IκBα显性负相重组慢病毒载体的构建及其在 NF-κB信号通路中的功能验证

路尧，严沁，卢春（南京医科大学病原生物学系，江苏 南京 210029）

IκBα显性负相重组慢病毒载体的构建及其在 NF-κB信号通路中的功能验证

路尧，严沁，卢春
（南京医科大学病原生物学系，江苏 南京 210029）

目的：构建表达 IκBα显性负相结构（dominant-negative construct，IκBα-DN）的重组慢病毒载体，并检测其对核转录因子-κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）信号通路的影响。方法：PCR扩增 IκBα-DN片段并插入至 pCDHCMV-MCS-EF1-copGFP载体中。将构建的 pCDH-IκBα-DN重组质粒与包装质粒 psPAX2和包膜质粒 pMD2.G共同转染 293 T细胞，包装表达 IκBα-DN的重组慢病毒，并用梯度稀释法检测病毒滴度。以慢病毒 IκBα-DN感染 293 T细胞，通过免疫印迹检测IκBα蛋白的表达量。将慢病毒 IκBα-DN感染已转染有 NF-κB虫荧光素酶报告质粒的 293 T细胞，24 h后检测 IκBα-DN对 NF-κB活性的影响。进一步用慢病毒 IκBα-DN感染表达卡波氏肉瘤病毒（Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus，KSHV）编码的病毒FLICE抑制蛋白（viral FLICE inhibitory protein，vFLIP）的人脐静脉内皮细胞株（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs），以检测 IκBα-DN在 NF-κB信号通路中的功能。结果：限制性内切酶鉴定以及核酸序列比对证实重组质粒 pCDH-IκBα-DN构建成功。通过三质粒包装系统包装表达 IκBα-DN的重组慢病毒，病毒滴度约为 3×107efu/mL。以慢病毒 IκBα-DN感染 293 T细胞，免疫印迹结果表明胞质中 IκBα蛋白的表达量明显升高。虫荧光素酶报告实验结果提示，重组慢病毒介导的 IκBα-DN能有效抑制 NF-κB的活性。在表达KSHV vFLIP的 HUVECs中，IκBα-DN也能显著减弱 NF-κB通路信号。结论:成功构建的含IκBα-DN序列的慢病毒能够有效地感染293 T细胞和内皮细胞，且初步结果提示 IκBα-DN能增加胞质内 IκBα的含量，并进一步抑制 NF-κB信号的传递。

核转录因子-κB；IκBα；显性负相结构；慢病毒；卡波氏肉瘤病毒

［Abstract］Objective:To construct the recombinant lentivirus carrying the dominant-negative construct of IκBα（IκBα-DN），and identify the role in NF-κB signaling pathway.Methods:The fragment of IκBα-DN sequence from expression vector pMIGR1-IκBα-DN was cloned into the lentivirus vector pCDH-CMVMCS-EF1-copGFP.The recombinant plasmid pCDH-IκBα-DN，packaging vector psPAX2 and envelope vector pMD2.G were co-transfected into 293 T cells.The transfection efficiency was determined by observing the expression of green fluorescent protein（GFP）.The total of 293 T cells were transduced with Lentivirus-IκBα-DN in the same multiplicity of infection（MOI）and IκBα protein was detected by Western blot. Next，Lentivirus-IκBα-DN was transduced into 293 T cells transfected with NF-κB luciferase reporter plasmid before and then the activity of NF-κB was detected.Similarly，human umbilical vein endothelial cells （HUVECs）expressing Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus（KSHV）encoding viral FLICE inhibitory protein（vFLIP）were infected with Lentivirus-IκBα-DN and the expression of IκBα protein was determined by Western blot.Results:The recombinant plasmid pCDH-IκBα-DN and the recombinant lentivirus carry-ing IκBα-DN were constructed successfully in succession.The titer of Lentivirus-IκBα-DN was 3×107efu/ mL.The expression of cytoplasmic IκBα protein in 293 T cells infected by Lentivirus-IκBα-DN was significantly increased.Further，the result of luciferase reporter assay indicated that Lentivirus-IκBα-DN inhibited the activity of NF-κB.The same result was found in HUVECs expressing vFLIP and infected by Lentivirus-IκBα-DN.Conclusion:The recombinant lentivirus containing IκBα-DN was successfully constructed，and was able to infect 293 T cells and HUVECs effectively.Our date indicated that IκBα-DN could increase the content of IκBα in cytoplasm，and further inhibit NF-κB signaling.

