应用QIAamp DNA Investgator Kit试剂盒提取牙齿DNA

泉州市公安局刑侦支队 程 冲 杨颖峰 孙琳琳

牙齿 DNA含量较骨骼少，但是牙齿外层由牙釉质和牙本质包裹，能够抵抗外界环境的影响，使得 DNA不易被降解，而且牙齿易于提取、包装。因此，在一些白骨化案件中，牙齿的 DNA检验经常用于尸源认定。近日，本文作者采用了QIAamp DNA Investgator Kit试剂盒提取牙齿DNA，获得了较好的结果。

1 材料与方法

1.1 样本

本实验室日常受理的牙齿12份。

1.2 仪器和试剂

9700 型扩增仪（AB公司）；3130XL型测序仪（AB公司）；QIAamp DNA Investgator Kit（Qiagen公司）；Identifiler Plus试剂盒（AB公司）。

1.3 方法

1.3.1 牙齿DNA的提取

（1）取牙齿1颗，用清水洗净表面，用手术刀片刮去牙齿表层及污垢物，再用无水乙醇泡洗1次去除残余的水分，用滤纸拭干。将牙齿放入砸牙器中用锤子砸成粉末，取100mg左右牙粉置于1.5mL离心管中。（2）加入360μl Buffer ATL和 20μl 20mg/mL PK，20μL 1mol／L DTT，56℃孵育过夜。（3）离心管快速离心后，加入300μl Buffer AL，混匀后，70℃孵育10分钟。（4）13000rpm离心1分钟，取上清液600μL转移至新的1.5mL离心管中，加入150μL无水乙醇，混匀后快速离心 10秒。（5）吸取上清液 750μL转移至 QIAamp MinElute柱中，8000rpm离心1分钟，再分别用700μL Buffer AW1、Buffer AW2、无水乙醇 8000rpm 离心 1分钟洗涤QIAamp MinElute柱膜。（6）无水乙醇洗涤后，13000rpm离心3分钟，取出QIAamp MinElute柱置于新的1.5mL离心管中，打开盖子，室温干燥10分钟。（7）将30μL Buffer ATE加到柱膜的中央，盖上盖子，室温孵育5分钟，13000rpm离心1分钟，收集流出液4℃保存备用。

另取牙粉100mg按照参考文献[1]中方法提取牙齿DNA，4℃保存备用。

1.3.2 DNA扩增及产物检测

采用Identifiler Plus试剂盒在9700型扩增仪进行PCR扩增，扩增体系为 10μL，DNA 模板为 1μL，扩增参数参照Identifiler Plus试剂盒操作手册。取上述 PCR扩增产物经3130XL型测序仪电泳，结果用GeneMapper ID v3.2软件进行分析，获得等位基因分型图谱。

2 结果

2.1 QIAamp DNA Investgator Kit试剂盒法与参考文献[1]中方法结果比较

本文中，12例牙齿经不同提取方法检验均全部得出了一致的检验结果。两种方法均采用Qiagen公司生产的硅膜法提取纯化DNA，比较不同提取方法的检验结果，QIAamp DNA Investgator Kit试剂盒提取牙齿DNA操作简单快捷，较常规的牙齿提取法节省时间，无需脱钙，且文献[1]中牙齿提取方法由于牙齿消化后需要纯化的体系较大，文献[1]中牙齿消化液与PBI溶液要按体积比1:5混匀，一般混合液能达到3mL左右，需多次离心才能过滤完全部混合液，而QIAamp DNA Investgator Kit方法只需 1次离心就能全部过柱完牙齿消化液。由于过柱次数少，在理论上减少了交叉污染的可能。同时，经检验结果对比发现，两种方法提取牙齿DNA在峰高、平衡性方面无显著差异。

2.2 案例检验应用

2015年×月×日，我市某地发现一具经过高压锅蒸煮的头骨，送检头骨上牙齿2颗。牙齿采用本文方法提取DNA，并进行STR分型检验，结果成功获得STR分型（图1），为本案尸源认定提供了重要依据。

图1 经过高压蒸煮的牙齿STR分型

3 讨论

QIAamp DNA Investgator Kit试剂盒法提取牙齿DNA的优势：（1）检材需求量少，仅需100mg牙粉即可满足检验需求。（2）牙粉无需脱钙处理。（3）牙粉消化液体积小，仅需1次离心即可全部过柱完。（4）离心次数少，不存在重复利用离心管，减少交叉污染。实验结果显示，两种方法检出率一致，但QIAamp DNA Investgator Kit试剂盒法在操作过程更具有优势。

综上所述，QIAamp DNA Investgator Kit试剂盒提取牙齿DNA操作简单，无需特殊仪器，成功率高且提取成本低廉，能满足实际检案的需求。

[1] 凃政,刘志芳,陈松,等.牙齿的 DNA 提取及 STR 分型研究[J].刑事技术,2007,196 (5): 9-11.