中国北方HLA-B27 阳性强直性脊柱炎患者同乙型肝炎表面抗原阳性率无相关性

孙士鹏，程实，庞博，冯雪，安成，刘贵建

中国中医科学院 广安门医院检验科，北京 100053

强直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是一种慢性炎症性疾病，发病原因尚不明确，目前主要认为是由环境及遗传因素等引起的一种自身免疫性疾病。HLA-B27 阳性率同AS 的易感性之间密切相关，85%～90%的AS 患者HLA-B27 阳性[1]。同HLAB27 阴性的AS 患者相比，HLA-B27 阳性AS 患者往往病程长、功能状态差、生活质量差、关节外症状较多[2]。然而，目前HLA-B27 在AS 发病中的作用仍不清楚，主流观点解释为“分子模拟”和“关节源性抗原肽”假说。HLA-B27是MHC-Ⅰ类分子，能够将抗原呈递给T 细胞引发机体的细胞免疫，一些微生物和宿主之间存在交叉反应的多肽（序列一致或高度相似），微生物感染后刺激T 细胞产生针对宿主自身HLA-B27相关多肽的免疫反应。

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是全球性的公共卫生问题，血清学检测结果显示约30%的人正在或者既往感染过HBV。中国、南亚、非洲大部分地区、太平洋岛国、中东部分地区和亚马逊盆地为高发区[3]。Zheng 等研究发现[4]，AS 患者中乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）阳性率为23.92%（105/439），显著高于健康人群和脊柱关节病、类风湿性关节炎、骨关节炎，而且HLA-B27 阳性AS 患者的HBsAg 阳性率显著高于HLA-B27 阴性的AS 患者，因而他们认为AS 患者较高的HBsAg 分布可能和HLA-B27 基因高度相关。由于HBsAg 能够诱导细胞免疫[5-6]，所以HBsAg 阳性或HBV 感染者可能参与到AS 这种自身免疫性疾病的发病。我们在前期研究中也发现HBV大S蛋白中的一段多肽（FRVVAVQNL）同人自身Ⅳ型骨胶原的一段多肽（FRVGNVQEL）仅有3 个氨基酸的差别[4]，这段序列可能是HLA-B27 识别的抗原表位，通过分子模拟作用引起AS[7]。因而，研究HLA-B27阳性AS患者同HBsAg 阳性率之间的关系，可能有助于揭示AS 的致病机制。但也有研究表明AS 患者中HBsAg阳性率只有2%，和健康对照组相比无显著差异[8]。因而，我们针对中国北方人群HLA-B27 阳性的AS患者同HBSAg阳性率之间的相关性进行了研究。

1 资料和方法

1.1 研究对象

我院2013年1～12月149例HLA-B27阳性的AS患者和281 例社区健康体检者（表1），149 例入组患者符合AS 诊断的1984 修改的纽约标准。另有同期我院503 例门诊病人，其中264 例为HLA-B27 阳性，239例为HLA-B27阴性（表2）。

1.2 检测方法

表1 AS组和健康对照组资料

表2 HLA-B27阳性组和HLA-B27阴性组资料

用Beckman Coulter 公司的FC500 流式细胞仪和BD 公司的HLA-B27检测试剂盒（流式细胞法）检测外周血淋巴细胞HLA-B27阳性率。

用上海科华生物公司的HBsAg检测ELISA 试剂盒和TECAN Freedom EVOlyzer 150/4 全自动酶联免疫工作站进行HBsAg 血清学检测，实验步骤参照试剂盒和仪器说明书。设4 个阴性对照（NC）和1 个阳性对照（PC），检测结果以D450/630nm值示，PC 的D值≥1和NC的D值≤0.100则判定结果有效。Cutoff值=（NC1+NC2+NC3）/3+0.100。样本的D值≥Cutoff 值判定为阳性，D值＜Cutoff判定为阴性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 18.0软件进行统计学分析，数据采用数值和百分数的方式进行Pearson 卡方检验。检测数据以表示，进行单因素方差分析，随后最小显著性差异进行析因分析或独立样本t检定。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AS患者和健康人群HBsAg阳性率

149 例HLA-B27 阳性的AS 患者中仅有2 例为HBsAg 阳性（1.34%），281 例健康人对照组中有9 例为HBsAg 阳性（3.20%），二者之间无统计学差异（P=0.343）。健康男性HBsAg 阳性率为3.33%（7/210），女性为2.8%（2/71）；AS 患者中男性HBsAg 阳性率为1.75%（2/114），女性为0%（0/35），2 组性别之间结果无统计学差异（P＞0.05）。见表3。

2.2 HLA-B27阳性/阴性样本的HBsAg阳性率

264例HLA-B27阳性样本组和239例HLA-B27阴性样本组的HBSAg阳性样本分别为7（2.65%）和5（2.09%），二者之间无统计学差异（P＞0.05）。HBsAg阳性率在2 组性别之间结果无统计学差异（P＞0.05）。见表4。

