类风湿性关节炎Th2细胞过度激活的影响因素

丁伯泉　王再平　李大森★　古　俊

类风湿性关节炎Th2细胞过度激活的影响因素

丁伯泉王再平李大森★古俊

目的 探讨类风湿性关节炎（RA）患者Th2细胞过度激活的产生原因。方法 采用流式细胞术分析RA患者外周血淋巴细胞表面分化抗原（CD），同时用酶免疫法检测血浆白细胞介素（IL-4和IL-6）的变化。结果 与对照组比较，RA患者CD25+和CD19+细胞水平升高，其差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；CD8+/CD28-细胞水平减少，差异有显著性（P＜0.01）；CD3+和CD4+差异无统计学意义（P＞0.05）；IL-4和IL-6细胞水平升高，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。结论 类风湿性关节炎患者因其细胞免疫调节紊乱而导致体内Th2细胞过度激活。

类风湿性关节炎 T淋巴细胞 免疫调节

类风湿性关节炎（RA）的发病与细胞免疫调节密切相关，是以慢性多发性关节炎为主要临床表现的全身免疫性疾病。研究表明RA与机体免疫功能紊乱密切相关［1］，表现为关节滑膜组织慢性炎症，导致滑膜组织内纤维母样细胞增生，有大量激活的T细胞、B细胞、 巨噬细胞及树突状细胞浸润，并分泌大量的促炎症介质［2，3］。为了探讨辅助性T细胞（Th）2在RA发病中的作用，作者采用流式细胞术和酶免疫检测技术，对RA患者的外周血淋巴细胞表面抗原分化（CD）和血浆白细胞介素（IL-4和IL-6）水平进行检测和分析。本文分析RA患者外周血CD3+、CD4+、CD8+/ CD28-、CD25+和CD19+细胞CD的表达，旨在探讨其在RA发病过程中的免疫病理作用。

1　临床资料

1.1一般资料 本院自2011年2月至2013年3月确诊的32例RA患者为观察组，其中男10例，女22例；年龄22～68岁。抽取其未经治疗前的静脉血5ml，加肝素抗凝。再从本院健康体检人员中随机选取32例无RA病史的健康者作为对照组，同时进行检测。本项目得到医院科研部门的批准，并征得所有患者的同意。

1.2试剂与仪器 异硫氰酸荧光素（FTTC）标记的抗CD3、CD4、CD8、CD28、CD25和CD19单克隆抗体（单抗）。IL-4和IL-6检测试剂盒（美国Genzyme公司）。EPICS型流式细胞仪。

1.3IL-4和IL-6水平测定 采用双抗体夹心 ELISA方法，操作方法见参考文献［4］及试剂盒说明。

1.4细胞表面分化抗原（CD）测定 在反应管中加入相应抗体，再加入肝素抗凝全血100μl，旋涡震荡器混匀，室温孵育20min，经immune-proper仪处理红细胞后，采用流式细胞仪进行检测［5］。

1.5统计学分析 采用SPSS18.0统计软件。计量资料以（x±s） 表示，组间比较采用t检验，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组IL-4和IL-6因子水平测定结果 见表1。

表1　两组IL-4和IL-6因子水平测定结果（x±s）

2.2两组外周血淋巴细胞CD抗原测定结果 见表2。

表2　两组外周血淋巴细胞CD抗原测定结果（x±s）

3　讨论

鉴于近年对RA发病机理的研究发现，类风湿因子（RF）的产生与细胞免疫调节紧密相关，从而对通常所认为的RA多发性关节炎是由RF引起的观点值得进一步探讨，因而更能说明研究RA细胞免疫状况对理解其发病机制有着重要意义。研究表明，体内自身反应性T细胞直接与疾病发生和发展密切相关，CD8+/ CD28-T细胞、CD4+、CD25+T细胞在控制自身免疫反应及维持免疫耐受方面起着关键作用。CD4+、CD25+T细胞可以控制机体损伤后的免疫反应，如果机体内CD4+、CD25+T细胞缺失将导致自身免疫性疾病的发生［6，7］。CD8+/CD28-细胞水平明显低于对照组，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；CD25+和CD19+细胞水平高于对照组，两组比较差异有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05）。观察组CD8+/CD28-水平显著低于对照组（P＜0.01）。CD3是成熟T细胞的标志，CD3+细胞水平反映了总T淋巴细胞的水平；CD4是T辅助-诱导细胞（Th-Ti）的标志，其具有辅助T细胞转变为效应T细胞、B细胞生成抗体及巨噬细胞活化等作用。CD25为IL-2受体，是活化T细胞的标志。CD19是B细胞的标志，CD19+细胞水平反映总B细胞的水平。之所以会产生具有病理损伤作用的RF，是由于Ts数量明显减少，从而导致Th细胞功能的相对亢进和活化T细胞的增加，使T细胞对B细胞的调节失控，B细胞的分化和增殖活跃的结果。有研究表明［8］，Th细胞按产生细胞因子的不同而分为Th1和Th2，Th1细胞以表达IL-2和干扰素（IFN）r为主，介导细胞免疫应答；Th2细胞主要表达IL-4、IL-6和IL-10，介导体液免疫应答。由此可以证明，造成产生RF B细胞增殖的原因是由于RA患者外周血Th2细胞的激活。另外，由于IL-4和IL-6有多种细胞来源，因此，对于是否由于RA患者巨噬细胞的激活产生IL-4和IL-6，使其血浆水平增高的可能，还有待进一步研究。

RA是一种常见、高发病率的疾病，其在短期内对生命虽无较大威胁，但给人们的生活和工作带来损害，RA为体液免疫和细胞免疫同时紊乱的自身免疫性疾病，这不仅有助于阐明自身免疫病的发病机制，而且有可能为治疗自身免疫病提供新方法，通过调节过强的细胞免疫或体液免疫，达到治疗自身免疫病的目的。综上所述，鉴于体内辅助性T细胞亚群Th1和Th2的平衡状态直接影响着肿瘤和自身免疫性疾病的发生、发展，可以通过阻断Th2细胞的过度激活，继而改变机体Th1和Th2的平衡状态，以达到治疗RA患者的目的。

1 Ziff M.Rheumatoid arthritis-its present and future . J Rheumatol，1990，17（2）：127～133.

2 毋小玉，刘占举，董中升.类风湿性关节炎患儿关节滑液和外周血上皮嗜中性粒细胞激活肽水平变化.实用儿科临床杂志，2006，21（21）：1478～1479.

3 Muller-Ladner U，Pap T，Gay RE，et al.Mechanisms of disease： the molecular and cellular basis of joint destruction in rheumatoid arthritis. Nat Clin Pract Rhuematol，2005，1（2）：102～110.

4 魏海明，刘杰，田志刚.检测Th1/Th2亚群的临床意义.中华医学检验杂志，1998，21（1）：56～59.

5 黄健，沈永声，王秀英.流式细胞仪测定人外周血淋巴细胞亚型.中华医学检验杂志，1998，21（2）：98.

6 Rizzello V， Liuzzo G， Brugaletta S，et al. Modulation of CD4+CD28null T lymphocytes by tumor necrosis factor-alpha blockade in patients with unstable angina. Circulation，2006，113（19） ： 22～27.

7 Murphy TJ，Choileain NN，ZangY，et al.CD4+CD25+regulatory T cells control innate immune reactivity after injury.J Immunol，2005，174（5）：2957～2963.

8 赵武述.辅助性T细胞亚群的研究及其临床意义.中华医学检验志，1998，21（1）：7～9.

525200 广东省茂名农垦医院检验科