对叶百部中非生物碱化学成分的研究

张丽勤

[摘要] 目的 研究对叶百部中非生物碱的化学成分，并明确其结构。 方法 采用渗漉、提取等操作，提取对叶百部中的非生物碱，经核磁和薄层色谱对其结构进行确证。 结果 从对叶百部中提取出3个化合物，结构确证为β-谷甾醇棕榈酸酯、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸、β-谷甾醇。 结论 对叶百部中非生物碱的化学成分主要为β-谷甾醇棕榈酸酯、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸、β-谷甾醇。

[关键词] 对叶百部；非生物碱；化学成分

[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）08（c）-0091-04

[Abstract] Objective To study the chemical components of non-alkaloids in Stemonaceae Stemona tuberosa and clarify their structures. Methods By operations of percolation and extraction，non-alkaloids from Stemonaceae Stemona tuberosa were extracted and their structures were confirmed by nuclear magnetism and thin-layer chromatography. Results There were 3 chemical compounds extracted from Stemonaceae Stemona tuberosa and their structures were confirmed as β-sitosterol palmitate，3-hydroxyl-4-methoxybenzoic acid and β-sitosterol. Conclusion The chemical components of non-alkaloids from Stemonaceae Stemona tuberosa mainly include β-sitosterol palmitate，3-hydroxyl-4-methoxybenzoic acid and β-sitosterol.

[Key words] Stemonaceae Stemona tuberosa；Non-alkaloid；Chemical component

百部为常用中药，又名百部货、婆妇草、百条根、百部草、闹虱药等，性味甘、苦，微温，归肺经，具有润肺止咳、杀虫灭虱的功效[1]，临床应用比较广泛，具有广阔的市场应用前景。百部的主要化学成分和主要活性成分是生物碱，其杀虫和止咳效果也是生物碱药理活性的集中体现[2]。国内外对于百部类生物碱的化学成分研究较多，但是对非生物碱类成分尚无系统的研究[3-4]。百部的药理作用研究也较多，但大都限于百部不同浓度水提物和醇提物制剂[5]。化学成分的系统研究对于百部药理作用机制的阐明是必需的，同时也是发现有生物活性的新化合物的基础和前提。本研究中就对叶百部中非生化碱的化学成分进行研究。

1材料与方法

1.1 材料

核磁共振光谱仪为Bruker DRX-300/600型核磁共振仪测定型（TMS为内标）；恒温水浴锅为国华电器有限公司生产。

薄层硅胶GF254、薄层硅胶H、100～200目及200～300目柱硅胶均购自青岛海洋化工厂；常规用试剂均为AR级，水为重蒸水；10%硫酸乙醇溶液、溴甲酚绿乙醇溶液等显色剂均按《中草药有效成分提取分离》参考书中方法配制[6]。

百部药材购自河北安国（大百部）Stemona Tuberosa Lour.。

1.2 方法

1.2.1 药材的提取与分离 对叶百部药材52 kg经95%乙醇渗漉提取，渗漉液经浓缩后，加入5%稀盐酸，将pH调解至1～2，过滤，滤液用浓氨水碱化至pH=10，用氯仿萃取至滤液无碘化铋钾反应，回收氯仿，得总生物碱部分。将氯仿萃取后碱液（约50 L）用旋转蒸发器旋干，用pH试纸检测，基本为中性。稠膏用水稀释后，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，得乙酸乙酯萃取物420 g，正丁醇萃取物600 g。将乙酸乙酯萃取物420 g进行硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇溶剂系统进行梯度洗脱。薄层色谱检测，合并相同流分，共分成11组分（Ⅰ～Ⅺ）。组分Ⅰ经硅胶柱色谱，石油醚-醋酸乙酯（100∶1）梯度洗脱，其中从石油醚-醋酸乙酯流份中得到化合物1。组分Ⅲ经硅胶柱色谱，二氯甲烷-乙酸乙酯（100∶1）梯度洗脱，其中从二氯甲烷-乙酸乙酯流份中得到化合物3。另外组分Ⅲ的二氯甲烷-乙酸乙酯（50∶1和25∶1）流份合并后再经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（50∶1）梯度洗脱，从二氯甲烷-甲醇流份中得到化合物2。提取分离流程见图1。

