百花牌甘宁片对化学性肝损伤辅助保护作用的研究

郭利军　殷客卿　陈茜颖　苏中夏　李君艳

（北京百花蜂业科技发展股份公司，北京100176）

百花牌甘宁片对化学性肝损伤辅助保护作用的研究

郭利军殷客卿陈茜颖苏中夏李君艳

（北京百花蜂业科技发展股份公司，北京100176）

目的：研究百花牌甘宁片对化学性肝损伤的辅助保护作用。方法：采用乙醇复制小鼠肝损伤模型，测定肝匀浆内的丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）、甘油三酯（TG）含量，并观察肝脏的病理组织学病变情况。结果：高剂量组小鼠肝匀浆中的MDA、还原型GSH、TG均低于模型组，肝细胞脂肪变性程度轻于对照组。结论：百花牌甘宁片对化学性肝损伤有辅助保护作用。

百花牌甘宁片；酒精性肝损伤；保护作用

百花牌甘宁片是以葛根提取物、丹参提取物、五味子提取物、油菜花粉为主要原料制成的具有对化学性肝损伤有辅助保护功能的保健食品。

葛根提取物含多种黄酮类成分，可通过清除自由基和抗脂质过氧化途径而降低血糖黏度，促进血液循环，使酒精加速排泄，减少对肝脏及其他各系统的损害［1-7］；丹参中的丹参酮能消除线粒体脂质过氧化过程中产生的脂质自由基，抑制活化肝星状细胞的增殖，对多种原因造成的肝损伤有一定的保护作用［8-11］；五味子提取物具有抗氧化的作用，并能促进肝脏蛋白质和糖原的合成［12-16］；油菜花粉中含有大量的抗氧化物质，从而防止自由基对肝细胞膜及亚细胞结构的脂质过氧化损伤，维持肝细胞膜的完整性［17-20］。这四种原料功效明确，无配伍禁忌，可联合发挥辅助保护化学性肝损伤的作用。本实验旨在评估百花牌甘宁片对化学性肝损伤的辅助保护作用，为其保健功能提供依据。

1　材料与方法

1.1试验动物

SPF级昆明种雌性小鼠，体重18～22 g，共50只。由湖北省实验动物研究中心提供。实验室温度20～26℃，湿度40～70%。按人体推荐日摄入量0.05 g/kg BW，分别扩大10、20、30倍（0.5 g/kg BW、1.0 g/kg BW、1.5 g/kg BW）设置低、中、高三个剂量组，另设蒸馏水阴性对照组及50%乙醇模型对照组，每组10只。用乙醇（分析纯）造成肝损伤模型，乙醇浓度为50%（以蒸馏水稀释），灌胃量14ml/kg BW。

1.2样品来源

百花牌甘宁片为黄色片剂，来源于北京百花蜂业科技发展股份公司。人体推荐日摄入量为3.0 g/60kg BW，即0.05 g/kg BW。试验时，分别称取受试物5.0 g、10.0 g、15.0 g用蒸馏水溶解定容至200 ml，浓度分别为0.0225 g/ml、0.05 g/ml、0.0725 g/ml，灌胃前充分混匀。

1.3实验方法

按照《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）的方法进行。各剂量组每日经口灌胃相应浓度的受试物，小鼠灌胃容量均为0.2 ml/10g BW，阴性对照组和肝损伤模型对照组给予等量蒸馏水。小鼠每周称重两次，按体重变化调整受试物灌胃量。实验结束时将模型对照组和三个剂量组一次灌胃给予50%乙醇14 ml/kg BW，阴性对照组给予等量的蒸馏水。禁食16 h后处死大鼠，快速取出肝脏，取0.5 g肝脏制备肝匀浆后进行生化指标的检测及病理组织学检查。

2　检测指标

2.1体重

小鼠每周称量体重两次。

2.2肝匀浆中丙二醛、还原型谷胱甘肽、甘油三酯检测

丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所，甘油三酯（TG）采用日立公司生产的7020型全自动生化分析仪检测。

2.3肝脏病理组织学检查

2.3.1病理观察材料

将各组剂量组小鼠肝脏从肝左叶中部做横切面取材，冰冻切片，苏丹Ⅲ染色，镜下观察脂滴在肝脏中的分布、范围和面积。

2.3.2病理观察

从肝脏的一端视野开始记录细胞的病理变化，用40倍物镜连续观察整个组织切片。主要观察脂滴在肝脏中的分布、范围和面积。分别记录每个视野中的各种病变所占视野的面积，根据阳性细胞的多少和分布的范围，按0、1、2、3、4分进行评分，累计所观察视野的病变总分。

