注射用头孢美唑钠高分子聚合物检查方法研究

王瑜

【摘要】目的：建立注射用头孢美唑钠中高分子聚合物分离分析的质量控制方法。方法： 采用分子排阻色谱法，色谱柱为Sephadex G-10 （300 mm x 10 mm，40-120，，流动相A为0. 075 mol/L，磷酸盐缓冲液ph7，流动相B为水； 流速为1.5 ml/min， ，检测波长为280nm；结果在2. 897一144.9 N，g/ml范围内样品浓度与聚合物峰面积呈良好线性关系。结论：该方法快速、简便、准确、重复性好，适用于注射头孢美唑钠中高分子聚合物的分析。

【关键词】注射用头孢美唑钠 高分子聚合物 检查方法 研究

【中图分类号】R927 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）02-0228-02

经过大量的研究发现，β-内酰胺类抗生素中正是由于高分子聚合物的存在，使得患者出现了速发型过敏反应，因此可以将其看作是过敏原，而且通过大量的临床实践证实，高分子聚合物的含量越高，其引发的过敏反应的概率也就越大，所以制药人员必须严格控制该类抗生素中高分子聚合物的含量。也正是因为如此，我国最新颁布的药典中，对头孢美唑钠等抗生素药物中高分子聚合物检查方法进行了规定。B作为一种临床中应用最为广泛的药物，其抗菌效能得到了公认的证实，尤其对厌氧菌的作用更为显著，最为重要的是B，对β-内酰胺具有非常高的稳定性，此外，其耐受性也非常强，因为B体内分布非常好，所以几乎不会发生不良反应。

本文使用的试验方法，主要根据的是我国最新颁布的药典，采取法学验证的方法，对高分子聚合物进行有效的测定。本文选择使用了11种样品，经过大量的实验研究证明，本文所使用的检测方法所取得结果真实可靠，可以作为参考数据来使用。

一仪器和试药

1、仪器

高压液相色谱仪、检测器、色谱工作站、色谱柱。

2、试剂

蓝色葡聚糖2000、头孢美唑钠对照品（ 大熊制药株式会社提供） ； 注射头孢美唑钠 （ 大熊制药株式会社提供） ； 其他试剂均为分析纯。

二方法与结果

1、色谱条件

用葡聚糖凝胶G一10 （40一120μm为填充剂，不锈钢柱内径1m，柱高度40cm，以PH7.0 的0.075 mol/L磷酸氢二钠溶液-0.075 mol/L磷酸二氢钠（61：39） 为流动相A，以水为流动相B，流速为1 .5 ml/min检测波长为280nm。

2、溶液的制备

2.1对照品溶液，取头孢美唑钠对照品适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1 ml中约含30μg的溶液。

2.2样品溶液，取样品适量（ 约300mg） ，精密称定，置 10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.3蓝色葡聚糖 2000溶液，取蓝色葡聚糖2000约40mg，精密称定，置 100ml 量瓶中，加水溶解并稀释制成 0.4mg/ ml的溶液。

2.4分离度测试溶液，取头孢美唑钠约300mg，精密称定，置10ml量瓶，用0.4mg/ ml蓝色葡聚糖溶液溶解并稀释至刻度，摇匀。

3、系统适用性试验

以 A为流动相，吸取蓝色葡聚糖2000溶液及样品溶液各100ml分别注入液相色谱仪。再以B为流动相，吸取蓝色葡聚糖溶液2000对照品溶液各100μL。分别注入液相色谱仪，记录色谱图。蓝色葡聚糖2000在流动相A 和B中的理论塔板数分别为1459和 1169，拖尾因子分别为 1.35 和 0.92。在流动相 A和 B. 两种系统中蓝色葡聚糖2000保留时间比值为1.04； 对照品溶液主峰和样品溶液中高聚物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值为0.93-1.07。取分离度测试溶液进样100μL，用流动相A进行测定，高聚体的峰高与单体与高聚体之间的谷高比为8.0。

