一起鸡坏死性肠炎与球虫病混合感染的诊疗

艾地云 张腾飞 汪宏才 罗玲 王红琳 温国元 罗青平 张蓉蓉 邵华斌

摘要：对湖北省宜昌市某鸡场送检的6只病鸡进行了病理剖检、球虫粪检及病原菌的分离鉴定试验。剖检病鸡可见小肠、盲肠胀气，小肠黏膜增厚、溃疡、有散在出血点，盲肠内有血色稀便；盲肠粪便涂片镜检可见大量球虫卵囊；从小肠内容物中分离鉴定到A型产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）。结合临床症状，诊断该起病例为鸡坏死性肠炎与球虫的混合感染。

关键词：蛋鸡；鸡坏死性肠炎；球虫病；产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）；诊断与治疗

中图分类号：S858.31 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）21-5345-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.21.035

Diagnosis and Treatment of Necrotic Enteritis and Coccidiosis Co-infection

in Roman Powder Laying Hens

AI Di-yun，ZHANG Ten-fei，WANG Hong-cai，LUO Ling，WANG Hong-lin，WEN guo-yuan，

LUO Qing-ping，ZHANG Rong-rong，SHAO Hua-bin

（Institute of Animal and Veterinary Science，Hubei Academy of Agricultural Sciences/Hubei Key Laboratory of Animal Embryo Engineering and Molecular Breeding，Wuhan 430064，China）

Abstract： In June 2014，more than 200 Roman powder laying hens with only 63 day-old were dead because of the outbreak of an acute deaths in Yichang， Hubei.The hens were apathetic， loss of appetite， and steak dark red thin stool. In order to diagnose the desease， To send the samples of 6 sick chicken pathologic autopsy， coccidium droppings inspection， separation and identification of pathogenic bacteria.Results show that the autopsy sick chicken intestine and caecum bilge gas， thickening of the small intestinal mucosa， ulcers， there are a lot of pinpoint petechiae， appendix there were bloody stools. Appendix feces smear microscopy is a lot of chicken ball egg sac. From the small intestine contents identification to type A Clostridium perfringens.It was confirmed that the cases were caused by necrotic enteritis and coccidiosis mixed infection according to above-mentioned laboratory test results and clinical symptoms.

Key words： laying hens； necrotic enteritis； coccidium； Clostridium perfringens； diagnosis and treatment

鸡坏死性肠炎（Necrotic enteritis，NE）又称肠毒血症、烂肠症，由产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）引起的一种以侵害鸡肠道，引起肠道出血、溃疡、坏死为主要特征的疾病[1，2]。鸡球虫病（Coccidiosis）是鸡常见的一种急性流行性原虫病，以消瘦、贫血、血痢、生长发育受阻为特征[1]。鸡坏死性肠炎常与小肠球虫病并发或继发，呈全球流行态势，严重危害养禽业的发展[3-5]。

2014年6月，湖北省宜昌市某鸡场散养的1万多只63日龄罗曼粉蛋鸡发病，病鸡在临床上出现精神萎糜、食欲不振、羽毛蓬乱、下痢、排暗红色稀便等临床症状。通过对病鸡样品的病理剖检、产气夹膜梭菌的分离鉴定、球虫粪检，结合临床症状，诊断该起病例为鸡坏死性肠炎与球虫病混合感染所致，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病料来源 湖北宜昌市某鸡场送检的6只63日龄发病的罗曼粉蛋鸡。

1.1.2 培养基 CW琼脂基础（含卡那霉素）、50%卵黄盐水悬液为青岛日水生物技术有限公司产品；含卡那霉素、卵黄的CW琼脂培养基按使用说明书自制；细菌微量生化反应管为杭州微生物试剂有限公司产品。

1.1.3 参考菌株 A型产气荚膜梭菌（C57-12株）、C型产气荚膜梭菌（C59-37株）购自中国兽医药品监察所；鸡源大肠杆菌由本研究室分离保存。

1.1.4 引物设计 PCR特异引物序列参照文献[5]，由生工生物工程（上海）有限公司合成，α-毒素基因、β-毒素基因预期片段分别为402、196 bp。

1.2 方法

1.2.1 病理剖检 解剖病鸡观察其病理变化。

1.2.2 球虫粪检 采用饱和盐水漂浮法。取5～10 g盲肠粪便于烧杯中，加入饱和盐水搅拌、过滤，将滤液倒入直径1.5～2.0 cm的试管中至液面凸出管口，上放盖玻片，静置30 min，平移此盖玻片至有一滴甘油的载玻片上，显微镜下观察球虫卵囊。

