桂西壮族散发性激素耐药型肾病综合征NPHS2基因多态性分析研究

覃幼玲等

【摘要】目的探讨桂西壮族散发性激素耐药型肾病综合征（SRNS）患者NPHS2基因突变及其特点。方法采用DNA序列直接测定法检测50例桂西壮族散发性SRNS患儿（观察组）血清NPHS2 基因全部外显子及其周围的部分内含子，并与30例健康青少年（对照组）进行比较。结果观察组NPHS2基因的8个外显子均未检测到错义突变，但检测到 3个NPHS2 基因多态性即288C>T、954C>T和1038A>G；观察组的基因型和等位基因频率与对照组分别进行比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。结论提示NPHS2基因多态可能不是桂西壮族散发性 SRNS 患儿的主要致病原因。

【关键词】NPHS2基因；激素耐药型肾病综合征；种族

中图分类号：R692 文献标识码：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2015.04.001

【Abstract】ObjectiveTo explore the mutation and characteristics of NPHS2 gene in patients with sporadic steroidresistant nephritic syndrome （SRNS） in Zhuang ethnic group in western Guangxi.MethodsDirect measurement of DNA sequence was applied to test all the exons and some surrounding introns of serum NPHS2 gene in 50 cases of children with sporadic SRNS （observation group），and then compared them with those of 30 healthy children （control group）.Results No missense mutation was found in the detection of the 8 exons of NPHS2 gene in the observation group，but 3 polymorphism of NPHS2 gene （288C>T，954C>T and 1038A>G） were found.The genotype and allele frequency of the observation group were compared with those of the control group respectively，difference was not statistically significant（P>0.05）.ConclusionThe results show that the mutation of NPHS2 gene may not be the main cause of sporadic SRNS in Zhuang ethic group in western Guangxi.

【Key words】NPHS2 gene；SRNS；ethnic group

原发性肾病综合征（PNS）是常见的肾小球疾病，大量蛋白尿是PNS的主要临床表现，也是肾脏病理不断进展的主要因素之一。PNS经足量糖皮质激素治疗4周无效应者称为激素耐药型肾病综合征（SRNS） [1]，临床上10%～20%的PNS患者对糖皮质激素耐药，逐渐发展为终末期肾病（ESRD）。随着分子生物学与遗传学研究的深入， NPHS2基因突变可引起散发性或家族性SRNS得到证实。目前，国际上散发性SRNS患儿NPHS2基因突变的研究已有报道，我国针对散发性SRNS患儿NPHS2基因突变的研究相对较少。本研究应用直接测序技术分析桂西壮族散发性SRNS患儿NPHS2基因突变及其特点。

1对象与方法1.1研究对象选择2011年5月～2013年5月收治于右江民族医学院附属医院肾内科的50例散发性SRNS患儿（观察组），男38例，女12例；年龄（12.13±3.68）岁。选择尿检正常的30 例健康桂西壮族青少年人群作为对照组，男19例，女11例；年龄（12.45±3.54）岁。本研究经医院伦理委员会批准，知情同意书由患儿家长签署。

1.2病例的入选和排除标准（1）发病年龄：3个月～18岁；（2）肾病综合征：大量蛋白尿（尿蛋白>35 g/L）、低白蛋白血症（血浆白蛋白≤30 g/L）、高脂血症（血浆胆固醇高于 5.7 mmol/L）、不同程度的水肿；（3）激素耐药为泼尼松1.5～2.0 mg·kg1·d1治疗4周后尿蛋白未转阴的患儿[1]；（4）籍贯为桂西地区，壮族，来自不同家族，父母非近亲结婚；（5）无肾脏疾病家族史。排除标准：（1）继发性肾病综合征：乙型肝炎病毒相关性肾炎、系统性红斑狼疮、过敏性紫癜肾炎等；（2）遗传性肾病。

1.3方法

1.3.1基因组DNA提取从外周静脉抽取研究对象的空腹血样5 ml，置于含有枸橼酸钠和EDTA抗凝试管中，应用北京天根生化科技有限公司提供的TIAN amp Blood DNA Kit（血液基因组DNA提取试剂盒），提取DNA的样品严格按照操作说明书进行，确保得到高质量的DNA样品，保存在-80℃的冰箱中备用。

1.3.2引物设计和合成从美国国立医学图书馆的国家生物计算信息中心的 Nucleotide 数据库获得的基因组序列和 NPHS2基因外显子序列（Gene Bank：NT_004487.17），应用引物设计软件 Primer 5设计扩增NPHS2 的8个外显子全部编码区及其周围的部分内含子区域，全部引物委托大连TaKaRa公司合成。NPHS2基因8个外显子的引物序列和PCR产物见表1。