胃癌组织中DCC mRNA表达变化及意义

张跃，翟珂，姜明静，李蕊，管杰1，

（1山东省肿瘤医院，济南 250117;2济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院;3济宁市兖州区人民医院）

胃癌是常见的恶性肿瘤之一［1］，预后较差，进展期胃癌患者术后5年生存率为20% ～50%［2］。胃癌的发病与多种因素有关。目前已明确与胃癌发生、发展关系密切的基因有癌基因e-MET、HER-2、ras及抑癌基因 p53、APC、结直肠癌缺失基因（DCC）、p16等。DCC是目前发现的最长的抑癌基因，其编码一种分子量为190 kD的跨膜磷酸化蛋白，是一种信号传递受体［3］。研究表明，DCC基因在结直肠癌、肝癌、子宫内膜癌、卵巢癌及骨肉瘤组织中表达明显减少或缺失［4～8］，关于其在胃癌组织中的表达报道较少。2014年9月～2015年1月，我们观察了胃癌组织中DCC mRNA的表达变化，并分析其与胃癌临床病理参数的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 胃癌患者52例，男34例、女18例;年龄为32～79岁，≥60岁、＜60岁各26例。TNM分期Ⅰ期12例、Ⅱ期6例、Ⅲ期22例、Ⅳ期12例。术中留取胃癌组织与癌旁5 cm以上的正常胃组织标本，将标本置液氮中速冻后，迅速移入-80℃冰箱保存。

1.2 DCC mRNA检测 ①引物设计与合成:采用Primer BLAST（NCBI）软件设计 PCR引物，DCC mRNA上游引物序列为 5＇-CACTGCGCTTCCTCTCAGAA-3＇，下游引物序列为 5＇-CTGGCTTGTGGTGTCTGGAA-3＇，扩增产物215 bp;内参GAPDH引物设计参考文献［9］，扩增产物 589 bp。②teal-time PCR反应:提取标本总RNA，合成cDNA;PCR反应体系为10 ×Buffer 2.5 μL，dNTP 2.0 μL，上游引物0.5 μL，下游引物0.5 μL，ExTaq 酶0.125 μL，cDNA模板 3 μL，Nuclease-Free Water定容至 25 μL;PCR反应条件为95℃预变性5 min，（94℃ 30 s，54℃30 s，72℃ 90 s）×32个循环，72℃终延伸10 min。③结果判定:将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，通过紫外透射反射仪观察目的条带，凝胶图像分析仪拍照分析;采用凝胶图像分析软件AlphaView-SA对图像进行分析处理，分别得到DCC和GAPDH的积分密度值，扣除背景，得到净光密度值，DCC mRNA表达量=DCC mRNA净光密度值/GAPDH净光密度值。

1.3 统计学方法 采用SPSS20.0统计软件。率的比较采用Fisher确切概率法;不同临床病理参数胃癌组织中DCC mRNA相对表达量比较采用t检验及方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌组织与正常胃组织中DCC mRNA表达比较 正常胃组织中均检测到DCC mRNA，阳性表达率100%（52/52）;胃癌组织中DCC mRNA阳性表达率为84.6%;胃癌组织与正常胃组织中DCC mRNA阳性表达率相比，P＜0.05。

2.2 DCC mRNA表达与胃癌临床病理参数的关系有淋巴结转移者胃癌组织中DCC mRNA表达量与无淋巴结转移者相比，Ⅲ、Ⅳ期患者胃癌组织中DCC mRNA表达量与Ⅰ、Ⅱ期患者相比，高、中分化患者胃癌组织中DCC mRNA表达量与低分化患者相比，P均＜0.05。不同性别、年龄、肿瘤部位胃癌组织中DCC mRNA表达量相比，P均＞0.05。详见表1。

表1 DCC mRNA表达量与胃癌临床病理参数的关系（±s）

表1 DCC mRNA表达量与胃癌临床病理参数的关系（±s）

临床病理参数 n DCC mRNA性别男30 0.59 ±0.08 34 0.79 ±0.12女18 0.81 ±0.10年龄＜60 岁 26 0.75 ±0.15≥60 岁 26 0.84 ±0.09肿瘤部位贲门 10 0.85 ±0.13胃体 22 0.78 ±0.10胃窦 20 0.78 ±0.12 TNM分期Ⅰ、Ⅱ期 18 1.21 ±0.11Ⅲ、Ⅳ期 34 0.57 ±0.08淋巴结转移无22 1.07 ±0.10有30 0.59 ±0.08分化程度高分化+中分化 24 1.05±0.10低分化+未分化 28 0.58±0.05淋巴结转移无22 1.07 ±0.10有

3 讨论

DCC基因是 Fearon等［10］于1990年首先发现的一种肿瘤抑制基因。DCC基因在脑组织中表达丰富，在结直肠癌、卵巢癌、乳腺癌等恶性肿瘤组织中表达缺失或下调。Castets等［11］最新研究发现DCC蛋白可通过诱导肿瘤细胞凋亡来抑制结肠癌和直肠癌发展。Mehlen等［12］研究表明，DCC蛋白在配体缺乏的环境中具有诱导细胞凋亡的作用，但在配体Netorin-1存在时，DCC蛋白则具有抗细胞凋亡作用。如果DCC基因缺失，无法编码DCC蛋白，将导致细胞生长和分化发生障碍，细胞有可能发生恶变［13］。研究［14］表明，DCC 基因在结直肠癌细胞中表达下调，其失活的主要机制是启动子甲基化和等位基因缺失。有报道显示，结直肠癌组织中DCC基因某区域检测缺失率为 29%［15］。Zhai等［16］发现DCC基因在乳腺癌组织中的阳性表达率为38.2%，而在有淋巴结转移的乳腺癌组织中阳性表达率为23.3%，认为DCC基因表达下调与乳腺癌的发生和侵袭有关。DCC mRNA的转录是DCC基因表达的关键。本研究发现，DCC mRNA在胃癌组织中的阳性表达率低于正常胃组织，与上述报道结果基本一致。说明胃癌的形成过程中存在DCC基因表达缺失。

本研究结果还显示，DCC mRNA在有淋巴结转移的胃癌组织中的表达量低于无淋巴结转移者，在TNM分期Ⅲ+Ⅳ期胃癌组织中的表达量低于Ⅰ+Ⅱ期者，在低分化（未分化）胃癌组织中的表达量低于高、中分化者，提示随着肿瘤分化程度降低、分期增高、淋巴结转移的发生，DCC mRNA表达逐渐下调。我们推测，DCC mRNA表达下调可能是胃癌预后不良的标志;同时，上调DCC基因表达有可能成为胃癌基因治疗的措施之一。

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