浅谈NF—kB信号在类风湿关节炎中的作用及临床意义

陈玉婷　曹永芬

【摘要】目的：分析NF-kB信号在类风湿关节炎临床治疗指导评价中应用的意义。方法：选取60只雄性SD大鼠，0.1ml福氏完全佐剂注入右后足足垫皮内，随机平均分为对照组与治疗1组、治疗2组，空白组不予治疗，治疗1组艾灸治疗，治疗2组艾灸治疗同时摘除肾上腺，对比3组NF-kB p65的活性。结果：对照组、治疗1组、治疗2组最终NF-kBp6 5吸光度值分别为0.64±0.02、0.37±0.04、0.63±0.01，治疗1组NF-kB p65吸光度值明显优于对照组（P<0.05），治疗2组与对照组NF-kB p65吸光度值无明显差异（P>0.05）。结论：艾灸疗法可有效抑制NF-kB炎性信号通路、抗炎，但需要在HPAA完整性前提下才能实现。

【关键词】NF-kB信号；类风湿关节炎；临床应用

类风湿性关节炎（RA）是集骨纤维化、骨质破坏、软骨吸收、慢性炎性反应于一体的慢性自身免疫性疾病，RA的产生主要因为体内缺乏内源性糖皮质激素。HPAA（下丘脑一垂体一肾上腺轴）在治疗中发挥着调节免疫、抑制RA炎性反应的重要作用。而艾灸被证实是RA临床的有效治疗方案，本研究分析了艾灸治疗中NF-kB信号特点。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取60只健康的雄性SD大鼠，随机平均分为对照组和2个治疗组。对照组20只，体重（202.1±13.1）g；治疗1组20只，体重（199.5±10.4）g；治疗2组20只，体重（205.3±13.4）g。3组健康状况和基础资料无统计学差异，P>0.05。

1.2 方法

首先将0.1ml福氏完全佐剂注入右后足足垫皮内，对照组不予以治疗。

治疗2组摘除肾上腺：腹腔注射50mg/kg戊巴比妥钠。按麻醉，俯卧，在两侧背部肋缘下1cm×1cm范围去毛，清洁消毒，将肌肉分离后找准双侧肾上腺，切除并缝合。

2个治疗组均予艾灸治疗。将大鼠固定于台上后在足三里、肾俞等部位各麦粒灸5壮（每壮为艾绒5g），左右交替艾灸，1次/d，1疗程为6天，连续治疗3疗程。

1.3 评价标准

对比3组NF-kB p65的活性：先后以标本固定液、石蜡包埋处理3组右侧踝关节，制作滑膜组织切片并脱蜡、冲洗、PBS浸泡，去离子水孵育，山羊血清工作液滴加处理，孵育，辣根酶标记、DAB显色剂处理，蒸馏水冲洗、复染、水洗、脱水，透明处利后封片。以普通光镜放大200倍观察，NF-kB p65阳性表达即可见呈褐色，阳性越明显、染色越深。视野由计算机摄像系统采样、BioMias对图像中信号特点处理分析，计算阳性染色面积、吸光度数据。

1.4 数据处理

本次数据采用SPSS 16.0软件对本研究的数据进行统计学的分析，计数资料的对比应用卡方检验，而计量资料的对比应用t检验，P<0.05时，差异具有统计学意义。

2 结果

对照组、治疗1组、治疗2组最终NF-kB p65吸光度值分别为0.64±0.02、0.37±0.04、0.63±0.01，治疗1组NF-kBp65吸光度值明显优于对照组（P<0.05），治疗2组与对照组NF-kB p65吸光度值无明显差异（P>0.05）。见表1。

3 讨论

RA临床治疗多使用非甾体消炎药、免疫抑制类药物，内源性GC的肾上腺皮质经典激素类疗法也有理想的抗炎效果。

NF-kB是RA进展中滑膜炎性反应重要的炎性细胞信号转导通道，其可通过IKK的激活，激活IKB磷酸化修饰，促使p65与p50的大量产生，尤其可提升细胞核中上述物质的含量，从而对炎性反应的发生起到调控作用。NF-kB类蛋白在滑膜细胞核内大量存在，若发生类风湿关节炎，患者患处滑膜内就会有更多的NF-kB表达现象。本次研究关节炎大鼠模型相关操作中，福氏佐剂造模后会很快发生NF-kB表达现象。GC的存在会对NF-kB细胞信号的转录过程产生干扰和抑制，从而达到理想的抗炎效果。而HPAA的保留是实现GC合理分泌、控制NF-kB转录工作的关键。

本研究分析了艾灸治疗中NF-kB信号特点在足三里、肾俞等部位各麦粒灸5壮（每壮为艾绒5g），连续治疗3疗程共18d，最终检测到对照组、治疗1组、治疗2组最终NF-kB p65吸光度值分别为0.64±0.02、0.37±0.04、0.63±0.01，保留HPAA且规范艾灸的一组有很好的NF-kBp65吸光度结果，证实了治疗的有效性。艾灸可改善HPAA功能，更好地对炎性细胞因子释放产生调控，达到治疗目的。艾灸的治疗效果必须在HPAA保留的前提下才能得到保证，再次证明了HPAA功能正常情况下配合艾灸治疗的必要性。