［Key words］NF-κB；IκBα；dominant-negative construct；recombinant lentivirus；Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus

核转录因子-κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）的抑制性蛋白（inhibitor kappa B，IκB）家族包括8个成员，分别是p100、p105、IκBα、IκBβ、IκBγ、IκBε、Bcl-3和 IκB-R［1］。NF-κB以 p50/p65异二聚体形式普遍存在于细胞质中，与 IκBα结合而呈失活状态［2］。经多种刺激剂激活，IκBα被磷酸化与降解，使得NF-κB与 IκBα解离转位进入细胞核，并与靶基因启动子或增强子上的 κB位点结合，通过调节多种靶基因的表达参与调控细胞存活、增殖、分化以及血管生成等许多重要的生物学过程［3-6］。

卡波氏肉瘤病毒 （Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus，KSHV）是一种 γ2型疱疹病毒［7］，是卡波氏肉瘤（Kaposi's sarcoma，KS）的病原体［8］。KS以血管异常增生为主要特征，常发于皮肤并可累及黏膜淋巴结和内脏器官［9］。KSHV编码的多种蛋白具有致瘤效应，如 K2基因编码的病毒白细胞介素6 （viral interleukin-6，vIL-6）、K9基因编码的病毒干扰素调节因子1（viral interferon regulatory factor 1，vIRF-1）以及 K13基因编码的病毒 Fas相关死亡结构域介素-1β转换酶抑制蛋白（viral FLICE inhibitory protein，vFLIP）等［9-10］。其中致瘤蛋白 vFLIP在潜伏期表达［10］，可与 IκB激酶复合物（inhibitor of kappa B kinase complex，IKK）相互作用并激活 NF-κB信 号 通 路［11-13］。为 研 究 NF-κB信 号 通 路 在vFLIP致瘤过程中的作用，本实验构建了能够抑制IκBα磷酸化并阻止 NF-κB入核发挥转录因子功能的IκBα显性负相结构（dominant-negative construct，IκBα-DN）重组慢病毒载体，从而为阐明 KSHV的感染和致瘤机制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 质粒与细胞

本实验中所用的慢病毒包装系统由3种质粒构成，分别为包装质粒 psPAX2、包膜质粒 pMD2.G以及慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP。真核表达质粒 pMIGR1-IκBα-DN，虫荧光素酶报告实验中所用NF-κB虫荧光素酶报告质粒与内参质粒pRL-TK为本实验室保存。实验中所用人胚肾上皮细胞（293 T细胞）和人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）均在37℃、5％ CO2的培养箱中培养，分别生长于含有10％和20％灭活胎牛血清（美国 Gibco公司产品）的 DMEM中（美国Hyclone公司产品），培养基中加入庆大霉素（100 U/mL）、链霉素（100 μg/mL）和青霉素（100 U/mL）。

1.2 试剂

实验中的 PCR引物由苏州金唯智科技有限公司合成；PCR酶购自南京诺唯赞科技有限公司；质粒小提试剂盒及凝胶纯化试剂盒为美国Omega公司产品；DNA连接酶与质粒转染试剂 LipofectamineTM2000分别购自美国Thermo公司和Invitrogen公司；抗 IκBα单克隆抗体与抗 Flag M2单克隆抗体均为美国Cell Signaling公司产品；抗α-微管蛋白单克隆抗体购自美国 Santa Cruz公司；Dual-Glo Luciferase Assay System为美国Promega公司产品。

1.3 方法

1.3.1 PCR扩增 IκBα-DN序列 根据真核表达质粒 pMIGR1-IκBα-DN分别设计 IκBα-DN序列的上下游引物，其中上游引物为5′-TTGAATTCGCCACCATGTTTCAGCCAGCTGGGCAC-3′（下划线部分为EcoR I识 别 序列），下 游引物为5′-CGGGATCCTTATTTGTCATCGTCGTCCTTATAATCCTTATCGTCATCATCCTTGTAATCTTTGTCGTCGTCATCCTTGTAGTCTAATGTCAGACGCTGGCCTCC-3′（下划线部分为BamH I识别序列，斜体部分为标签蛋白 Flag序列）。以 pMIGR1-IκBα-DN质粒为模板，通过上述上下游引物PCR扩增出IκBα-DN序列，经核酸电泳检测 PCR产物并切胶回收。

