HPLC法测定三层共挤输液用袋中抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076含量

吴 漪 曲亚南

（广东省医疗器械质量监督检验所包装材料容器检验中心）

技术发展方向—检测技术

HPLC法测定三层共挤输液用袋中抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076含量

吴 漪 曲亚南

（广东省医疗器械质量监督检验所包装材料容器检验中心）

目的：建立测定三层共挤输液用袋中抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076的HPLC方法。方法：采用Inertsil ODS-SP色谱柱（4．6 mm×150 mm，5μm），以乙腈、四氢呋喃、水（60：30：10）为流动相，检测波长280 nm，流速1．5m l／min，柱温40℃。结果：抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076分别在1．0166～50．83 mg／L、2．0434～102．17 mg／L和1．02～40．8 mg／L范围内线性关系良好，相关系数均为大于0．999。三层共挤输液用袋提取方法中的抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076的平均回收率（n＝9）分别为103．81%（RSD＝7．75%），90．79%（RSD＝3．99%）、92．55%（RSD＝4．21%）。结论本法简便、快速、专属、灵敏度高，可用于三层共挤输液用袋的产品质量控制。

抗氧剂高效液相色谱三层共挤膜输液袋

上世纪60年代之前中国大输液包装容器几乎都是玻璃瓶，但是随着包装技术的发展，新型的包装材料层出不穷，上世纪70年代就出现了聚氯乙烯（PVC）软袋，80年代就引入了硬塑料瓶的生产，而到了90年代，三层共挤膜的输液袋在我国生产。如今，三层共挤膜输液袋因为其弹性好、耐高温、透光性好、阻隔性能好、无毒性、吸附性小等优点，已成了输液包装材料未来发展的方向之一，越来越多地应用于临床［1］。

其中三层共挤膜的主要材质有聚酯（PET）、聚乙烯（PE）、聚丙烯（PP）、苯乙烯-乙烯-丁烯共聚物（SEB聚合物）等，由于这些材料在成型、储存和使用的过程中会因受到热、光、电场、射线、金属离子或化学介质等作用而老化［2］，从而导致抗冲击强度、抗张强度、伸长率等物理性能的大幅下降，因此在生产过程中通常会加入抗氧剂予以改善，抑制或延缓其老化降解过程［3］。国内外对塑料制品中添加的化学助剂的检测，多采用红外光谱法定性定量分析抗氧剂［4，5］，而 HPLC法较少［6，7］。欧洲药典中对于注射制剂包装用聚丙烯中抗氧剂采用了HPLC方法进行检测，并对含量进行了严格限定［8］。本文借鉴欧洲药典的方法，建立一种测定三层共挤输液用袋中抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076含量的HPLC方法，为进一步研究材料与药物的相容性奠定了基础。

1 ．实验部分

1．1 仪器与试剂

岛津LC-20A液相色谱仪，包括低压梯度洗脱泵、在线脱气机、自动进样系统、柱温箱、二极管阵列检测器、LC-solution工作站。

抗氧剂1010：四-［β-（3，5-二叔丁基-4 -羟基苯基）丙酸］季戊四醇酯，C73H108O12，CAS：6683-19-8，SIGMA-ALDRICH，批号：MKBF3728V，98%

抗氧剂330：，3，5-三甲基2，4，6-三（3，5-二叔丁基-4-羟基苄基）苯，C54H78O3，CAS： 1709-70-2，SIGMA-ALDRICH，批号：MKBF6188V，99%

抗氧剂1076：β-（3，5-二叔丁基-4-羟基苯基）丙酸正十八碳醇酯，C35H62O3，CAS：2082-79-3，SIGMA-ALDRICH，批号：MKBB8963V，99%

