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初诊乙型肝炎患者外周血淋巴细胞散点图参数变化的研究

2015-09-05张彦平王香玲王金华

国际检验医学杂志 2015年17期
关键词:血细胞病毒感染分析仪

徐 阳,张彦平,张 磊,王香玲,王金华

(西安交通大学第二附属医院检验科,陕西西安710004)

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒引起的,在各种类型的病毒性肝炎中,乙型肝炎对人类健康的危害最为严重。乙型肝炎病毒感染在成年后通常是自限性的,慢性持续性感染的病毒都是围产期时获得的。控制感染和肝细胞的损伤都是严格依赖于保护性免疫反应,因为机体内肝细胞最主要的作用之一就是消除细胞内的病毒[1]。慢性乙型肝炎病毒感染者的疾病进展和远期预后取决于其体内的病毒水平,慢性乙型肝炎患者肝硬化、肝硬化失代偿及原发性肝癌的发生率和血清病毒载量呈正相关[2]。Sysmex XE-2100血细胞分析仪,其采用专用检测通道,加入特殊的白细胞计数分类溶血剂和聚次甲基荧光染色液(SFL)。DIFF通道中纵坐标表示侧向荧光强度,反映每个细胞核酸含量;横坐标表示侧向散射光,反映每个细胞内容物复杂程度。根据每个细胞的上述两项数值,可得到中性粒细胞参数Neut-Y、Neut-X 和 淋 巴 细 胞 参 数Lymph-Y、Lymph-X。本研究旨在探讨乙型肝炎病毒感染患者Sysmex XE-2100血细胞分析仪DIFF通道白细胞散点图研究性参数的变化,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选取2014年7~10月于西安交通大学医学院第二附属医院感染科门诊初诊为乙型肝炎病毒感染的96例患者作为观察组,以乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性且乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)>1.0×102IU/mL为诊断标准,其中男56例(58.7%),女40例(41.3%)。同时随机选取同期于本院体检的健康同龄人100例作为对照组,HBsAg、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAb)等乙型肝炎血清学指标均为阴性且HBV-DNA<1.0×102IU/mL,其中男43例(43.0%)、女57例(57.0%)。两组在性别、年龄方面比较,差异均无统计学意义(P>0.05),见表1。

1.2 仪器与试剂 主要仪器包括Sysmex XE-2100血细胞分析仪、罗氏Cobas8000全自动生化分析仪、PE-5700核酸扩增仪、雅培西门子i-2000(Architect i2000SR)。使用的试剂及试验过程中所需要的标准液均为原装配套。

1.3 方法 对所有乙型肝炎病毒感染患者和对照组人群进行血液采样,用乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝管采集外周血2mL,在2h之内采用Sysmex XE-2100血细胞分析仪进行检测;本次研究的检测方法均严格按照Sysmex XE-2100血细胞分析仪、罗氏全自动生化分析仪、PE-5700核酸扩增仪、雅培西门子i-2000的标准化操作规程(SOP)文件操作步骤严格操作。

1.4 统计学处理 采用统计学软件SPSS19.0对研究数据进行统计分析。计量资料以中位数及四分位数间距(P25,P75)表示,对观察组和对照组间各项指标的比较采用非参数秩和检验(Mann-Whitney U 检验);指标间相关性分析采用Spearman的rho非参数性相关分析;P<0.05为差异有统计学意义。

表1 乙型肝炎患者组与健康对照组一般资料

2 结 果

2.1 两组间各项指标的比较 观察组与对照组间的差异性分析表明,观察组与对照组间参数Lymph-Y 比较,差异有统计学意义(P=0.030);观察组与对照组间HBV-DNA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)比较差异有统计学意义(P<0.001),见表2。

表2 两组间各项指标的比较

2.2 Lymph-Y 各项指标的相关性分析 乙型肝炎病毒感染患者淋巴细胞参数Lymph-Y 的变化与HBV-DNA、HBsAg的变化存在一定程度的相关性,淋巴细胞参数Lymph-Y 与HBV-DNA 呈正相关(r=0.160,P=0.026);淋巴细胞参数Lymph-Y 与HBsAg 呈 正 相 关(r=0.149,P=0.037)。见表3。

