高效液相色谱法测定不同产地葛根中葛根素、大豆苷元的含量

倪从蓉

乐清市中医院，浙江 乐清325600

高效液相色谱法测定不同产地葛根中葛根素、大豆苷元的含量

倪从蓉

乐清市中医院，浙江 乐清325600

目的：建立采用高效液相色谱法测定不同产地葛根中葛根素、大豆苷元含量的方法，为控制药材治疗提供参考。方法：采用HypersilODS2C18色谱柱，流动相为水-甲醇，梯度洗脱，流速：1mL/min；检测波长为250 nm，柱温为室温。结果：葛根素在0.020～10.1μg/μL的浓度范围内呈现良好的线性关系，平均回收率为99.8%，相对标准偏差（RSD）为3.25%；大豆苷元在0.013～6.56μg/μL的浓度范围内呈现良好的线性关系，平均回收率为98.9%，RSD为2.43%。结论：该方法可用于不同产地葛根药材中葛根素、大豆苷元的含量测定，且具有简便、快捷、重复性好等特点，可为不同产地葛根质量的控制提供依据。

高效液相色谱法；葛根；葛根素；大豆苷元

葛根为豆科植物甘葛藤（Puerariu thom sonil Benth）的干燥根，在我国南方地区分布较广，具有解肌退热、生津止渴、通经活络的功效，临床主要用于外感发热、麻疹不透、眩晕头痛、中风偏瘫等［1～3］。现代研究表明，葛根中含有大量的葛根素、大豆苷元等黄酮类成分，另含有胡萝卜素、氨基酸、香豆素类等，具有较大的药用价值［4］。不同产地葛根中含有的葛根素、大豆苷元、大豆苷等存在较大的差异，直接入药有可能影响临床治疗的效果［5］。笔者建立高效液相色谱法测定不同产地葛根中葛根素、大豆苷元含量的方法，为控制葛根的治疗提供参考，现报道如下。

1 材料与仪器

1.1 材料 葛根素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111005-201108）；大豆苷元对照品（中国药品生物制品检定所，批号：120916-201106）；不同产地葛根原药材均购自安徽亳州中药材市场，经鉴定均为葛根；甲醇（上海振兴化工一厂，色谱纯，批号：201213104）；水为超纯水；其它试剂均为分析纯。

1.2 仪器 超声波清洗器（上海必能信超声有限公司）；Agilent 1100高效液相色谱仪（Agilent 1100色谱泵，Agilent 1100自动进样器紫外检测器，Agilent 1100色谱工作站）；AL104/01电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 参考文献［6］：色谱柱为大连伊力特公司生产的Hypersil ODS2 C18色谱柱；流动相为水（A）-甲醇（B），梯度洗脱。

2.2 洗脱程序 见表1。流速：1m L/min；检测波长为250 nm，柱温为室温，进样体积为20μL。

表1 梯度洗脱程序

2.3 对照品溶液的制备 精密称取葛根素对照品及大豆苷元对照品适量，置于10m L量瓶中，加30%甲醇溶液适量溶解并定容至刻度，得到葛根素浓度为0.502mg/m L及大豆苷元浓度为0.328m g/m L的混合对照品溶液，备用。

2.4 供试品溶液的制备 称取葛根粉末（过三号筛）0.8 g，置于100 mL的具塞锥形瓶中，精密加入30%的乙醇50 mL，称定重量后超声提取30m in，趁热过滤，80℃水浴中蒸干，用50%甲醇将将其转溶于50m L的量瓶中，定容即得供试品溶液。

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系的考察 精密吸取混合对照品溶液0.02、0.05、0.1、0.2、0.5置于10m L的量瓶中，定容。精密吸取各对照品溶液及对照品母液20μL，测定，以浓度）与峰面积（Y）作图得标准曲线，经回归得葛根素及大豆苷元线性方程分别为：Y葛根素=1.1973X+6.3165，R2=0.9968；Y大豆苷元= 1.3625X+7.0082，R2=0.9982。结果表明，葛根素在0.020～10.1μg/μL的浓度范围内呈现良好的线性关系；大豆苷元在0.013～6.56μg/μL的浓度范围内呈现良好的线性关系。

2.5.2 精密度实验 取供试品溶液，连续进样5次，每次进样量均为20μL，测定葛根素及大豆苷元的峰面积，计算RSD值。结果显示葛根素及大豆苷元的RSD值分别为1.96%、1.28%，表明精密度良好，符合含量测定的要求。

2.5.3 稳定性实验 取供试品溶液，每隔2 h精密吸取20μL注入高效液相色谱仪，连续进样7次，按照色谱条件测定葛根素及大豆苷元的峰面积，计算RSD值。结果显示葛根素及大豆苷元的RSD值分别为1.52%、1.41%，表明供试品溶液中葛根素及大豆苷元在12 h内基本稳定。

2.5.4 重复性实验 取同一批样品，平行制备5份供试品溶液，分别精密吸取20μL注入高效液相色谱仪，按照色谱条件测定葛根素及大豆苷元的峰面积，计算含量。结果显示葛根素及大豆苷元的RSD值分别为1.78%、1.36%，表明用此方法测定葛根素及大豆苷元的含量重现性良好。

2.5.5 加样回收实验结果 见表2、表3。精密称取已知含量的同一批葛根药材粉末（过三号筛）样品6份，每份0.2 g，按比例加入葛根素及大豆苷元对照品制备溶液，分别精密吸取20μL注入高效液相色谱仪，根据色谱条件测定葛根素及大豆苷元的峰面积，计算回收率。