1.2.3 细菌的分离与鉴定 取小肠内粪便少许，接种于CW琼脂培养基，42 ℃厌氧培养24 h，选取单个疑似菌落接种于紫牛乳培养液中，42 ℃，厌氧培养6～9 h。选取单个疑似菌落涂片，革兰氏染色、镜检。并分别接种于葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、明胶、甘露醇、H2S、硝酸盐还原、蛋白胨水微量生化反应管，进行生化鉴定。

采用多重PCR法鉴定细菌毒素基因型[5]。用煮沸法抽提已分离鉴定的产气荚膜梭菌及参考菌株的模板DNA。反应体系：10×PCR Buffer 5.0 μL，dNTP 1.0 μL（10 mmoL/L），上、下游引物各1.0 μL（10 mol/L），Taq DNA聚合酶2.5 U，模板10 μL，用灭菌去离子水补足至50 μL。反应程序： 94 ℃预变性5 min；94 ℃变性1 min，55 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，30个循环；72 ℃延伸10 min，4 ℃保温。扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳检测，对扩增的基因片段进行测序分析，PCR产物测序由生工生物工程（上海）有限公司完成。

2 结果与分析

2.1 病理剖检

病鸡剖检可见小肠胀气，肠壁增厚，肠管剪开后自行外翻，黏膜上有斑状溃疡及散在出血点，盲肠高度胀气、呈暗红色、盲肠内有血色稀便。

2.2 球虫粪检

病鸡盲肠粪便镜检可发现大量约20 μm×15 μm大小的长卵圆形球虫卵囊。

2.3 细菌的分离与鉴定

2.3.1 菌落形态 经CW琼脂培养可见圆形、微隆起、卵黄色、表面褶皱、菌落周围形成白浊环、中等大小的疑似菌落生长。

2.2.2 紫牛乳反应 分离菌株的紫牛乳反应均呈阳性，出现爆裂发酵现象，此试验对产气荚膜梭菌具有特征性的鉴别意义。

2.3.3 细菌形态观察 分离菌株经革兰氏染色后，在油镜下观察均可见大量，长4～8 μm，宽1.0～1.4 μm，单在、成双呈短链状的两端钝圆的革兰阳性、有荚膜的粗大杆菌。

2.3.4 生化试验 分离菌株葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、明胶、H2S、硝酸盐还原均呈阳性反应，甘露醇、吲哚均呈阴性反应。

根据分离菌株的菌落形态、紫牛乳反应、细菌形态、生化试验结果均符合产气荚膜梭菌特性，说明分离菌株均为产气荚膜梭菌。

2.3.5 细菌毒素基因型鉴定 多重PCR反应结果显示，从分离菌株中均可扩增出α-毒素基因片段（长度402 bp），与预期扩增的基因片段大小一致；均没有扩增出β-毒素基因片段（长度196 bp），见图1。扩增出的α-毒素基因片段序列测定结果与GenBank中已发表的产气荚膜梭菌α-毒素基因序列同源性达到99%。说明6株分离菌株毒素基因分型结果均为A型。

根据病鸡的剖检病理变化、球虫粪检及产气荚膜梭菌的分离鉴定结果，结合临床症状、诊断该鸡群混合感染坏死性肠炎和球虫病。

3 讨论

山地放养鸡易感染球虫导致肠黏膜损伤，而产气荚膜梭菌是条件致病菌，小肠粘膜损伤是重要的诱发因素，所以临床上常见鸡球虫病与坏死性肠炎混合感染[1，3，4]。鸡坏死性肠炎与球虫病一年四季皆有发生，但在气温多变、高温潮湿的夏秋季节发生较多。

鸡坏死性肠炎的病原为A型或C型产气荚膜梭菌，目前湖北省内皆为A型产气荚膜梭菌，与文献报道[2]的中国其他省份一致。球虫病肠道的病理变化和部位与球虫的种类有关，该起病例为毒害艾美尔球虫，主要为害十二指肠和小肠的中段[1，6]。

目前主要用药物防治鸡坏死性肠炎、球虫病，产气加膜梭菌及鸡球虫易产生耐药性，应定期轮换用药。鸡球虫病还可采用疫苗进行预防，但鸡球虫种类多，免疫球虫弱毒苗有一定效果，但有时未能提供坚强的保护。在饲料中添加益生素、酶制剂及中草药制剂可提高鸡肠道的健康状况，能一定程度预防该病[7-9]。

该起病例用抗球虫药及林可霉素、青霉素、酒石酸泰乐菌素抗菌药饮水5 d，疗效显著。

参考文献：

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[2] 陈海宁，廖申权，戚南山.鸡产气荚膜梭菌的分离鉴定及药敏试验[J].动物医学进展，2013，34（12）：228-232.

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[4] 董剑峰，赵克华，罗进昌.一起肉鸡坏死性肠炎与慢性小肠球虫病混合感染的诊治体会[J].畜禽业，2015（2）：89-90.

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