LJ，Bonnycastle LL，Willer CJ，et al.Association of transcription factor 7-like 2(TCF7L2)variants with type 2 diabetes in a Finnish sample［J］.Diabetes，2006，55(9):2649-2653.

［7］Hayashi T，Iwamoto Y，Kaku K，et al.Replication study for the association of TCF7L2 with susceptibility to type 2 diabetes in a Japanese population［J］.Diabetologia，2007，50(5):980-984.

［8］Reya T，Clevers H.Wnt signalling in stem cells and cancer［J］.Nature，2005，434(7035):843-850.

［9］Chen J，Yuan T，Liu M，et al.Association between TCF7L2 gene polymorphism and cancer risk:a meta-analysis［J］.PLoS One，2013，8(8):e71730.

［10］Zhang B，Jia WH，Matsuda K，et al.Large-scale genetic study in East Asians identifies six new loci associated with colorectal cancer risk［J］.Nat Genet，2014，46(6):533-542.

［11］Burwinkel B，Shanmugam KS，Hemminki K，et al.Transcription factor 7-like 2(TCF7L2)variant is associated with familial breast cancer risk:a case-control study［J］.BMC Cancer，2006，(6):268.

［12］ Goode EL，Szabo C，Prokunina-Olsson L，et al.No association between a candidate TCF7L2 variant and risk of breast or ovarian cancer［J］.BMC Cancer，2009，(9):312.

［13］Wang Z，Zhang Q，Chen F，et al.TCF7L2 rs12255372(G＞T)polymorphism contributes to breast carcinogenesis:evidence from a meta-analysis［J］.Crit Rev Eukaryot Gene Expr，2013，23(4):309-316.

［14］Naidu R，Yip CH，Taib NA.Genetic variations in transcription factor 7-like2 (TCF7L2)gene:association ofTCF7L2 rs12255372(G/T)or rs7903146(C/T)with breast cancer risk and clinico-pathological parameters［J］.Med Oncol，2012，29(2):411-417.