ERK5在结直肠癌肝转移组织中的表达及意义

刘婷

【摘要】目的 探讨结直肠癌肝转移患者原发灶ERK5蛋白表达及其临床意义。 方法 通过免疫组织化学SP方法检测ERK5蛋白在30例结直肠癌肝转移原发灶及癌旁正常黏膜组织的表达，分析其表达水平的差异。结果 ERK5蛋白在结直肠癌肝转移原发灶中的表达高于癌旁正常黏膜的表达，ERK5蛋白在淋巴结转移中的表达差异有统计学意义（P<0.05），与性别、年龄、分化程度及浸润深度无明显差异。结论 ERK5蛋白在结直肠癌肝转移患者原发灶中高表达，其可能参与结直肠癌肝转移的发生，对评价结直肠癌肝转移患者预后具有一定临床意义。

【关键词】 ERK5蛋白；结直肠癌肝转移；肿瘤转移

【中图分类号】R722.12 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）03-0131-01

结直肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤，肿瘤复发和转移是导致患者生存率低的主要原因，肝臟是最常见的转移器官，在初次确诊的结直肠癌患者中有少部分并发肝转移，因此，如何早期预测结肠癌肝转移是非常重要的。细胞外信号调节激酶5（ERK5）是最新发现的MAPKs家族中的一个重要的一级激酶，他通过Thr218/Tyr220双位点的磷酸化激活后进一步激活下游的癌基因，近期研究发现，ERK5通过促进血管的形成和血管内环境的稳定对维持肿瘤的生长起重要作用[1]。我们应用免疫组化技术检测ERK5蛋白在结直肠癌肝转移组织中的表达情况，探讨其在肿瘤转移中的作用及其临床意义。

资料与方法

1.1 研究对象

收集北京市平谷区医院病理科2009年1月至2012年6月30例结直肠癌肝转移患者，均经临床病理明确证实，男性19例，女性11例，年龄35-70岁，中位年龄60岁，术中收集手术切除的结直肠癌肝转移原发灶癌旁正常黏膜，距离原发灶边缘10厘米处，所有患者术前均未作化疗或放疗等抗肿瘤治疗。

1.2 免疫组化检测： ERK5兔抗人多克隆抗体（sc-5626，Santa Cruz），其余免疫组化试剂盒均购自福建迈新生物技术公司。采用免疫组织化学SP法，操作步骤严格要求说明书进行。用已知阳性片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。ERK5蛋白染色阳性表达为细胞浆染色，主要表现为胞浆内非均匀棕黄色颗粒。由2个独立和有经验的病理科医生判读。结果判读采用半定量积分分级，积分=染色强度×染色细胞比例。染色强度：0分为阴性（无色），1分为浅灰色，2分为淡黄色，3分为黄色，4分为棕黄色；染色细胞比例：0分为无阳性细胞，1分为1%-25%，2分为26—50%，3分为51-75%，4分为76-100%。两者相乘为总的分数，0-11分纳入低表达组，12-16分被纳入到高表达组。

1.3 统计学方法

采用SPSS19.0统计分析软件进行数据处理，比较采用X2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 结直肠癌肝转移原发灶与正常黏膜组织ERK5水平比较

对30例结直肠癌肝转移患者术后，利用免疫组化检测ERK5在原发灶和癌旁正常黏膜组织中的含量，并比较显示：ERK5蛋白在结直肠癌肝转移组原发灶中的高表达率为73.3%（22/30），ERK5蛋白在癌旁正常黏膜中的高表达率为33.33%（10/30），ERK5在结直肠癌肝转移原发灶中的高表达率明显高于癌旁正常黏膜组织，差异具有统计学意义（P<0.05）；

2.2 伴有肝转移的结直肠癌原发灶组织中ERK5蛋白的表达与临床病理特征的关系：结直肠癌肝转移原发灶中ERK5蛋白在淋巴结转移中的高表达率为80.00%，在无淋巴结转移组中ERK5蛋白的高表达率为30.00%，ERK5蛋白在有淋巴结转移组中比无淋巴结转移组中的阳性表达率升高，差异有统计学意义（P<0.05）。而原发灶中ERK5蛋白表达在性别、年龄、分化程度及浸润深度无明显差异（P>0.05）。

讨论

结直肠癌是较常见的恶性消化道肿瘤，发病率呈逐年增高的趋势，对人们造成的危害日趋严重，尤其是结直肠癌肝转移，严重影响患者生存。判断结直肠癌肝转移风险的因素较多，目前仍未有较高灵敏性及特异性的指标。