1.2.2 成分的提取 为进一步明确对叶百部的化学成分和今后探讨对叶百部治疗疾病的药效物质基础以及更好地控制该药的质量，本研究开展对叶百部的生物碱化学成分研究的同时开展了非生物碱部分的化学成分研究。通过硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和重结晶等方法从中分离。

2 结果

2.1 成分提取的结果

通过硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和重结晶等方法从中分离得到了3个化合物，根据其波谱数据并结合文献，确定这3个化合物的结构分别鉴定为β-谷甾醇棕榈酸酯、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸、β-谷甾醇（表1）。

2.2 化合物的结构鉴定

2.2.1 化合物1 白色粉末，易溶于二氯甲烷、氯仿，10%H2SO4显紫色，初步推测该化合物为甾醇或三萜类成分。1H-NMR（300 MHz，CDCl3）谱显示δH5.3（1H，d，J=4.4 Hz）为典型的烯氢信号，δH 4.61（1H，m）为连氧次甲基质子信号，δH1.25[brs，（CH2）n]为一组长链脂肪烃的强强偶合峰，δH1.02（3H，s）、δH 0.78～0.94（m，5×CH3）和δH0.68（3H，s）显示有7个甲基氢信号，这些信号进一步证明了该化合物为一甾醇类成分。将该化合物的谱学数据与文献β-谷甾醇棕榈酸酯数据[7]对照一致，故鉴定该化合物为β-谷甾醇棕榈酸酯（图2）。

2.2.2 化合物2 白色针晶，易溶于乙酸乙酯、丙酮、甲醇，溴甲酚绿反应和三氯化铁-铁氰化钾反应均为阳性，表示结构中含有羧基和酚羟基。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）谱显示芳香区存在两组氢信号δH6.83（1H，d，J=9.0Hz），δH7.43～7.45（2H，m），说明该化合物可能存在三取代苯环，且存在邻位取代氢；δH12.43（1H，s）为羧基质子信号，δH9.78（1H，s）为酚羟基质子信号，δH3.80（3H，s）为甲氧基上的氢信号。经与文献[8]3-羟基-4-甲氧基苯甲酸数据对照一致，故鉴定该化合物为3-羟基-4-甲氧基苯甲酸（图3）。

2.2.3 化合物3 无色针晶，10%硫酸乙醇显紫红色，与对照品β-谷甾醇共薄层，经3种不同的溶剂系统展开，Rf值均一致，故鉴定化合物3为β-谷甾醇（β-sitosterol）。

3 讨论

百部作为我国的传统中药，具有很好的止咳、杀虫效果，在临床上一直有着广泛的应用。在对叶百部的有效成分中，对叶百部中的生物碱是发挥杀虫和止咳效果的核心成分，也是既往研究的重点[9]。目前国内已有大量文献报道，对叶百部中生物碱的杀虫效果是市面上最强效杀虫剂的10倍左右，其止咳效果也远远优于常规药物[10-11]。鉴于对叶百部的药用价值，近年来关于其化学成分的研究不断增多，其药理作用也从传统的止咳、杀虫逐渐扩展至抗菌、镇痛、止咳、杀虫等诸多方面，针对对叶百部药理活性成分的研究也不断丰富。目前学者对百部化学成分的研究报道主要集中在生物碱类和二苯乙烯类成分，而其他成分较少报道[12-13]。随着百部药理作用、临床应用研究的不断深入，人们发现百部除具有杀虫、镇咳祛痰作用外，尚具有抗菌和抗病毒、松弛支气管平滑肌、中枢镇静、镇痛等多方面的作用，这是生物碱类成分远不能包罗的[14]。根据中药整体作用的特点，百部这些功效可能是其在生物体内通过多种类型的化学成分发挥协同作用而表现出的综合效应[10]。鉴于此，有必要对百部的非生物碱类化学成分也进行深入研究，为百部进一步研究、开发提供科学依据。在本次研究中，笔者通过反复硅胶柱色谱，从对叶百部的85%乙醇提取物中共分离得到3个化合物。通过光谱数据分析等手段，鉴定其结构分别为：β-谷甾醇棕榈酸酯（化合物1）、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸（化合物2）、β-谷甾醇（化合物3）。在既往的临床研究中，对叶百部的生物碱成分一直被认为是该中药材活性成分研究的重点，截至到目前，约有11个药理活性较好生物碱完成了结构确证和药理活性评价[15]。但是关于对叶百部中非生物碱的研究，仅在近几年内才逐渐得到重视，越来越多的非生物碱化合物被发现。王珺等[16]对对叶百部中的非生物碱进行了研究，提取出的11个化合物中9个为新型化合物，大大丰富了对叶百部非生物碱成分研究的内容。在本次研究中发现的3个化合物，均为对叶百部中含量较高的非生物碱，与既往的相关研究有着诸多相互佐证之处，提取和结构确证手段也较为可靠。通过本次的研究，使我们对对叶百部的非生物碱成分有了更为清晰的认识，为将来实现这些化合物的合成和分子水平的结构研究提供了坚实的基础。

