高效液相色谱法测定半夏糖浆中麻黄碱和伪麻黄碱含量

付静，朱月月，聂诗明

（湖北中医药大学药学院，湖北武汉430065）

高效液相色谱法测定半夏糖浆中麻黄碱和伪麻黄碱含量

付静，朱月月，聂诗明

（湖北中医药大学药学院，湖北武汉430065）

目的建立测定半夏糖浆中麻黄碱和伪麻黄碱含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法采用Welch（月旭）Ultimate XB-C18柱（250mm× 4.6mm，5μm），以pH=3.0的0.02mol/L磷酸二氢钠缓冲液（含0.4%的三乙胺）-甲醇（90∶10）为流动相，流速为1mL/min，检测波长为210 nm。结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱质量浓度分别在1.934 4～92.85μg/mL和2.481 3～119.10μg/mL范围内与峰面积线性关系良好，线性回归方程分别为Y=0.888 8X-0.067 2，r=1.000 0（n=6）和Y=0.691 1X-0.139 6，r=1.000 0（n=6），回收率均大于95.00%（n=6）。结论该方法分离度、线性关系、重复性、稳定性、回收率均符合要求，适合于半夏糖浆中麻黄碱和伪麻黄碱的含量测定。

半夏糖浆；麻黄碱；伪麻黄碱；高效液相色谱法

半夏糖浆由生半夏、麻黄、紫菀、桔梗、枇杷叶、远志、陈皮、甘草、薄荷油组方，具有止咳化痰的功效，临床常用于治疗咳嗽、多痰及支气管炎［1］。为更好地控制半夏糖浆的质量，本研究中以该方主药生半夏、麻黄为含量检测对象。由于生半夏和麻黄中均含有麻黄碱和伪麻黄碱，两组分为拟肾上腺素药，对心血管、胃肠均有作用［2］，故本研究中建立了半夏糖浆中麻黄碱和伪麻黄碱含量的测定方法，现报道如下。

1 仪器与试药

P680型高效液相色谱仪（戴安公司）；UVD-170型紫外检测器；十万分之一电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；SK7200HP型超声清洗机。半夏糖浆（湖北端正药业有限公司，批号为121201，121202，121203）；盐酸麻黄碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号为171241-201007，供含量测定用）；盐酸伪麻黄碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号为171241-201009，供含量测定用）；双蒸水（实验室自制），甲醇（美国天地公司）、乙醇及甲醇（国药集团化学试剂有限公司）等均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

称取盐酸麻黄碱对照品3.095mg，精密称定，置10mL容量瓶，用流动相定容，得盐酸麻黄碱对照品贮备液；精密称取盐酸伪麻黄碱对照品3.970mg，置10mL容量瓶，用流动相定容，得盐酸伪麻黄碱对照品贮备液；精密吸取半夏糖浆5 mL，加水5 mL稀释，用氨水调pH至11以上，用无水乙醚80 mL萃取4次，每次20 mL，挥干乙醚，残留物用流动相溶解并定容至10 mL，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；按处方及工艺制成不含生半夏、麻黄的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.2 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Welch（月旭）Ultimate XB-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：pH=3.0的0.02 mol/L磷酸二氢钠缓冲液（含0.4%的三乙胺）-甲醇（90∶10）；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：210 nm；进样量：20μL。在此色谱条件下，理论板数按麻黄碱峰计不少于6 000，色谱图见图1。

2.3 方法学考察

线性关系考察：将盐酸麻黄碱对照品贮备液、盐酸伪麻黄碱对照品贮备液分别稀释为系列质量浓度，精密吸取上述不同质量浓度的对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，按拟订方法测定色谱峰面积，以溶液的质量浓度（X）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归得盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的回归方程分别为Y=0.888 8X-0.067 2（r=1.000 0）和Y=0.691 1X-0.139 6（r=1.000 0）。结果表明，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱的质量浓度分别在1.934 4～92.85μg/mL和2.481 3～119.10μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取对照品溶液，照拟订色谱条件依法进样测定。结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰面积的RSD分别为0.84%和1.06%（n=5），表明仪器精密度良好。