ERK5蛋白被报道在多个肿瘤的转移过程中有重要作用，其通过调控粘着斑激酶信号促进整合素介导的细胞粘附和增强癌细胞活力；同时，ERK5的激活可以促进Src蛋白相关的浸润粘附因子形成进而限制Rho蛋白的活性。以往研究表明与良性前列腺组织相比， ERK5上游激酶MEK5在前列腺癌细胞中表达增加，前列腺癌细胞的骨转移与MEK5的过高表达有关，MEK5的转染实验也证实它确实可以诱导前列腺癌细胞增殖、增强癌细胞活性并促进癌细胞转移。Ramsay[2]等的最新实验证实，ERK5介导的信号对前列腺原位转移癌模型有显著地促进形成作用，且在转移性前列腺癌细胞核中ERK5的表达较良性前列腺增生、原发性前列腺癌显著增高。Castro等[3]的研究提出，在乳腺肿瘤中，乳腺肿瘤激酶可在ERK5介导下被激活发生迁移，促进乳腺癌细胞的转移。Zen等[4]研究提示，ERK5过度表达后可通过调节细胞的有丝分裂促进肝癌细胞的生长，有报道ERK5的表达与口腔鳞状细胞癌的淋巴结转移有关。这些研究都表明ERK5信号通路在肿瘤侵袭和转移过程中起传递和放大信号的作用。

本研究发现，ERK5在结直肠癌肝转移原发灶中的的高表达率为73.3%，ERK5蛋白在癌旁正常黏膜中的高表达率为33.33%，在原发灶中的表达较正常结直肠黏膜组织明显升高，差异具有统计学意义。ERK5蛋白在结直肠癌肝转移原发灶中的表达与淋巴结转移有关，在有淋巴结转移的结直肠癌中，ERK5蛋白的表达量增加。一些研究结果[5]也已经证实了ERK5的过表达的恶性肿瘤具有更强的侵袭转移能力。其可能的原因是在外界因素的持续刺激下，ERK5在结直肠癌组织中的含量持续增加，这些ERK5可以通过与其下游底物如c-fos、AP-1、c-myc的结合介导细胞的异常增殖从而导致癌症的发展。与此同时，ERK5可以与一些因子如血管内皮生长因子（VEGF）、表皮生长因子（EGF）、粘附素等结合而使癌症细胞更具有侵袭力，而VEGF作为唯一受c-fos调控的促血管生成因子促进营养癌症细胞的血管异常增殖而使结直肠癌细胞更具有侵袭力。

综上所述，ERK5蛋白在结直肠癌肝转移患者的原发灶组织中高表达，其可能参与结直肠癌肝转移的发生，对评鉴结直肠癌肝转移患者预后具有一定临床意义。但对ERK5蛋白在结直肠癌进展过程中的分子机制尚不十分清楚，还需要进一步深入研究。

参考文献

[1] Hayashi M，Kim SW，Imanaka-Yoshida K， et al. Targeted deletion of BMK1/ERK5 in adult mice perturbs vascular integrity and leads to endothelial failure [J].J Clin Invest ，2004，113（8）：1138-1148.

[2] Ramsay AK， McCracken SR， Soofi M， et al. ERK5 signalling in prostate cancer promotes an invasive phenotype [J ]. Br Cancer， 2011， 104（4） ： 664-672.

[3] Castro NE， Lange CA. Breast tumor kinase and extracellular signalregulated kinase 5 mediate Met receptor signaling to cell migration in breast cancer cells [J]. Breast CancerRes， 2010，12（4）： R60.

[4] Zen K，Yasui K，Nakajima T，et al . MEK5 overexpression is associated with metastatic prostate cancer， and stimulates proliferation， MMP-9 expression and invasion，Oncogene（2003）22，1381-1389.

[5] Testa U，Pannitteri G，Condorelli.Vascular endothelial growth factors in cardiovascular medicine[J]. J Cardiovasc Med，2008，9（12）：1190-1221.

表1 结直肠癌肝转移患者原发灶与正常黏膜组织ERK5表达量比较

组织类型 例数 ERK5 表达 低表达 高表达癌旁正常黏膜 30 20 10原发灶 30 822表2 ERK5蛋白在结直肠癌肝转移患者原发灶中的表达及临床指标

临床指数 例数 原发灶中ERK5的表达 X2值 P值 低表达 高表达 性别男 19 6 13 0.354 >0.05女 11 5 6 年龄≤55 16 10 6 0.374 >0.05>55 14 7 7 分化程度高分化 8 6 2 中分化 15 10 5 0.142 >0.05

低分化 7 2 5 浸润深度浆膜内 18 10 8 0.590 >0.05浆膜外 12 7 5 淋巴结转移（-） 20 14 6 0.013 <0.05（+） 10 2 ERK5在结直肠癌肝转移原发灶有淋巴结转移中的表达（SP ×200）

ERK5在结直肠癌肝转移原發灶无淋巴结转移中的表达（SP×200）