[参考文献]

[1] 吕丽华，叶文才，赵守训，等.直立百部的化学成分[J].中国药科大学学报，2005，36（5）：408-410.

[2] 袁建龙，浦益琼，张彤，等.百部总生物碱提取纯化工艺研究[J].中药材，2011，34（1）：126-129.

[3] 吕丽华，叶文才.直立百部的化学成分[J].中国药科大学学报，2005，36（5）：408-410.

[4] 王昶，陈丽艳，张树明，等.对叶百部化学成分液相行为研究[J].天然产物研究与开发，2014，26（8）：1240-1243.

[3] Lin LG.Antibacterial stilbenoids from the roots of Stemona tuberose[J].Phytochemistry，2007，10（7）：1016-1018.

[4] 王孝勋，郭振旺，李耀华，等.对叶百部中氧化对叶百部碱的分离鉴定及测定[J].中成药，2014，36（7）：103-105.

[5] 吴博，马跃平，袁久志，等.土茯苓化学成分的分离与鉴定[J].沈阳药科大学学报，2010，27（2）：117.

[6] 尚小雅，李帅，王映红，等.红绒羊毛蹄甲的化学成分研究[J].中国中药杂志，2006，31（23）：1953.

[7] 曾富佳，刘文炜，高玉琼，等.对叶百部挥发性成分GC-MS分析[J].中成药杂志，2011，33（3）：538-540.

[8] 胡君萍，张囡，毛一卿，等.《中国药典》3种百部的止咳作用比较[J].中国中药杂志，2009，34（23）：413-415.

[9] 张玄薇，王孝勋，梁臣艳，等.对叶百部化学成分及药理作用研究进展[J].亚太传统医药，2015，11（3）：32-33.

[10] 张珏，曾富佳.对叶百部不同提取方法挥发性成分研究[J].中国民族民间医药，2013，22（15）：31-33.

[11] 姜登钊，吴家忠，李辉敏.对叶百部多糖的提取及其抗氧化活性研究[J].时珍国医国药，2012，23（6）：1467-1469.

[12] 帅真，李卫民，高英.直立百部药材中2种生物碱的含量测定[J].广东药学院学报，2012，28（2）：168-171.

[13] 王孝勋，李丹丹，姚德惠，等.广西不同产地对叶百部红外光谱学研究[J].时珍国医国药，2013，24（2）：204-207.

[14] 朱华，王孝勋，赵旭梁，等.对叶百部茎叶的生药鉴定[J].时珍国医国药，2011，22（7）：199-202.

[15] 姜登钊，吴家忠，刘红兵，等.百部药材的生物碱类成分及生物活性研究进展[J].安徽农业科学，2011，39（31）：19097-19099，19102.

[16] 王珺，高羽，张朝凤，等.对叶百部中的非生物碱类成分[J].药学与临床研究，2012，20（3）：76-78.

（收稿日期：2015-02-02 本文编辑：卫 轲）