4、流动相B的选择与测定

选用水作为流动相B，用每1ml 约含30μg的头孢美唑钠溶液，进样100μl进行测定！结果表明头孢美唑钠在以水作为流动相的条件下能完全缔合形成表观分子量较大的缔合物，缔合物在Sephadex G一10凝胶色谱系统中的色谱行为与聚合物相似，都在Kav=0处流出，表现为单一色谱峰，利用这特点，采用自身对照外标法进行聚合物的定量。

5、专属性试验

5.1未破坏样品

取本品0.301g，置 10mg量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，依法测定。结果见表1

5.2头孢美唑钠对照品溶液F值测定的重复性.

F值为头孢美唑钠对照品溶液浓度与峰面積的比值，色谱条件测定头孢美唑钠对照品溶液峰面积，计算F值，见表2。

5.3样品聚合物的测定

取室温放置 5-24个月某公司生产的注射用头孢美唑钠样品 11 批，依法测定头孢美唑聚合物，结果聚合物含量在0.01%-0.03%范围内，见表3。根据样品测定结果，聚合物限度拟定为0.10%，两个规格共 11 批样品结果均符合规定，本品室温放置24个月聚合物均符合限度规定。

三讨论

首先，选择合理的波长，在该试验中，实验人员将PH值定为7，在此基础上，选择使用0.075 mol/L磷酸盐，将其看作是流动相A，选择两种波长作为的测定波长，一种是254nm，另一种是280nm，这两种波长测定同一批的样品，即为092450，经过经验证明，选择使用280nm波长效果最佳，其分离效果要好于254nm波长，因此本文试验中最终选择使用280nm波长。

其次，选择流动相A，，因为实验样品中聚合物含量非常低，1mL的头孢美唑钠溶液中只含有约30mg的头孢美唑钠，将其置于50℃水浴中，持续加热1小时，再将其取出。将此溶液放在PH值同为7，但是磷酸盐缓冲液含量不同的溶液中，，将此看作是最终选择的流动相A，将其放置在上述所选择的280nm波长的地方来进行测定，依据相关程序完成测定，结果表明，磷酸盐缓冲液含量为0.05 mol/L时，此缓冲液分离效果不佳；当磷酸盐缓冲液浓度达到0.02 mol/L时，其分离效果最佳，但是其具有非常大的弊端即灵敏度非常低；当磷酸盐缓冲液浓度达到0.075 mol/L以及0.1mol/L时，分离效果虽然没有0.02mol/L好，但是依然能够取得良好的分离效果，而且其灵敏度相对来说比较高，但是两者的灵敏度相比而言，0.075 mol/L要好于0.1mol/L，而且选择使用0.075mol/L磷酸盐缓冲液时，聚合物以及药物峰值能够恰到好处的分离，因此最终选择使用PH值为7，浓度为0.075 mol/L的缓冲液，即其中的磷酸盐的含量应该达到0.075 mol/L。

最后，正确选择分离度测试溶液，按照国家颁布的药典的详细的规定，在检查高分子杂质时，分子单体与聚合体应该达到良好的分离效果，但是如果两者分离效果没有达到规定的标准，可以选择使用相关的公式，即分离度=聚合体峰高÷单体与聚合体两者所产生的谷高，结果超过2，即为符合标准。因为高分子聚合物样品中高聚物非常少见，再加之，其对照品更加难以获得，这位实验增加了难度，为了能够保证实验顺利进行，在分离度溶液提取制备中，需要添加一定量的蓝色葡萄糖2000，其主要的作用就是使聚合物的峰值能够得到有效的增大，正常情况下，加入此种葡萄糖之后，聚合物的峰值大约是原来的1倍到2倍。这种检测方法，高聚物含量达到了0.12%，超出标准0.02%，而且峰高与谷高之间比值为8.0，符合国家药典规定的标准，以此可以选择使用这种方法。

参考文献

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