图1 高效液相色谱图

重复性试验：取同一批样品5份，依法制备供试品溶液并按拟订色谱条件测定峰面积。结果，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰面积的RSD分别为0.69%和1.18%（n=5），表明该方法的重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于1，4，8，12，24 h时测定峰面积。结果盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱峰面积的RSD分别为0.74%和1.82%（n=5），表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验：精密吸取已知含量的同批次半夏糖浆6份，分别加入盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱，每个质量浓度各2份，制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

2.4 样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定，计算含量。3批样品每1mL以盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱计的总量为33～51μg，结果见表2。

3 讨论

测定麻黄碱的方法有分光光度法［3］、有薄层扫描法［4］、有高效液相法［5-6］，但这些方法一般都是测定盐酸麻黄碱的单种成分，很少有同时测定的。麻黄碱和伪麻黄碱为异构体，色谱分离通常比较困难。2010年版《中国药典（一部）》采用的是极性乙醚连接苯基键合硅胶柱，专门用于测定麻黄中麻黄碱和伪麻黄碱的含量［7］。本研究中以通用的C18柱，参考文献［8-10］，使用乙腈-水相关色谱条件，以pH=3.0的0.02mol/L磷酸二氢钠缓冲液-甲醇（90∶10）为流动相，获得了良好的分离效果。建立的方法色谱分离度、线性关系、重复性、稳定性、回收率均良好，适用于半夏糖浆中麻黄碱和伪麻黄碱的含量测定。

表1 盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的加样回收试验结果（n=6）

表2 样品含量测定结果（μg/mL）

［1］WS3-B-1527-93.中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂（第八册）［S］.

［2］郑萍，戴贵东，李汉青.麻黄碱及伪麻黄碱药理作用研究进展［J］.宁夏医学杂志，2002，24（2）：126-127.

［3］宣信长.紫外分光光度法测定麻地滴鼻液的含量［J］.安徽医药，2001，5（2）：65.

［4］黄洪.麻杏止咳糖浆中盐酸麻黄碱的含量测定［J］.中国药业，2001，10（10）：96.

［5］赵成.HPLC法测定散痰宁糖浆中盐酸麻黄碱的含量［J］.安徽医药，2004，8（5）：361.

［6］林月英，李红梅，窦国义.高效液相色谱法测定小儿咳喘灵冲剂中麻黄碱的含量［J］.天津药学，2004，16（4）：18.

［7］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：190-191.

［8］杨文远，杨美君.反相高效液相色谱法同时测定麻黄中麻黄碱和伪麻黄碱［J］.宁夏大学学报：自然科学版，1998，19（3）：253-254.

［9］成红娟，曲婷丽，刘锐玲，等.HPLC同时测定止嗽立效口服液中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱含量［J］.中成药，2009，31（2）：240-242.

［10］刘惠军，陈睿，王娟.HPLC测定宣肺清热合剂中盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱含量［J］.药学实践杂志，2010，28（3）：199-200.

Determination of Pseudoephedrine in Pinellia Syrup by HPLC

Fu Jing，Zhu Yueyue，Nie Shiming
（College of Pharmacy，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan，Hubei，China 430065）

Objective To establish a method for determining ephedrine and pseudoephedrine in pinellia syrup by HPLC.Methods Welch Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）column was used.0.02 mo/L sodium dihydrogen phosphate was used as buffer（0.4%Triethylamine，pH=3.0）-methanol（10∶90）was used as mobile phase.The flow rate was 1 mL/min.The detection wavelength was at 210 nm.Results The liner range of ephderine and pseudoephedrine were 1.934 4-92.85μg/mL and 2.481 3-119.10μg/mL.The equations of linear regression were Y=0.888 8X-0.067 2，r=1.000 0（n=6）and Y=0.691 1X-0.139 6，r=1.000 0（n=6）.The average recovery of ephedrine and pseudoephedrine were all＞95.00%（n=6）.Conclusion This method is simple，can separate the contents completely，and can be used as content determination method of ephedrine and pseudoephedrine in pinellia syrup.

pinellia syrup；ephderine；pseudoephderine；HPLC

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）22-0114-02

付静（1991-），女，在读硕士研究生，研究方向为中药新制剂、新技术，（电子信箱）565403063@qq.com；聂诗明，男，教授，研究方向为中药新制剂、新剂型，本文通讯作者，（电子信箱）163nsm@163.com。

2014-10-27；

2015-05-05）