CyclinD1和CDC25A 在胆囊癌中的表达及意义

张桂东

·基础研究·

CyclinD1和CDC25A 在胆囊癌中的表达及意义

张桂东

目的 通过检测CyclinD1和CDC25A在胆囊癌中的表达，探讨其在胆囊癌发生发展中的作用及其机制，为胆囊癌诊断和治疗寻找新的靶点。方法 采用流式细胞术检测44例胆囊癌和35例慢性胆囊炎黏膜组织的CyclinD1、CDC25A蛋白的表达，其中蛋白的表达量用平均荧光强度（均道值）表示。结果 胆囊癌组织、慢性胆囊炎黏膜组织中CyclinD1蛋白表达分别为（531.153±28.823）、（496.462±37.191），胆囊癌组织的CyclinD1蛋白表达高于正常组织；胆囊癌组织、慢性胆囊炎黏膜组织中CDC25A蛋白表达分别为（535.029±35.647）、（496.267±41.345），胆囊癌组织的CDC25A蛋白表达高于慢性炎症组织。结论 CyclinD1和CDC25A蛋白在胆囊癌组织中均高表达。这两种基因和蛋白表达的改变可能是引起胆囊癌发生发展的分子机制之一。

胆囊癌 CyclinD1 CDC25A 流式细胞分析术

原发性胆囊癌是胆系肿瘤中恶性程度最高的一种，手术及放化疗的治疗效果较差。近年来胆囊癌发病的分子学机制成为研究热点。作者通过检测CyclinD1和CDC25A在胆囊癌中的表达，探讨其在胆囊癌发生发展中的作用及其机制。报道如下。

1　临床资料

1.1一般资料 原发性胆囊癌44例及慢性胆囊炎35例黏膜组织均来自本院2005年12月至2013年1月手术切除标本。胆囊癌患者44例中男17例，女27例；年龄40～76岁，中位年龄60岁。中、高分化胆囊癌21例、低分化胆囊癌23例，其中淋巴转移和（或）肝脏转移35例。

1.2主要试剂与设备 鼠抗人CyclinD1单克隆抗体（北京中杉公司）；鼠抗人CDC25A单克隆抗体（美国Santa Cruz公司）。采用美国Beckman Coulter公司生产的Epics-XLⅡ型流式细胞仪进行检测。应用Expo 32 ADC进行免疫荧光数据分析。

1.3检测方法 严格按照试剂要求及流式细胞仪的步骤进行检测。并以实验样品蛋白表达的平均荧光强度（均道值）表示各蛋白的含量。

1.4统计学方法 应用SPSS13.0软件。计量资料以（x±s）表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1胆囊癌组织、慢性胆囊炎黏膜组织中CyclinD1蛋白表达（见图1）结果分别为：（531.153±28.823）、（496.462±37.191），经统计学分析，F=11.89， P=0.0005，差异有统计学意义。见表1。

图1　A CyclinD1 蛋白在慢性胆囊炎黏膜组织中的表达（FCM均道值）479.86

图 1B CyclinD1 蛋白在胆囊癌组织中的表达（FCM均道值）546.65

表1　CyclinD1 蛋白在慢性胆囊炎黏膜组织及胆囊癌组织中的表达（FCM）

2.2胆囊癌组织的CyclinD1蛋白表达明显高于慢性炎症组织；胆囊癌组织中CyclinD1蛋白的表达与年龄、性别、肿瘤所处位置，组织学分化及其淋巴转移的比较 见表2 。

表2　CyclinD1蛋白在胆囊癌组织中的表达与临床参数的关系（FCM）

2.3胆囊癌组织、慢性胆囊炎黏膜组织中CDC25A蛋白表达（见图2），结果分别为：（535.029±35.647）、（496.267±41.345），胆囊癌组织的CDC25A蛋白表达高于慢性炎症组织。经统计学分析，F=12.01，P=0.0013，差异有统计学意义，见表3。

图2　A CDC25A蛋白在慢性胆囊炎黏膜组织中的表达（FCM均道值）500.52

图2　B CDC25A 蛋白在胆囊癌组织中的表达（FCM均道值）556.65

表3　CDC25A 蛋白在慢性胆囊炎黏膜组织及胆囊癌组织中的表达（FCM）

2.4胆囊癌组织中CDC25A蛋白的表达与年龄、性别、肿瘤所处位置，组织学分化及其淋巴转移的比较 见表4。

表4　CDC25A蛋白在胆囊癌组织中的表达与临床参数的关系（FCM）

3　讨论

在细胞周期调控中，联络信号转导与细胞周期机制有两条途径，一是通过CyclinD-Cdk4/6，二是通过CyclinE-Cdk2。而CyclinD分为三型：D1、D2、D3，其中CyclinD1基因定位于染色体11q13，长度约120kb，编码295个氨基酸构成的蛋白质，分子量约34KD。在细胞周期进程中CyclinD1的含量受到生长因子等因素的调控，当生长因子刺激时，通过“瀑布”式的信号转导，激活相应的转录因子，可在几分钟内启动早期应答基因的转录，且蛋白质合成的抑制剂不能阻断早期应答基因的转录，从而在肿瘤发生中起促进作用。臧盛兵等［1］研究表明ATF3可能通过调控CyclinD1表达而促进结直肠癌的发生发展及侵袭转移。孙桂彬等［2］研究CyclinD在胃癌及其癌前病变中的表达结果显示CyclinD在肿瘤细胞中表达升高，可能是胃癌早期分子事件。李永昊等［3］研究结果显示CyclinD蛋白及其mRNA的高表达在骨肉瘤中不同程度异常表达与肿瘤的临床分期、病理分级和浸润转移有一定关系。本资料结果显示，CyclinD1在不同胆囊病变中的表达具有一致性，即在胆囊癌中的表达明显高于慢性胆囊炎黏膜组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。进一步研究表明，CyclinD1的表达随着胆囊癌分化程度的降低而升高，表明CyclinD1是一个有潜在价值的肿瘤标志物。