乙腈、四氢呋喃均为HPLC级，甲苯和甲醇均为分析纯。

三层共挤输液用袋：三层共挤输液用袋由企业A、B、C、D提供。

1．2 样品制备

1．2 ．1 标准品溶液制备：称取抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076各60 mg，置于10 ml容量瓶中，用混合液（乙腈：四氢呋喃＝1：1）溶解并定容。从中精密移取2 ml于50 ml容量瓶中，用混合液定容，备用

1．2 ．2 样品供试液制备：取样品约2．0 g，精密称量，放置于烧瓶中，加入甲苯80 ml，持续搅拌，加热回流1．5 h，冷却至60℃，在搅拌下加入甲醇120 m l，烧结玻璃过滤器滤过。用甲苯与甲醇（4：6）混合液25 ml冲洗烧瓶和滤渣，将洗液与滤液合并，并用相同的混合液稀释至250ml，取50 ml在45℃真空蒸干，残渣用5．0 ml的乙腈与四氢呋喃等体积混合液溶解，备用。

1．3 色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-SP 4．6×150 mm，5 μm；流动相：乙腈：四氢呋喃：水＝60：30：10；流速：1．5 ml／min；柱温为室温；检测波长：280 nm；进样体积：20μl。

2 ．结果与讨论

2．1 系统适应性试验

分别取标准品溶液、样品供试液、空白溶液各20μl注入色谱仪，记录色谱图，对照品溶液色谱图如图1所示。可见抗氧剂1010、330、1076的保留时间分别为4．854 min、5．624 min、9．089 min，空白液在三种抗氧剂出峰位置均无干扰。

图1 标准品（A）和样品（B）的HPLC色谱图Fig．1．The chromatography of standards（A）and sample（B）峰1-抗氧剂1010；峰2-抗氧剂330；峰3-抗氧剂1076 Peak 1-antioxidant1010，peak 2-antioxidant330，peak 3-antioxidant1076

2．2 线性关系

将抗氧剂1010标准品稀释至1、2、5、10、20、50 mg／L浓度，分别进样20μl，进行HPLC测定。其线性方程为C＝0．0002639178×A+0．1748723，相关系数R2＝0．99998，表明在1．0166～50．83 mg／L范围内线性良好。

同理将抗氧剂330标准品稀释至2、4、10、20、40、100 mg／L浓度，分别进样20μl，进行HPLC测定。其线性方程为C＝0．000173418×A-0．0698611，相关系数R2＝0．99994，表明在2．0434～102．17 mg／L范围内线性良好。

将抗氧剂1076标准品稀释至1、2、4、10、20、40 mg／L浓度，分别进样20μl，进行HPLC测定。其线性方程为C＝0．0004266264×A+0．5195387，相关系数R2＝0．99999，表明在1．02～40．8 mg／L范围内线性良好。

2．3 精密度试验

取3种抗氧剂的标准品溶液，进样20μl，进行HPLC的测定，重复进样6次测定其峰面积，结果抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076的RSD分别为0．05%，0．04%，0．10%。

2．4 稳定性试验

取抗氧剂标准品溶液，分别在0、0．5、1、2、6、24 h进样20μl，进行HPLC测定其峰面积，结果抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076的RSD分别为0．14%，0．17%，0．19%，表明溶液在24 h内基本稳定。

2．5 回收率试验

取已知含量的三层共挤输液用袋剪碎越2．0 g，精密称定，置圆底烧瓶中，分别精密加入混合标准品溶液（含抗氧剂1010：242．0 mg／L；抗氧剂330：240．8 mg／L；抗氧剂1076：241．6 mg／L）0．1、0．5、1．0 mL，制成低、中、高三种浓度的样品，每种制备3份，然后按1．2．2项下方法制备供试品溶液。结果抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076的回收率分别为103．81%、90．79%、92．55%，RSD分别为7．75%，3．99%，4．21%。

2．6 最低检测限与最低定量限

取标准品溶液加混合液稀释测定，记录色谱图，当信噪比S／N为3：1时，抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076的最低检出限分别为0．25 mg／L、0．15 mg／L、0．60 mg／L。当信噪比S／N为10：1时，抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076的最低定量限分别为1．0 mg／L、0．5mg／L、1．0 mg／L。