2.3.3评分标准

肝细胞脂肪染色共分五级。

0分：肝细胞内脂滴散在，稀少；

1分：含脂滴的肝细胞不超过1/4；

2分，含脂滴的肝细胞不超过1/2；

3分：含脂滴的肝细胞不超过3/4；

4分：肝组织几乎被脂滴替代。

2.4结果判定

按照《保健食品检验与评价技术规范》（2003版）对酒精肝损伤模型的规定，肝脏MDA、还原型GSH和TG三项检测指标结果阳性，可判定该受试样品对乙醇引起的肝损伤有辅助保护功能。或肝脏MDA、还原型GSH和TG三项检测指标中任二项阳性，且肝脏病理结果阳性，可判断该受试样品对乙醇引起的肝损伤有辅助保护功能。

3　结果

3.1对小鼠体重的影响

从上表可知，模型对照组、各剂量组小鼠的体重与阴性对照组比较均无显著性差异（P＞0.05），表明受试物对各剂量组小鼠试验前后的体重无明显影响。

表1　百花牌甘宁片对小鼠体重的影响

3.2对小鼠肝匀浆中MDA、还原型GSH和TG的影响

按14 ml/kg BW的剂量给予小鼠50%酒精后，与阴性对照组比较，模型对照组肝匀浆中MDA值升高、还原型GSH值结果降低、TG值升高，且均有显著性差异（P＜0.05），说明本次试验模型成立。与模型对照组比较，高剂量组肝匀浆中MDA值降低、还原型GSH值升高、TG值降低，且均有显著性差异（P＜0.05）。表明MDA和还原型GSH、TG值三项指标结果为阳性。

3.3对小鼠肝脏病理组织的影响

通过比较模型对照组与阴性对照组发现，肝脏脂肪细胞变性评分有显著性差异（P＜0.01），说明试验成功复制出了小鼠酒精性肝损伤模型。与模型对照组比较，高剂量组肝细胞脂肪变性程度减轻，有显著性差异（P＜0.05），病理组织学指标可判断为阳性。

4　结论

表3　百花牌甘宁片对小鼠肝脏病理组织学的影响

表2　各组小鼠肝匀浆中MDA、还原型GSH、TG测定值

肝脏是人体最大、最重要的解毒脏器，它对来自体外和机体自身代谢产生的毒素具有强大的防御解毒功能，但也导致肝脏容易受到毒性物质的损害。随着生活水平的提高，酒精导致的肝病在逐年增加。酒精进入肝脏代谢后，会产生大量自由基造成肝脏的氧化损伤，影响肝细胞的结构及功能，引起代谢紊乱，不能利用或无力贮存营养物质。而空气污染、生活环境恶化等现象带来了各种有毒有害物质，工作繁忙、熬夜等现代生活方式，都会加重肝脏的负担。

本试验表明，服用一定量的百花牌甘宁片能降低受试小鼠肝匀浆中MDA、TG含量，提高其肝组织中的还原型GSH含量，减轻其肝组织的脂肪变性程度。依据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）中的判定标准，百花牌甘宁片对小鼠化学性肝损伤有辅助保护作用。

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Study on protective effects of Baihua Ganning Tablets on chemical liver injury

Guo LijunYin KeqinChen XiyingSu zhongxiaLi Junyan
（Beijing Baihua Bee Industrial Technology&Development Co.,LTD.,Beijing 100176）

［Objective］This study is aimed at investigating the protective effects of Baihua Ganning Tablets on chemical liver injury.［Methods］At first,the alcoholic liver injury model group was induced by ethanol.Then malondialdehyde（MDA）,reduced glutathione（GSH）,and triglyceride（TG）in liver homogenate were measured,continuously pathologic histological changes of liver were observed.［Results］MDA,reduced GSH,TG in liver homogenate of high dose group were lower than alcoholic liver injury model group.Degree of Hepatocytes’fatty degeneration was lesser as well.［Conclusion］Baihua Ganning Tablets have protective effects on alcoholic liver injury.

Baihua Ganning Tablets；alcoholic liver injury；Protective effects