表2 葛根素加样回收实验结果（n=6）

表3 大豆苷元加样回收试验结果（n=6）

2.4.6 不同产地葛根样品含量测定 见表4。制备供试品溶液，根据色谱条件测定6个不同产地葛根样品中葛根素、大豆苷元的峰面积，按照线性回归方程，计算各样品中葛根素、大豆苷元的含量。

表4 不同产地葛根样品含量%

3 讨论

葛根在我国大部分地区均有分布，尤其在南方地区，如湖南、江西、广东等，因其具有解表退热、生津止渴、止泻等功效，常作为药食同源的药材。现代研究表明，葛根中含有丰富的葛根素、大豆苷元、大豆苷、香豆素、胡萝卜苷及大量的微量元素，具有非常重要的药理活性，如葛根素具有提高免疫、增强心肌收缩力、保护心肌细胞、降低血压、抗血小板聚集等药理活性，临床常用于各种类型心血管疾病的治疗；大豆苷元可扩张血管、增加冠脉流量、降低血压、减慢心律和降低心肌耗氧量及抗心律失常作用，临床常用于治疗妇女更年期综合征、前列腺癌、乳腺癌、心脏病、心血管病等。目前为控制葛根药材的质量，常将葛根素、大豆苷元等主要活性成分作为控制药材质量标准的依据［7］。

文献报道关于葛根素及大豆苷元的提取方法比较多，如考察乙醇、石油醚的提取效果，结果显示不同浓度的乙醇对葛根素及大豆苷元的提取率较高，而石油醚的提取率则几乎为零，可能与葛根素及大豆苷元分子的极性有较大的关系［8］。笔者在此基础上，分别考察了提取溶剂（水、30%乙醇、50%乙醇、75%乙醇）及提取方法（回流提取、超声提取）的提取效果，结果显示以30%乙醇为提取溶剂，超声30m in可获得较为满意的提取效果。

因葛根素、大豆苷元量极性差别比较大，同时药材提取物中还含有大量的其它成分，含量测定时对其色谱条件进行了优化。为了能够获得较好的分离效果，笔者考察了洗脱溶剂及洗脱的程序对含量测定结果的影响，结果表明，以水-甲醇为流动相，同时采用梯度洗脱方法对药材提取物进行分离，可获得较好的分离效果，且基线较为稳定、出峰时间适当，符合含量测定的基本要求［9］。

本论文建立了葛根素及大豆苷元的高效液相色谱检测方法，研究显示葛根素在0.020～10.1μg/μL的浓度范围内呈现良好的线性关系，大豆苷元在0.013～6.56μg/μL的浓度范围内呈现良好的线性关系，因此该方法可用检测葛根药材中葛根素、大豆苷元的含量测定，且具有简便、快捷、重复性好等特点。

经对不同产地葛根中所含有的葛根素及大豆苷元的含量测定，发现葛根素及大豆苷元含量的差别比较大，来自于浙江产地的葛根中葛根素和大豆苷含量高达6.84%和1.65%，其含量分别为湖南产地的葛根的8.1倍和8.7倍。不同产地葛根中葛根素和大豆苷含量差异显著的原因可能与不同产地的环境因素、田间管理、采收加工程序等因素有关。葛根为豆科植物，其生长与有效成分的积累与豆瘤菌的关系较为密切，由于不同产地的环境差异较大，会对豆瘤菌等微生物的生长繁殖等产生较大的影响。由于葛根素和大豆苷含量有可能影响临床治疗的效果，故为了能够获得质量较为稳定、药效较好的药材，应该尽量坚持药材的道地性。

［1］黄建锋，周清，戚海英，等.广东不同产地葛根中葛根素和大豆苷元的含量测定［J］.广东药学院学报，2013， 29（4）：392-395.

［2］迟霁菲，张国刚.高效液相色谱法测定不同产地葛根中葛根素的含量［J］.中南药学，2012，4（4）：307-309.

［3］蒲艳春，吴方评，杨宏健.固相萃取-高效液相色谱法测定葛根中葛根素含量［J］.中国药业，2012，21（11）：19-20.

［4］杨海丽，李志浩.高效液相色谱法测定表虚感冒颗粒中葛根素的含量［J］.云南中医学院学报，2013，36（6）：39-41.

［5］陈风春，张亦红，刘芳，等.高效液相色谱法测定葛根类保健食品中葛根素、大豆苷、大豆苷元及染料木素［J］.解放军预防医学杂志，2013，31（5）：425-427.

［6］李翔，刘皈阳，马建丽，等.高效液相色谱法测定葛根姜黄口服液中葛根素的含量［J］.解放军医药杂志，2014，26（6）：97-99.

［7］裴明日，王苗苗，姜丽.高效液相色谱法测定红宝散中葛根素含量［J］.中国药业，2014，23（10）：41-42.

［8］高俊，王彩琴.反相高效液相色谱法测定甘肃栽培葛根中葛根素的含量［J］.甘肃中医学院学报，2012，29（4）：64-66.

［9］任晓明，赵辉，夏洪颖.HPLC法测定降压平片中葛根素的含量［J］.中国药师，2012，15（10）：1510-1511.

（责任编辑：骆欢欢）

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0256-7415（2015）02-0215-03

10.13457/j.cnki.jncm.2015.02.101

2014-09-25

倪从蓉（1974-），女，主管中药师，研究方向：中药调剂。