3 讨论

2006年我国HBsAg 阳性率为7.18%[9]，近年来由于乙肝疫苗的接种，HBsAg 阳性率应低于7%[10]。本研究检测到正常人群HBsAg 阳性率为3.20%，与前期国家统计调查结果一致。我们发现中国北方HLA-B27 阳性AS 患者同HBsAg 阳性率无相关性，同Aksu 的 研究结果一致[8]，但与Zheng 等的AS 患者中HBsAg 的高阳性率（23.92%）不一致[4]。为了鉴定HBsAg 的分布是否同HLA-B27 基因相关，我们对HLA-B27阳性和阴性样本的HBSAg进行了检测，发现2 组之间HBSAg 阳性率无统计学差异，这说明HLA-B27 基因同HBSAg 无相关性。不同的研究结果可能是由于以下原因造成的：①Zheng等回顾性分析的对象是同时进行了HBsAg检测的AS患者，没有进行HBsAg检测的AS患者未入组，这样可能会造成统计学数据的不足和偏差；②不同地区、种族间的HLA-B27 亚型存在差异[11]，我国汉族人群最为常见的是B*2704和B*2705亚型，南方人群多为B*2704，而北方人群多为B*2705 亚型[12-15]，甚至有研究发现南方人群B*2705 基因能够使个体不发生AS[16-17]。Zheng等的研究对象是中国南方人群，而本研究对象是北方人群，可能不同地域人群HLA-B27 亚型的差异造成结果不一致。因此，HBsAg 同AS 之间的相关性及HLA-B27不同亚型间的关系还有待深入探讨。

表3 AS组和健康对照组HBsAg阳性率比较

表4 HLA-B27阳性组和HLA-B27阴性组HBsAg阳性率比较

[1]Thomas G P,Brown M A.Genomics of ankylosing spondylitis[J].Discov Med,2010,10(52):263-271.

[2]Freeston J,Barkham N,Hensor E,et al.Ankylosing spondylitis,HLA-B27 positivity and the need for biologic therapies[J].Joint Bone Spine,2007,74(2):140-143.

[3]Trépo C,Chan H L,Lok A.Hepatitis B virus infection[J].Lancet,2014,S0140-6736(9959):60220-60228.

[4]Zheng B,Li T,Lin Q,et al.Prevalence of hepatitis B surface antigen in patients with ankylosing spondylitis and its association with HLA-B27:a retrospective study from south China[J].Rheumatol Int,2007,32(7):2011-2016.

[5]Hanson R G,Hoofnagle J H,Minuk G Y,et al.Cell-mediated immunity to hepatitis B surface antigen in man[J].Clin Exp Immunol,1984,57(2):257-264.

[6]Sylvan S P.Cellular immune responses to hepatitis B virus antigens in man[J].Liver,1991,11(1):1-23.

[7]Sun S,Wang T,Pang B,et al.Short peptide sequence identi-ty between human viruses and HLA-B27-binding human'self' peptides[J].Theory Biosci,2014,133(2):79-89.

[8]Aksu K,Kabasakal Y,Sayiner A,et al.Prevalences of hepatitis A,B,C and E viruses in Behçet's disease[J].Rheumatology(Oxford),1999,38(12):1279-1281.

[9]Lu F M,Zhuang H.Management of hepatitis B in China[J].Chin Med J,2009,122(1):3-4.

[10]Fang Z L,Harrison T J,Yang J Y,et al.Prevalence of hepatitis B virus infection in a highly endemic area of southern China after catch-up immunization[J].J Med Virol,2012,84(6):878-884.

[11]Thomas G P,Brown M A.Genetics and genomics of ankylosing spondylitis[J].Immunol Rev,2010,233(1):162-180.

[12]Ma H J,Yin Q F,Hu F P,et al.Different clinical features in patients with ankylosing spondylitis from southern and northern China[J].Int J Rheum Dis,2012,15(2):154-162.

[13]Qi J,Li Q,Lin Z,et al.Higher risk of uveitis and dactylitis and older age of onset among ankylosing spondylitis patients with HLA-B*2705 than patients with HLA-B*2704 in the Chinese population[J].Tissue Antigens,2013,82(6):380-386.

[14]Mou Y,Wu Z,Gu J,et al.HLA-B27 polymorphism in patients with juvenile and adult-onset ankylosing spondylitis in Southern China[J].Tissue Antigens,2010,75(1):56-60.

[15]Liu Y,Jiang L,Cai Q,et al.Predominant association of HLA-B*2704 with ankylosing spondylitis in Chinese Han patients[J].Tissue Antigens,2010,75(1):61-64.

[16]Zhang L,Liu J L,Zhang Y J,et al.Association between HLA-B*27 polymorphisms and ankylosing spondylitis in Han populations:a meta-analysis[J].Clin Exp Rheumatol,2011,29(2):285-292.

[17]Shih H C,Liu S C,Chang C P,et al.Positive association of ankylosing spondylitis with homozygous HLA-B2704,but protection with B2705 in Taiwan Chinese[J].Kaohsiung J Med Sci,2001,17(10):509-516.