鸡油菌多糖含量的测定及抗氧化活性的研究

郭豫梅

（陕西理工学院化学与环境科学学院，陕西 汉中 723001）

鸡油菌多糖含量的测定及抗氧化活性的研究

郭豫梅

（陕西理工学院化学与环境科学学院，陕西 汉中 723001）

采用热水浸提、乙醇醇沉法从鸡油菌中提取多糖，测得鸡油菌多糖含量为7.93%。测定了鸡油菌多糖对超氧自由基负离子（O2·-）及羟基自由基（·OH）的清除作用，以此来评价鸡油菌的抗氧化活性的能力。鸡油菌多糖对羟基自由基的清除率为68.2%，对超氧自由基负离子的清除率为65.3%。

鸡油菌；多糖；抗氧化活性

鸡油菌（Cantharellus cibarius），别名黄丝菌、杏菌，是一种外生菌根真菌，属真菌界，担子菌门，担子菌纲，鸡油菌目，鸡油菌科和鸡油菌属［1］。其子实体肉质，杏黄色、枇杷黄色或蛋黄色，有杏仁果的香气，微甜。研究表明，鸡油菌富含胡萝卜素、VA、VC和铁、钙、磷等多种矿物质元素。其性平，味甘，具有清肝、明目、利肺、和胃、益肠、美容和抗衰老等功效［2-3］。

真菌多糖作为一类天然活性产物，大量的研究表明其具有增强免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、降低血糖、抗衰老、抗辐射等生理功效［4-5］。本实验采用热水浸提法对鸡油菌多糖进行提取，并研究了鸡油菌多糖对羟基自由基及超氧自由基负离子的清除作用，所得结果可为鸡油菌在食品、医药等领域的应用提供一定的理论依据。

1 材料和方法

1.1 材料与试剂

鸡油菌：购于陕西汉中。

葡萄糖标准品、乙醇、95%乙醇、蒽酮、Tris-HCl、邻苯三酚、98%浓硫酸、水杨酸、过氧化氢、硫酸亚铁、浓硫酸、浓盐酸均为分析纯。

1.2 仪器

FW177型粉碎机，HH-2型电热恒温水浴锅，ALC-210.3电子天平，RE-52A旋转蒸发仪，722E型可见分光光度计，101型电热鼓风干燥箱，台式离心机。

1.3 方法

鸡油菌样品加入蒸馏水，煮沸2h，抽滤，滤液经减压浓缩，然后加入4倍体积95%乙醇，剧烈搅拌至4℃冰箱中醇沉，过夜，然后离心，回收上清液中乙醇，沉淀用少量蒸馏水溶解，干燥后称重。蒽酮-硫酸法［6］测定鸡油菌多糖的含量。

1.4 葡萄糖标准溶液的配制（蒽酮-硫酸法）

准确称取0.0250g葡萄糖标准品，溶于250mL容量瓶中，配置成0.1g·L-1的葡萄糖标准溶液，准确移取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL置于6个试管中，用蒸馏水定容到2.00mL，然后分别加入4.00mL蒽酮试剂，迅速浸入冰水浴中冷却，各管加完后一起浸入沸水浴中，瓶口加盖玻璃球，以防蒸发，自水浴重新计算时间，准确煮沸10min取出，用蒸馏水冷却，室温下放置10min左右，于620nm波长处比色。以同样处理的重蒸馏水为空白，进行比色。

1.5 抗氧化活性的测定

1.5.1 对超氧自由基（O2·-）的清除作用

采用邻苯三酚自氧化法［7］测定。取0.05mol·L-1、pH=8.2的Tris-HCl缓冲溶液4.5mL加入含有4.2mL蒸馏水的试管中，放置于25℃水浴中加热20min，分别加入不同浓度的试样水提物溶液0.1mL，加入在25℃水浴中预热的3mmol·L-1邻苯三酚（由10mmol·L-1HCl配置）0.3mL，混合均匀后25℃水浴中反应4min，加入2滴8mol·L-1的HCl 结束反应，在420nm波长处测定吸光度（样品管以同浓度的试样醇提物溶液作参比）。模型组以0.1mL蒸馏水代替样品试液。超氧自由基（O2·-）按以下公式计算清除率。

1.5.2 对羟基自由基的清除［8］

反应体系中加入9mmol·L-1FeSO4、1mL、9mmol·L-1水杨酸-乙醇1mL，不同浓度的鸡油菌多糖溶液1mL。最后加入6mmol·L-1的 H2O21mL开始反应，37℃反应0.5h，以蒸馏水为参比，于510nm波长下测定各浓度的吸光度。以9mmol·L-1FeSO4、1mL，9mmol·L-1水杨酸-乙醇1mL，不同浓度的鸡油菌多糖溶液1mL和1mL蒸馏水作为多糖的本底吸收值。羟基自由基清除率P（%）表示为：