CDC25家族是双重特异性磷酸酶，是国外学者于1986年在裂殖酵母中分离而得，具有双重特异活性，是细胞周期的正向调解因子，包括CDC25A、CDC25B、CDC25C三个成员，其中CDC25A对G1/ S转换和进入S期是必需的。国内外研究［4］认为，CDC25A亦参与G2 /M期转换，是最为重要的细胞周期调控因素之一。CDC25A是肿瘤发生的早期事件，参与了多种肿瘤的发生发展。杨春悦等［5］研究CDC25A高表达可导致下咽癌的发生、发展，且与肿瘤的分化程度呈明显相关性。李金梅等［6］研究认为CDC25A在食管癌中的表达明显高于炎性对照组织，表明在食管癌的发生、发展中起重要作用。袁锐等［7］报道CDC25A在结直肠癌及腺瘤中表达均高于正常结直肠黏膜组织，且腺癌组亦明显高于腺瘤组。本资料结果显示，CDC25A在不同胆囊病变中的表达具有一致性，即在胆囊癌中的表达明显高于慢性胆囊炎黏膜组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。进一步研究，CDC25A的表达随着肿瘤的分化程度的降低而升高，表明CDC25A亦是一个有潜在价值的胆囊癌的肿瘤标志物。

肿瘤的分子生物学研究日益受到学者们的重视，胆囊癌的研究也不例外，众多的医学科技工作者希望能够从基因水平上阐明胆囊癌的发生、发展、转移和转归，从而力求提高胆囊癌的早期诊治水平。本资料结果显示在胆囊癌组织中与细胞周期调控相关的CyclinD1和CDC25A均明显升高，因此CyclinD1和CDC25A为胆囊癌的综合诊断和治疗可能提供了新的靶点。

1 臧盛兵，郁万媛，陈虹，等.结直肠癌组织ATF3及其靶基因CyclinD1与Maspin表达的临床意义分析.中华肿瘤防治杂志，2012，19（24）：1870～1874.

2 孙桂彬，杨景国，李永华，等. PTEN、p16和CyclinD1在胃癌及癌前病变中表达的研究 .现代中西医结合杂志，2012，21（15）：1614～1616.

3 李永昊，肖玉周，汪万英. CyclinD1、CDK4、P16在骨肉瘤中的表达和临床意义. 中华全科医学，2012，10（2）：191～207.

4 Zaffaroni N， Pennati M， Colella G， et al Expression of the antiapoptotic gene survivin correlates with taxol resistance in human ovarian cancer . Cell Mol Life Sci， 2002， 59（8）：1406～1412.

5 杨春悦，马桂琴，李连贺，等.咽癌中CDC25A的表达及临床意义. 临床和实验医学杂志，2012，11（9）： 649～650.

6 李金梅，王静，刘江惠，等.下CDC25A、Smad3在食管鳞癌的表达及相互关系. 第三军医大学学报，2008，30（3）： 233～236.

7 袁锐，刘晓群，朱培谦，等.CDC25A在结直肠癌中表达. 南昌大学学报（医学版），2012，52（9）： 64～66.

Objective To detect the expression of cyclinD1 and CDC25A in carcinoma of gallbladder tissue，to explore their mechanism，and to search for new therapy of carcinoma of gallbladder. Methods The expression degrees of cyclinD1 and CDC25A were examine in 44 cases of example carcinoma of gallbladder tissue and 35 cases of mucosa of chronic cholecystitis by FCM， the expression degrees of the protein were studied. Results The protein expression of in cyclinD1 carcinoma of gallbladder tissue and mucosa of chronic cholecystitis was 531.153±28.823 and 496.462±37.191 repectively，the protein expression of cyclinD1 was higher in carcinoma of gallbladder tissue than mucosa of chronic cholecystitis（P＜0.05）； The protein expression of CDC25A in carcinoma of gallbladder tissue and mucosa of chronic cholecystitis was 535.029±35.647 and 496.267±41.345 repectively，the protein expression of CDC25A was also higher in carcinoma of gallbladder tissue than mucosa of chronic cholecystitis（P＜0.05）. Conclusion The expression degree of protern was accordant with that of protein on CyclinD1 and CDC25A. It was higher in carcinoma of gallbladder tissue than in mucosa of chronic cholecystitis.Through the changes of cyclinD1 and CDC25A protein expression，it is possible to elucidate the carcinogenesis of cholangioncarcinoma.

CyclinD1 CDC25A carcinoma of gallbladder FCM

河北省邯郸市科学技术研究与发展计划项目（1223108085-4）

056000河北省邯郸市中心医院普外科