紫外分光光度法和酸碱滴定法测定复方制剂镇痛灵中乌头总碱含量的比较

姚闽 汪军

（江西省药物研究所 南昌330029）

含乌头类生物碱的中药主要有川乌、草乌、附子等。这些中药中的乌头碱类生物碱是其镇痛作用的主要有效成分，具有很强的抗炎镇痛活性，同时具有较强的毒性，起效剂量和中毒剂量非常接近，临床应用这类中药时，除经炮制降低其毒性外，还应严格控制其用量来预防这类药物中毒事件的发生。因此，研究含乌头类生物碱的中药在中药复方制剂中的含量测定方法彰显必要。本实验中研究的对象镇痛灵制剂是由医院制剂原生痛胶囊根据中医学理论，结合临床实践，予以加减化裁而成的中药复方制剂，由制川乌、延胡索、胡椒、白芍等中药组成，其中含乌头类生物碱的中药制川乌辛温，通行十二经，温阳祛寒，除湿化瘀，故破积聚，温经止痛。本文比较不同的含量测定方法对其制剂中乌头总生物碱含量测定的差异，确定最优方法，为含乌头类生物碱药材的中药复方制剂中乌头总碱的含量评价提供参考。

1 仪器与试药

U-3000型紫外-可见分光光度计（日本日立公司）；电子分析天平 AE-240；精密 pH 计（PHS-3S）；超声机（KQ-250VDB型双频数显）。乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯，水为重蒸水。乌头碱对照品：购自中国药品生物制品检定所（0844-20003，供含量测定用）。镇痛灵颗粒：自制。

2 实验方法与结果

分别采用紫外分光光度法考察样品取样量与吸光度之间的相关性和采用酸碱滴定法考察样品取样量与滴定液消耗量的相关性，以比较紫外分光光度法和酸碱滴定法在测定乌头总碱含量方面的特点。

2.1 紫外分光光度法[1]

2.1.1 标准曲线的制备 精密称取乌头碱对照品5mg，置50 ml量瓶中，加氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（每1 ml中含乌头碱0.1mg），精密吸取对照品溶液 1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分别置分液漏斗中，依次精密加入氯仿至20 ml，再精密加入pH3.0醋酸盐缓冲液（称取无水醋酸钠0.15 g，加水使溶解，加冰醋酸5.6 ml，用水稀释至500 ml，摇匀，并在pH计上校正）20 ml和0.1%溴甲酚绿溶液（取溴甲酚绿0.2 g，加0.05 mol/L氢氧化钠溶液3.2 ml使溶解，用水稀释至200 ml，摇匀）2 ml，强力振摇 5 min，静置 20 min，分取氯仿层，用干燥滤纸滤过，同时制备空白对照，滤液分别在412 nm的波长处测定吸收度。以吸收度为纵坐标，对照品量（mg）为横坐标，绘制标准曲线。得回归方程：Y=1.321X+0.211 5，R2=0.995 5。结果表明：乌头碱在0.1～0.5 mg范围内线性关系良好。

表1 标准曲线结果

2.1.2 测定法 取镇痛灵干膏粉（批号：20070326）适量，研细，分别取 1 g、2 g、3 g、4 g、5 g（各 2 份），精密称定，放入三角瓶内，加乙醚∶氯仿∶无水乙醇（16∶8∶1）的混合液25 ml和氨试液1.5 ml，摇匀，放置24 h，取出后于振荡器上振摇5 min，取出静置，过滤，残渣用混合液洗3次，合并滤液，滤液水浴蒸干，用乙醚50 ml溶解转移至分液漏斗中，用0.05 mol/L硫酸溶液萃取4次（每次10 ml），分取硫酸层，过滤，合并滤液。置另一分液漏斗中，加浓氨4 ml，摇匀，用氯仿提取 4 次（20 ml、20 ml、10 ml、10 ml），分取氯仿层，滤过合并滤液，蒸干。残渣于105℃烘1 h，取出放冷，加pH3.0的NaAc-HAc缓冲液溶解，转移并定容至25 ml容量瓶中，备用。精密吸取供试品溶液20 ml于分液漏斗中，精密加入氯仿20 ml和0.1%溴甲酚绿溶液2 ml，振摇5 min，静置20 min，分取氯仿层，依法测定吸收度，记录，以浸膏量和吸收度的均值做相关性分析，即得。

2.2 酸碱滴定法[2]精密称取镇痛灵浸膏（批号：20070326）1.0 g、1.5 g、2.0 g、2.5 g、3.0 g、3.5 g，每个重量称取2份，分别置于三角烧瓶中，加入乙醚∶氯仿（3∶1）混合液 30 ml和氨试液 3 ml，摇匀，放置过夜。取出，过滤，残渣加乙醚∶氯仿（3∶1）混合液20 ml，振荡1 h，过滤，残渣用混合液洗2次，每次10 ml，合并滤液，置水浴中蒸干，用混合液溶解，蒸干，用5 ml无水乙醇溶解，并转移至25 ml容量瓶中，精密加入0.01 mol/L硫酸滴定液10 ml，加水至刻度，放置20 min，滤过，精密吸取续滤液10 ml于小三角烧瓶中，加甲基红指示液1滴，用0.02 mol/L浓度NaOH滴定液滴定至黄色，记录所消耗的NaOH量，并换算成被反应硫酸滴定液的量，以浸膏量平均值与被反应硫酸滴定液量的均值做相关性分析，即得。

2.3 实验结果

2.3.1 紫外分光光度法实验结果 见表2。以浸膏量平均值（g）为横坐标，以平均吸收度为纵坐标做相关性比较，得相关性方程为：Y=0.0107X+0.7153，R2=0.5947。

表2 紫外分光光度法实验结果表

2.3.2 酸碱滴定法实验结果 见表3。以浸膏量平均值（g）为横坐标，以平均被反应硫酸滴定液的量（ml）为纵坐标做相关性比较，得相关方程为：Y=1.393 7X+0.564 6，R2=0.991 9。

表3 酸碱滴定法实验结果表

3 讨论

从上述两种方法的比较结果来看，在中药复方制剂中测定乌头类总生物碱的含量，以酸碱滴定法更适合，样品取样量与消耗硫酸滴定液的量具有较好的相关性（R2=0.991 9），不同称样量所测样品中乌头类总生物碱含量重复性较好（RSD%=7.34%）。而使用紫外分光光度法测定镇痛灵中乌头总碱的含量，其取样量和吸收度均值之间的相关性较差（R2=0.594 7），并且实验操作复杂，误差产生较大。这与相关文献报道的结果相符合[3]。但是滴定法测定中药复方制剂中乌头类总生物碱的含量，受到其他成分的干扰，本次实验中同时测定了阴性样品消耗硫酸滴定液的量，通过该量计算出的乌头类总生物碱含量为0.25%，约占所测得总浸膏中乌头类总生物碱含量（2.09%）的十分之一，所以用酸碱滴定法测定中药复方制剂样品中乌头类总生物碱含量的专属性仍需要进一步研究。

[1]王苏会.抗风湿颗粒的制备工艺及质量标准研究[D].北京:北京中医药大学,2005

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].2010年版一部.北京:中国医药科技出版社,2010.111

[3]何军,祝林,奉建芳.附子总生物碱含量测定方法比较[J].现代中药研究与实践,2003,17(6):20-21