某区原因不明复发性流产与遗传性血凝因素的研究

许丽娜 王仙萍*

（山西省儿童医院、山西省妇幼保健院辅助生殖中心，山西 太原 030001）

某区原因不明复发性流产与遗传性血凝因素的研究

许丽娜 王仙萍*

（山西省儿童医院、山西省妇幼保健院辅助生殖中心，山西 太原 030001）

目的 探讨山西地区原因不明复发性流产与凝血因子V基因G1691A、凝血酶原基因G20210A以及5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C677T位点突变的关联性。方法 采用聚合酶链式反应扩增目的基因，并测序进行多态性分析，检测62例原因不明复发性流产者和83例正常对照组的凝血因子V基因G1691A、凝血酶原G20210A以及MTHFR基因C677T位点突变情况。结果 凝血因子V基因G1691A和凝血酶原基因G20210A在复发性流产者和对照组中均未发现突变；MTHFR C677T 基因型在流产组的分布频率较对照组明显升高，二者比较差异有统计学意义（χ2=9.624，P=0.008）。结论 山西地区原因不明复发性流产可能与凝血因子V基因G1691A、凝血酶原G20210A基因突变无关，而MTHFR基因C677T突变可能为复发性流产原因之一。

复发性流产；凝血因子；凝血酶原；亚甲基四氢叶酸还原酶

复发性流产（RSA）指与同一性伴侣连续2次或2次以上在妊娠20周前的胎儿（体质量≤500 g）丢失者。RSA是育龄期妇女的常见病之一，其发病机制复杂，主要包括遗传因素、解剖因素、内分泌异常、感染因素、免疫紊乱和血栓前状态等，但除此之外，仍有40%～50%的患者病因不明，临床上称之为原因不明复发性流产（URSA）[1]。目前国内外对于凝血因子V基因G1691A、凝血酶原基因G20210A和亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因C677T位点突变与原因不明复发性流产相关性的研究较多，但结论不一致。本研究对山西地区复发性流产患者运用聚合酶链式反应扩增目的基因，并测序进行多态性分析，研究上述基因位点是否存在突变，并探讨其与复发性流产的相关性。

1　资料与方法

1.1病例筛选。RSA组：2013年8月至2014年8月，在我院妇产科及生殖中心门诊就诊的62例原因不明复发性流产患者，年龄23～35岁，平均年龄29岁。病例组入选标准[2]：①夫妇双方染色体正常，无家族遗传病史；②排除生殖器畸形等解剖因素；③排除内分泌系统疾病；④TORCH均为阴性；⑤无静脉血栓史；⑥抗心磷脂抗体连续3次以上检查均为阴性（每次检查间隔4周以上）。对照组：为我院妇产科及生殖中心门诊育龄期妇女，共83例，年龄25～36岁，平均年龄30.5岁。至少有1次或1次以上成功妊娠史，而无自然流产、死产、死胎、胎儿宫内生长受限及无血栓性疾病史。

1.2方法

1.2.1DNA抽提：分别从对照组和病例组按照E.Z.N.ATM Blood DNA Kit（Omega，USA）试剂盒说明书提取外周血DNA。

1.2.2P C R扩增：①凝血因子V基因G 1 6 9 1 A引物序列：上游引物5- TCAGGCAGGAACAACACC-3，下游引物5-GTTACTTCAAGGACAAAATACC-TGTAAAGCT- 3；②凝血酶原基因G20210A引物序列：上游引物5- TCTAGAAACAGTTGCCTGGC-3，下游引物5-ATAGCACTGGGAGCATTGAAGC- ；③MTHFR基因C677T引物序列：上游引物5-AGTCCCTGTGGTCTCTTCATC-3，下游引物5-GGAGATCTGGGAAGAACTCAG-3。

表1　MTHFR基因C667T位点基因型频率及等位基因频率比较

1.2.3基因多态性测定：Vitrogen公司分别将三种PCR产物进行测序。

1.3统计学分析：所有数据均采用SPSS17.0软件进行统计学分析，其中计数资料采用卡方检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1凝血因子V基因G1691A：在RSA组和对照组中均未发现凝血因子V基因 G1691A位点存在突变。

2.2凝血酶原基因G20210A：在RSA组和对照组中也均未发现凝血酶原基因G20210A位点有突变。

2.3MTHFR基因C677T位点：在以上两组中均发现MTHFR基因C667T位点存在C→T突变。其中TT基因型在RSA组中的分布频率明显高于对照组，差异有统计学意义（χ2=8.297，P=0.004）。CC基因型在RSA组中的分布频率明显低于对照组，差异有统计学意义 （χ2=4.209，P=0.04）。CT基因型在两组中比较，差异无统计学意义（χ2=2.178，P=0.14）；而T等位基因频率在RSA组患者中明显高于对照组，两组比较差异有统计学意义（χ2=9.831，P=0.002）。详见表1。

3　讨论

目前研究发现复发性流产可能是遗传因素与环境因素相互作用所致，寻找复发性流产的易感基因，探讨其发病机制，是治疗和预防的关键[3]。现研究已发现[4]，凝血因子V基因G1691A、凝血酶原基因G20210A和MTHFR基因C677T位点等基因突变后导致血凝能力增强，可能引起血栓有关的疾病。而在妊娠期间，血液相对处于高凝状态，胎盘部位血栓形成会导致流产、胎盘早剥以及妊娠期高血压疾病等病理妊娠，故高凝因素与复发性流产相关性研究越来越受到重视。

MTHFR基因定位于染色体1P36.3，共有11个外显子。MTHFR是叶酸依赖性酶，具有遗传多态性，MTHFR基因C677T多态性可增加酶的热不稳定性。MTHFR酶缺陷可能导致胚胎停止发育、自然流产发生，从而增加血浆半胱氨酸浓度，引起血管内皮细胞损伤和毒性作用，激活血小板的黏附和聚集能力，导致胎盘血管栓塞性病变，是神经管缺陷及原因不明复发性流产的危险因素。

本研究在RSA组和对照组中均发现MTHFR基因C667T位点存在C→T突变。其中TT基因型在RSA组中的分布频率明显高于对照组，T等位基因频率在RSA组患者中明显高于对照组，比较均有统计学意义。认为MTHFR C677T突变与RSA相关，其中TT基因型突变明显增高，提示TT型基因突变可能是RSA发病危险因素之一。

综上所述，本研究显示山西地区MTHFR基因C667T位点的突变在RSA患者中明显升高，可能是RSA发病的危险因素之一。因为MTHFR基因突变引起的叶酸代谢异常有可能导致RSA发生，故孕期适当补充叶酸、维生素B12可能对进一步降低流产率有重要的临床意义。

[1] 汪希鹏,林其德,洪燕,等.原因不明复发性流产遗传性血凝因素研究[J].上海交通大学学报,2006,26(12):1361-1364.

[2] 陈惠丽,唐落韵,陈春宝,等.不明原因复发性流产与亚甲基四氢叶酸还原酶及甲硫氰酸合成酶还原酶基因多态性[J].中国优生与遗传杂志,2013,21(6):29-30.

[3] 徐俐,刘肖曼,张红岩,等.亚甲基四氢叶酸还原酶、凝血因子V和凝血酶原基因多态性与原因不明复发性早期流产的关系[J].中华妇产科杂志,2007,42(3):180-183.

[4] 宋绿茵,戚潜辉,余达贤,等.同型半胱氨酸代谢相关酶基因多态性与习惯性流产关系的研究[J].中华围产医学杂志,2005,8(3): 160-164.

R714.21

B

1671-8194（2015）36-0191-02