1.3.2 重组质粒pCDH-IκBα-DN的构建及鉴定

用限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ同时酶切PCR回收产物与慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP，将纯化后的双酶切产物用 T4连接酶连接过夜。取连接产物转化入感受态大肠埃希菌DH5α，挑选氨苄西林抗性菌落进行扩增，通过质粒小提试剂盒提取出重组质粒 pCDH-IκBα-DN。对获得的重组质粒进行双酶切鉴定，同时送苏州金唯智科技有限公司进行核酸序列测定。

1.3.3 重组慢病毒Lv-IκBα-DN的包装与滴度测定

利用LipofectamineTM2000将构建成功的重组质粒pCDH-IκBα-DN与包 装质 粒 psPAX2、包膜 质 粒pMD2.G共同转染入 293 T细胞，转染10 h后更换新鲜培养基继续培养［14］。终止转染 48 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光的表达。收取细胞培养上清并经0.45 μm滤器过滤，将包装的重组慢病毒及其对照慢病毒分别命名为Lv-IκBα-DN和Lv-Mock。将病毒液进行梯度稀释，分别感染提前24 h铺板的293 T细胞。通过荧光计数法测定两者滴度。

1.3.4 重组慢病毒介导的 IκBα-DN在 293 T细胞中的表达 将293 T细胞铺入 6孔板中，24 h后以相同感染复数的 Lv-IκBα-DN和 Lv-Mock病毒液分别感染。感染48 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光表达，同时提取蛋白进行免疫印迹，检测 IκBα蛋白的表达情况。

1.3.5 重组慢病毒介导的 IκBα-DN在 HUVECs中的表达 依照“1.3.4”中的步骤感染HUVECs，48 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光表达，同时提取蛋白进行免疫印迹，检测IκBα蛋白的表达情况。

1.3.6 虫荧光素酶报告实验检测 IκBα-DN对 NF-κB活性的影响 提前24 h将293 T细胞铺入48孔板中，利用 LipofectamineTM2000共同转染入 NF-κB虫荧光素酶报告质粒以及内参质粒pRL-TK。转染24 h后依照“1.3.4”中的步骤感染 24 h。收集细胞，按照 Dual-Glo Luciferase Assay System说明书中推荐步骤检测荧光素酶活性。

1.4 统计学方法

使用统计学软件 SPSS 19.0对数据进行标准差统计，两两比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IκBα-DN序列的PCR扩增

以真核表达质粒 pMIGR1-IκBα-DN为模板进行PCR扩增，PCR产物经1％琼脂糖凝胶电泳鉴定，在约1 039 bp位置出现与预期一致的 IκBα-DN片段（图1）。

图1 PCR扩增IκBα-DN序列

2.2 重组质粒pCDH-IκBα-DN的鉴定

对构建的重组质粒pCDH-IκBα-DN进行酶切鉴定，酶切产物经1％琼脂糖凝胶电泳后分别产生 2条片段，大小约7 742 bp和1 039 bp，即代表慢病毒载体 pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP和 IκBα-DN序列（图 2）。测序结果表明，全长为1 039 bp的外源基因已克隆至慢病毒载体中。DNAssist软件比对结果证实，插入的IκBα-DN片段与pMIGR1-IκBα-DN中的序列一致，引入的 Flag序列完全正确，表明重组质粒pCDH-IκBα-DN构建成功。

图2 重组质粒 pCDH-IκBα-DN的酶切鉴定

2.3 重组慢病毒的包装与滴度测定

用LipofectamineTM2000转染试剂将包装质粒、包膜质粒与IκBα-DN重组质粒共转染入 293 T细胞，48 h后在荧光显微镜下可观察到大约 80％293 T细胞表达绿色荧光（图3）。分别收取重组慢病毒Lv-IκBα-DN以及对照慢病毒Lv-Mock的病毒液，过滤后感染 293 T细胞，48 h后通过荧光计数法测得Lv-IκBα-DN和 Lv-Mock的滴度分别为 3×107efu/ mL和2×107efu/mL。