式中：Ao为空白对照液的吸光度；Ax为加入鸡油菌多糖溶液后的吸光度；Axo为不加H2O2的鸡油菌溶液本底的吸光度。

2 结果与分析

2.1 鸡油菌多糖含量的测定

以葡萄糖浓度（mg·mL-1）为横坐标，吸光值（A）为纵坐标作图，结果见图1。

图1 葡萄糖标准曲线

由图1可以看出，在葡萄糖浓度0～0.06mg·mL-1的范围内，葡萄糖浓度与吸光值线性关系良好，标准曲线方程为y=0.0063x-0.0214，回归系数R2=0.9963。经计算，得出鸡油菌多糖的含量为7.93%。

2.2 抗氧化活性的测定

2.2.1 多糖对超氧自由基负离子（O2·-）的清除作用图2是鸡油菌多糖对超氧自由基负离子的清除作用。由图2可以得出，随着鸡油菌多糖浓度的增大，鸡油菌多糖对超氧负离子的清除率也逐渐增大，清除率与浓度呈正相关。当鸡油菌多糖浓度达到0.6mg·mL-1时，清除率为65.3%。浓度为0.6mg·mL-1时，鸡油菌多糖的清除效果最佳。

图2 鸡油菌多糖对超氧自由基负离子的清除作用

2.2.2 多糖对羟基自由基的清除作用

图3是多糖对羟基自由基的清除作用。由图3可以得出，随着鸡油菌多糖浓度的增大，鸡油菌多糖对羟基自由基的清除率也增大，清除率与浓度呈正相关。当鸡油菌多糖浓度达到0.6mg·mL-1时，清除率为68.2%。随着鸡油菌多糖浓度的进一步增大，清除率有所下降。结果表明，鸡油菌多糖对羟基自由基的最佳清除效果的浓度为0.6mg·mL-1。

图3 鸡油菌多糖对羟基自由基的清除作用

3 结论

采用热水浸提法在最佳工艺条件下对鸡油菌多糖进行提取，并利用蒽酮-硫酸法绘制葡萄糖标准曲线方程，测得鸡油菌多糖的提取率为7.93%。并通过对鸡油菌多糖清除自由基能力的测定，确定其有较强的清除超氧自由基和羟基自由基的能力，清除率分别为65.3%和 68.2%，可将其作为抗氧化剂应用到食品和医药行业中，这将为进一步促进天然抗氧化剂的研究与开发起到一定的积极作用。

［1］ 寥显辉，杨燕红.食用菌类保健食品的开发探讨［J］.农业科技，2008，11（7）：241-242.

［2］ 车振鹏.“三菌”复合保健口服液的功效研究（一）［J］.食品科技，2002（2）：69-70.

［3］ 王茂盛，连宾，梁宗琦，等.鸡油菌多糖的提取及组成分析［J］.重庆大学学报，2005，28（7）：118-121.

［4］ 钟耀光，临难，王淑琴.香菇多糖的抗氧化性能与抑菌作用研究［J］.食品科技，2007（7）：141-144.

［5］ 王斌，连宾.食药用真菌多糖的研究与应用［J］.食品与机械，2005，21（6）：96-99.

［6］ 张惟杰.糖复合物生化研究技术（第1版） ［M］.杭州：浙江大学出版社，1994.

［7］ 张晓强，浦跃朴，尹立红，等.冬虫夏草及人工虫草菌丝体对超氧阴离子自由基和羟基自由基清除作用的实验研究［J］.中国老年杂志，2003（23）：773-775.

［8］ 李志洲.美味牛肝菌多糖的抗氧化性［J］.食品与发酵工业，2007，33（4）：49-51.

Determination of Polysaccharide in Cantharellus Cibarius and its Antioxidant Activity

GUO Yu-mei
（School of Chemistry & Enviromental Sciences， Shaanxi University of Technology， Hanzhong 723001， China）

The polysaccharide in cantharellus cibarius was obtained by hot water extraction and ethanol deposit. The content of polysaccharide was 7.93% by spectrophotometer. The antioxidant activities of polysaccharide were studied. Percentage clearance of the superoxide radical （O2·-） was 65.3%， and percentage clearance of the hydroxyl free radical （·OH） was 68.2%.

Q 539

A

1671-9905（2015）09-0004-03

郭豫梅（1975-），女，讲师，博士在读，主要从事天然产物的研究与开发的研究

2015-06-26

Abstract： cantharellus cibarius； polysaccharide； antioxidant activity