2．7 样品的测定

取不同厂家不同批号的三层共挤输液用袋样品共10批，按1．2．2项下制备供试品溶液进行HPLC测定，按外标法以峰面积计算含量，测定结果见表1。

表1 三层共挤输液用袋中抗氧剂含量测定结果Tab．1．The results of determination of antioxidants in three-layer co-extrusion infusion bags

结果表明所有样品的抗氧剂含量均较低，符合欧洲药典的抗氧剂总量小于0．3%的要求。

3 ．结论

方法学验证实验表明，采用高效液相色谱法测定三层共挤输液用袋中抗氧剂1010、抗氧剂330、抗氧剂1076的含量，方法准确可靠，操作较为简易，能较好地控制产品质量，易于推广应用。同时本文测定了检测结果显示，三层共挤输液用袋中抗氧剂含量低，产品安全性较高。

［1］吕聘敏．我国多层共挤膜输液用袋的现状［J］．中外健康文摘：临床医师，2008，5（7）：356-357

［2］谢兰桂，汤龙，孙会敏等．再生塑料及其检测技术研究进展［J］．药物分析杂志，2010，30（10）：1985-1989

［3］曾人泉．塑料加工助剂［M］．北京：中国物资出版社．1997

［4］杨素，周正亚．聚烯烃中抗氧剂330的快速分析方法研究［J］．塑料助剂，2009，76（4）：46-50

［5］杨素，杨苏平，周正亚．红外光谱法对聚烯烃中抗氧剂1010的定性、定量研究［J］．红外，2007，28（2）：40-43

［6］El Mansouri H，Yagoubi N，Ferrier D．Extraction of polypropylene additives and their analysis by HPLC［J］．Chromatographia，1998，48（718）：491-496

［7］朱碧君，胡红刚，李婷婷等．HPLC法测定聚丙烯输液瓶中抗氧剂1010、抗氧剂1076、抗氧剂168、抗氧剂330的含量［J］．药物分析杂志，2012，32（3）：416-419

［8］European Pharmacopoeia 7．0［S］3．1．6．2010．

Determ ination of antioxidant 1010，antioxidant 330 and antioxidant 1076 in three-layer co-extrusion infusion bags by HPLC

Wu Yi Qu Yanan
（Packaging Materials and Containers Test Center of Guangdong Medical Instruments Quality Surveillance and Inspection Institute）

Object：To establish amethod for determination of antioxidant1010，antioxidant330 and antioxidant1076 in three-layer co-extrusion infusion bags by HPLC．Methods：The Inertsill ODS-SP column（4．6 mmx150 mm，5μm）was adopted with themobile phase of acetonitrile：tetrahydrofuran：H20（60：30：10，v／v／v）at a flow rate of1．5 ml／min．The column temperature was25℃．The detection wavelength was280 nm．Results：The linear relationship within the range 1．0166-50．83mg／L．2．0434-102．17 mg／L and 1．02-40．8 mg／L for antioxidant1010，antioxidant330 and antioxidant1076，respectively，was good with the correlation coefficients of all 0．999．The average recoveries of antioxidant 1010，antioxidant 330 and antioxidant1076 were 103．81%（RSD＝7．75%）．90．79%（RSD＝3．99%）．92．55%（RSD＝4．21%），correspondingly．Conclusionηle method is fast，convenient，accurate and can be used for quality control of antioxidants in three-layer co-extrusion infusion bags

santioxidant HPLC three-layer co-extrusion infusion bags

吴漪，女，博士，广东省医疗器械质量监督检验所包装材料容器检验中心研究室负责人，参与基金项目：广州市生物医用血液净化材料研究与开发重点实验室。项目编号：穗科信字［2013］163-5号）