2.4 重组慢病毒 Lv-IκBα-DN在293 T细胞中的表达验证

将Lv-IκBα-DN和 Lv-Mock病毒液分别感染293 T细胞，48 h后在荧光显微镜可观察到约 90％细胞表达绿色荧光。同时收取细胞蛋白进行免疫印迹，利用抗Flag M2单克隆抗体可在39×103处检测到特异性条带，且 IκBα蛋白表达水平上升，说明重组慢病毒Lv-IκBα-DN和 Lv-Mock包装成功，IκBα-DN能够增加胞质内 IκBα蛋白的表达。见图4。

图3 三种质粒共转染293 T细胞后的绿色荧光蛋白的表达（×100）

图4重组慢病毒介导的 IκBα-DN在 293 T细胞中的表达

2.5 虫荧光素酶报告实验检测 IκBα-DN对 NF-κB活性的影响

将NF-κB虫荧光素酶报告质粒与内参质粒pRL-TK共同转染入293 T细胞，并以Lv-IκBα-DN 和Lv-Mock病毒液分别进行感染，24 h后检测荧光素酶活性。结果显示，IκBα-DN显著抑制了 NF-κB报告质粒的活性，差异有统计学意义（P＜0.000 1）。见图5。

图 5 虫荧光素酶报告实验检测 IκBα-DN对NF-κB活性的影响

2.6 重组慢病毒 Lv-IκBα-DN在 HUVECs中的功能验证

用Lv-IκBα-DN和Lv-Mock病毒液分别感染稳定表达 KSHV vFLIP的 HUVECs（vFLIP）及其对照细胞（Mock），最终获得 Mock-pCDH、Mock-IκBα-DN、vFLIP-pCDH、vFLIP-IκBα-DN四株细胞株。免疫印迹检测发现，经重组慢病毒导入IκBα-DN序列后，被vFLIP所抑制的胞质内 IκBα蛋白的表达明显升高（图6），证明IκBα-DN在HUVECs中可以得到有效表达，并且能够在稳定表达 KSHV vFLIP的细胞中发挥抑制 NF-κB信号通路的作用。

图6 重组慢病毒介导的 IκBα-DN在 HUVECs中的功能验证

3 讨论

NF-κB信号通路在抵御病原微生物的天然免疫系统中起着重要的作用，而很多病原微生物也在不断地进化中形成了调控 NF-κB信号通路的应对策略。其中，KSHV的生命周期和致病过程被证实与NF-κB信号通路密切相关。KSHV是一种可以导致多种恶性肿瘤发生的病毒，NF-κB信号通路的过度激活可导致 NF-κB靶基因的异常表达，这些基因往往与肿瘤的发生、转移、组织浸润以及肿瘤细胞的抗凋亡作用相关，如调控细胞增殖的细胞周期蛋白 D1和细胞周期蛋白 E，与炎症反应和血管生成相关的白细胞介素1、白细胞介素6、血管内皮生长因子、细胞间黏附分子-1和内皮细胞选择素，以及与迁移侵袭相关的尿激酶、基质金属蛋白酶2/9和细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）。

目前研究表明，KSHV编码的多种蛋白参与调节 NF-κB信号通路，如 vFLIP、vGPCR、K1、vIRF3、FGARAT、K15、RTA［15］。其中，KSHV潜伏期蛋白vFLIP通过与NEMO绑定促进胞质内IKK复合物的形成，进而激活 NF-κB信号通路［16］。除此之外，KSHV vFLIP激活 NF-κB信号通路还需要上调宿主细胞环氧化酶2的表达［17］。另有研究表明，在KSHV感染的细胞中，被 vFLIP激活的 NF-κB进入细胞核后除了调节细胞的存活、增殖及血管形成等生物学过程，同时也增强了锌指蛋白A20的表达，表达量增加的 A20则可抑制 NF-κB通路信号，从而形成了对 NF-κB信号通路的负反馈调节［18］。在经典的NF-κB信号通路中，IκBα也是典型的能够发挥抑制NF-κB入核作用的关键蛋白。IκBα可以通过C端含有的3～8个锚蛋白基序，覆盖NF-κB的核定位序列，从而达到抑制NF-κB活性的目的［19-21］。

