如何探究促进“彩叶草”生根的生长素浓度例谈

王春梅

摘要：植物组培技术在当今社会已得到了广泛的推广和使用，初中生物教材也涉及这方面的知识，为使学生深入了解植物培养技术，特开设植物培养实验。本文就是按照植物培养实验的一般流程来介绍彩叶草的组织培养技术，包括彩叶草培养基的配制、彩叶草外植体的采集、外植体的消毒、彩叶草的接种、彩叶草的培养、炼苗、移植和移栽等过程。在这一操作过程中，培养学生严谨的科学态度和基本操作技能，全面提升学生的生物学素养。

关键词：彩叶草 组织培养 消毒和灭菌 科学态度 生物学素养

一、探究原理

植物細胞脱离了原来所在的植物体的器官或组织而处于离体状态时，处于无菌环境，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就有可能表现出全能性，发育成完整的植株。

二、实验用品

植物组织培养母液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，彩叶草，量筒，微量可调移液器，组培瓶，高压灭菌锅，超净工作台，酒精灯，解剖剪，解剖刀，接种盘，光照培养架等，彩叶草若干。

三、探究目的

掌握无菌操作技术，炼苗、移栽等技术，学习彩叶草组织培养的基本方法和步骤，培养学生养成严谨的科学态度和不断进取的探索精神。

四、实验准备

配制四种营养母液和0.5mg/mL NAA；高压灭菌消毒接种器械、接种器皿和蒸馏水、滤纸、烧杯等，紫外灯消毒工作服；酒精灯擦拭超净工作台并紫外灯消毒30min。

五、实验步骤

1.MS彩叶草培养基的配制：取母液1200mL，母液 Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各20mL，蒸馏水1400mL，与四种母液混在2000mL的烧杯中；用电子天平称量琼脂13g、蔗糖60g放入烧杯中，放在磁力搅拌器上进行搅拌，搅拌均匀后加热至融化，倒入烧杯中加蒸馏水至2000mL，用10%的NaOH溶液调节pH值到6.0，分成5等分，标号为A、B、C、D、E五个烧杯中，A烧杯不加任何激素，B烧杯加100uL NAA，C烧杯加200uL NAA，D烧杯加300uL NAA，E烧杯加400uL NAA，然后每个烧杯的培养基平均分装到30个组培瓶中。

2.彩叶草茎段接种：打开已消过毒的超净工作台，选择小风为台面风，用75%的酒精擦拭双手，点燃酒精灯放在接种盘附近，先用酒精对接种器械、接种器皿进行消毒，然后灼烧接种器械和接种器皿，待凉之后取刚刚消毒过的彩叶草的茎段，大约2cm左右为宜，按照植物的生长极性，将其插入培养基中，对瓶口和瓶盖进行消毒，立即拧紧接种瓶盖。

3.彩叶草生根培养：把接种后的组培瓶放在培养室的光照培养架上，培养温度控制在22-25℃，每日至少光照12h。发现茎段培养7天后开始有根生长，再过7天左右根长长2cm左右。

4.探究结果统计：A盘有0瓶生根；B盘有10瓶生根；C盘有25瓶生根；D瓶有15瓶生根；E瓶有7瓶生根。

5.结果分析：促进彩叶草生根的比较适宜的生长素浓度大约是200uL，要想知道彩叶草最适生长素浓度，还要进一步做实验，在200uL浓度左右再取值，重复上述实验，这样操作得出的结论会更科学。

6.彩叶草的移植：当组培苗在组培瓶中的根长到2-3cm左右时，就可以进行炼苗了，在自然条件下先闭瓶炼苗3天再开瓶炼苗3天，炼苗后洗净琼脂移植到多孔培养板上培养，以促使生出更多的根，此期间给予适宜的温度和湿度，时间大约1个月左右。

7.彩叶草的移栽：由于多孔培养板上含有灭过菌的珍珠岩和草炭土（比例为1：3），很好地促进了根系的生长，当苗高4-5cm且生长健壮时移栽到花盆或大田中。

六、组培苗污染现象、分析及处理

整个实验的任何一个阶段都有可能出现污染现象，在彩叶草的组织培养中由于我们采用彩叶草的茎为外植体，茎段虽然已经经过了消毒处理，但是也有污染的可能。在培养茎的第三天有几处红色的小点，这属于细菌污染；五天后出现白色或墨绿色绒毛絮状物，这属于真菌污染。有时候在同一瓶内既有细菌污染又有真菌污染，无论哪一种污染都将导致组培实验的失败，凡出现污染的组培苗或外植体一般都不能再用。我们采用的清除方法有：第一种是将污染的组培苗连组培瓶进行高压灭菌消毒，然后将封口膜打开把内部的组培苗和培养基一起倒掉，再把瓶子刷洗干净备用；第二种：如果被菌感染的组培苗不想经过高压灭菌消毒，对于细菌污染，则可以直接倒掉，对于真菌污染，由于真菌中的霉菌是用孢子进行繁殖的，则需要拿到离组培室较远的地方倒掉，要不然的话，霉菌产生的孢子会污染组培室中其他的无菌苗，但是这样的组培瓶在下次使用之前必须经过高压灭菌消毒处理。

七、总结

植物组织培养实验是当今生物实验教学的前沿科学，对生产生活具有十分重要的指导意义，对培养学生严谨的科学态度，探究生命科学的奥秘，提高学生操作技能和合作学习能力等方面，都具有十分重要的现实意义。教师应按照新课程标准的要求，积极探索实验教学新思路，为学生创作自主探究和合作学习的平台，全面达成生物教学目标，综合提升学生的生物学素养。

参考文献：

[1]吴中军.6-BA和NAA对诱导彩叶草芽和生根的影响[J].北方园艺，2009（10）.

[2]钟泰林，石柏林，钱奇霞.几种草本花卉繁育试验[J].浙江农林大学学报，2003（1）.

（责编 赵建荣）