因此，许多研究中都采用 IκBα磷酸化的抑制剂来阻断NF-κB信号通路，以满足各自的研究需要。目前比较常用的为（E）-3-（对甲苯磺酰基）丙烯腈，是一种高效的化学抑制剂，能够不可逆地抑制IκBα的磷酸化反应，从而阻止了 NF-κB的入核。这种化学抑制剂优点是效率高，但有明显的细胞毒性作用，会影响细胞的正常生长，继而会对随后的表型实验产生干扰。因此，本课题组构建了IκBα显性负相结构的重组慢病毒载体，它以慢病毒的方式导入细胞并稳定表达，既能够成功地抑制IκBα的磷酸化又不会对细胞产生毒副作用。这种方法目前已经比较成熟，已有研究者利用IκBα-DN成功使得胰腺癌 PC-3细胞株中 NF-κB低表达［22］，此外国外实验室为研究 NF-κB信号通路调节乳腺癌细胞向肺部转移过程中的免疫和炎症反应过程，就应用了IκBα-DN这一技术并取得了很好的结果［23］。

本实验室在前期研究中将vFLIP基因通过慢病毒载体的形式整合入HUVECs，稳定表达的vFLIP蛋白通过活化的IKK复合物泛素化、磷酸化并最终降解IκBα，从而使 NF-κB大量进入细胞核，启动与肿瘤形成相关基因的表达［24］。目前本实验室已经通过同位素标记相对和绝对定量蛋白组学技术，对稳定表达 vFLIP的内皮细胞及其对照细胞株进行了蛋白表达谱的测定，并筛选出部分与肿瘤形成有关的蛋白。vFLIP可能通过 NF-κB信号通路调控其中某些关键蛋白的表达，从而参与 KSHV的致瘤过程。为了进一步验证 NF-κB信号通路及其下游的关键靶基因在其中的重要作用，本实验构建了表达IκBα-DN的重组慢病毒载体，以抑制 IκBα的磷酸化与降解，从而抑制NF-κB信号的活化。在后续研究中，构建的IκBα-DN重组慢病毒载体将应用于逆转vFLIP对NF-κB信号通路的激活作用，有助于检验所筛选出的关键蛋白是否参与了 vFLIP通过调控NF-κB信号通路促进肿瘤生成的过程，从而为进一步阐明KSHV相关恶性肿瘤的发病机制奠定实验基础。

［1］Baldwin AS Jr.The NF-κB and IκB proteins:new discoveries and insights［J］.Annu Rev Immunol，1996，14:649-683.

［2］Liu L，Eby MT，Rathore N，et al.The human herpes virus 8-encoded viral FLICE inhibitory protein physically associates with and persistently activates the IκB kinase complex［J］.J Biol Chem，2002，277（16）:13745-13751.

［3］Bullani RR，Huard B，Viard-Leveugle I，et al.Selective expression of FLIP in malignant melanocytic skin lesions［J］.J Invest Dermatol，2001，117（2）:360-364.

［4］Liu K，McDuffie E，Abrams SI.Exposure of human primary colon carcinoma cells to anti-Fas interactions influences the emergence of pre-existing Fas-resistant metastatic subpopulations［J］.J Immunol，2003，171（8）: 4164-4174.

［5］Irmler M，Thome M，Hahne M，et al.Inhibition of death receptor signals by cellular FLIP［J］.Nature，1997，388（6638）:190-195.

［6］Sun Q，Zachariah S，Chaudhary PM.The human herpes virus 8-encoded viral FLICE-inhibitory protein induces cellular transformation via NF-κB activation［J］.J Biol Chem，2003，278（52）:52437-52445.

［7］Chang Y，Cesarman E，Pessin MS，et al.Identification of herpesvirus-like DNA sequences in AIDS-associated Kaposi's sarcoma［J］.Science，1994，266（5192）: 1865-1869.

［8］Katano H，Sata T.Human herpesvirus 8 virology，epidemiology and related diseases［J］.Jpn J Infect Dis，2000，53（4）:137-155.

［9］Ganem D.KSHV infection and the pathogenesis of Kaposi's sarcoma［J］.Annu Rev Pathol，2006，1:273 -296.

［10］Nicholas J.Human herpesvirus 8-encoded proteins with potential roles in virus-associated neoplasia［J］.Front Biosci，2007，12:265-281.

［11］马新廷，郝婷婷，卢春，等.KSHV抗凋亡蛋白vFLIP编码基因的克隆表达及抗 vFLIP多克隆抗体的制备与鉴定［J］.江苏大学学报:医学版，2012，22 （1）:1-8.

［12］Zhu X，Zhou F，Qin D，et al.Human immunodeficiency virus type 1 induces lytic cycle replication of Kaposi's-sarcoma-associated herpesvirus:role of Ras/c-Raf/MEK1/2，PI3K/AKT，and NF-κB signaling pathways［J］.J Mol Biol，2011，410（5）:1035-1051.

［13］王平，黄敏，卢春.含 HIV-1 Vif基因重组慢病毒表达载体的构建及其对 KSHV裂解性周期复制影响的初探［J］.南京医科大学学报:自然科学版，2010，3 （3）:286-290，355.

［14］Zhu X，Guo Y，Yao S，et al.Synergy between Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus（KSHV）vIL-6 and HIV-1 Nef protein in promotion of angiogenesis and on-cogenesis:role of the AKT signaling pathway［J］.Oncogene，2014，33（15）:1986-1996.

［15］de Oliveira DE，Ballon G，Cesarman E.NF-κB signaling modulation by EBV and KSHV［J］.Trends Microbiol，2010，18（6）:248-257.

［16］Tolani B，Matta H，Gopalakrishnan R，et al.NEMO is essential for Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus-encoded vFLIP K13-induced gene expression and protection against death receptor-induced cell death，and its N-terminal 251 residues are sufficient for this process ［J］.J Virol，2014，88（11）:6345-6354.

［17］Sharma-Walia N，Patel K，Chandran K，et al.COX-2/ PGE2:molecular ambassadors of Kaposi's sarcoma-associated herpes virus oncoprotein-v-FLIP［J］.Oncogenesis，2012，1:e5.

［18］Matta H，Gopalakrishnan R，Punj V，et al.A20 is induced by Kaposi sarcoma-associated herpesvirus-encoded viral FLICE inhibitory protein（vFLIP）K13 and blocks K13-induced nuclear factor-κB in a negative feedback manner［J］.J Biol Chem，2011，286（24）: 21555-21564.

［19］Bagneris C，Ageichik AV，Cronin N，et al.Crystal structure of a vFlip-IKKγ complex:insights into viral activation of the IKK signalosome［J］.Mol Cell，2008，30（5）:620-631.

［20］Field N，Low W，Daniels M，et al.KSHV vFLIP binds to IKK-γ to activate IKK［J］.J Cell Sci，2003，116 （18）:3721-3728.

［21］Matta H，Chaudhary PM.Activation of alternative NF-κ B pathway by human herpes virus 8-encoded Fas-associated death domain-like IL-1 β-converting enzyme inhibitory protein（vFLIP）［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2004，101（25）:9399-9404.

［22］谢传高，魏树梅，徐选福，等.显性失活 IκBα质粒对胰腺癌PC-3细胞株核因子-κB和环氧合酶-2表达的影响［J］.中国病理生理杂志，2005，21（8）:1557 -1561.

［23］Connelly L，Barham W，Onishko HM，et al.NF-κB activation within macrophages leads to an anti-tumor phenotype in a mammary tumor lung metastasis model［J］. Breast Cancer Res，2011，13（4）:R83.

［24］金镠洋，严沁，卢春.KSHV vFLIP在血管内皮细胞中的表达及其功能验证［J］.江苏大学学报:医学版，2014，24（1）:6-11，17.

Construction of recombinant expression lentivirus vector carrying IκBα-DN and identification of its role in NF-κB signaling pathway

LU Yao，YAN Qin，LU Chun
（Department of Microbiology，Nanjing Medical University，Nanjing Jiangsu 210029，China）

R393

A

1671-7783（2015）01-0027-06

10.13312/j.issn.1671-7783.y140327

路尧（1986—），男，硕士研究生；卢春（通讯作者），教授，硕士生导师，E-mail:clu@njmu.edu.cn

2014-08-27 ［编辑］何承志