表3 Lymph-Y 与4项血清学指标的相关性

3 讨 论

一般认为乙型肝炎病毒感染者外周血中淋巴细胞百分率相对增高。健康人群中,异型淋巴细胞是极为少见的,但异型淋巴细胞在病毒感染中却比较常见[3]。异型淋巴细胞的形态分析与比值对病毒感染的鉴别诊断有很大的指导意义。

已有的研究表明,异型淋巴细胞的增多与病毒感染有着很大的关系[4]。乙型肝炎病毒的感染及发病主要与患者的细胞免疫功能有关。在机体的免疫防御机制中,乙型肝炎病毒特异性细胞毒T 淋巴细胞(CTL)对清除肝细胞内感染的乙型肝炎病毒可能具有重要作用。在Sysmex XE-2100 血液分析仪的检测结果中如果有淋巴细胞百分率的增高及出现异性淋巴细胞增多的提示可以对病毒性肝炎临床的诊断提供参考。

Sysmex XE-2100全自动血液分析仪是通过半导体激光流式细胞仪原理结合细胞化学荧光染色技术对血细胞进行检测。DIFF通道根据不同类型及不同成熟度的白细胞对荧光染料着色能力的差异,检测散射光信号可以区分出淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞。横坐标是侧向散射光,反映细胞内容物复杂程度,如核和颗粒等;纵坐标是侧向荧光强度,反映细胞内DNA 和RNA 的含量[5]。本次研究发现淋巴细胞参数Lymph-Y 与异型淋巴细胞的成熟度有一定的关系,即异型淋巴细胞中的幼稚型淋巴细胞数增多时淋巴细胞参数Lymph-Y 会有明显的增高。

感染乙型肝炎病毒后,患者外周血淋巴细胞中T 细胞约占75%,B细胞占10%~15%。T 细胞受抗原刺激后,转化为体积较大的母细胞,形态不整齐,胞浆增多变宽,常出现胞浆空泡,核增大,染色质疏松。B细胞受抗原刺激后,在T 细胞的辅助下增殖分化为浆细胞,产生抗体参与体液免疫。在这过程中可表现为细胞体积增大、大小不一,胞浆变宽而多,胞浆颗粒增多,核增大染色质疏松等一列变化[6]。乙型肝炎病毒感染者淋巴细胞主要变化就是向着细胞变大、浆内颗粒增多变粗的方向发展[7]。异型淋巴细胞的增多在Sysmex XE-2100 全血细胞分析仪中的Lymph-Y 参数会有一些相应体现,所以对照组和观察组Lymph-Y 参数比较差异具有统计学意义(P=0.030)。

淋巴细胞是一种免疫细胞,当异常淋巴细胞绝对值增高时,人体的免疫力就会相对减弱,这个时期很容易感染一些疾病,早期发现淋巴细胞形态学的变化对乙型肝炎的治疗可以提供一种参考,而且淋巴细胞散点图对乙型肝炎患者体内病毒复制及疾病进程判断及药物治疗转归也是一种方便的监测指标。

本研究基于Lymph-Y 参数在初诊乙型肝炎患者与健康人群中的横断面进行分析,展现出乙型肝炎病毒感染对机体外周血白细胞参数的影响。初步显示出乙型肝炎病毒会引起反映淋巴细胞荧光强度的Lymph-Y 参数的增高。以往的观点认为,病毒与细菌感染机体,外周血细胞分析的主要区别在于淋巴细胞百分率和中性粒细胞百分率的变化。然而,新型的全自动血细胞分析仪运用流式细胞仪和核酸染色原理进行白细胞分类检测时,可提供出其量化形式的研究性参数(如:Neut-X、Neut-Y、Lymph-X、Lymph-Y 等),但这些参数在临床运用中缺乏实际的证据支持。本研究着眼于常见且易于确诊的病毒种类(乙型肝炎病毒)进行了相关探讨。发现Lymph-Y 指标比传统细胞分类百分率,如淋巴细胞百分率,变化更为敏感。这与病毒侵袭机体而引发的免疫反应有一定的关系。另则,Lymph-Y 增高提示外周血异型淋巴细胞增多,这已经量化地提示出淋巴细胞形态学方面的改变,而且功能上提示机体免疫系统针对乙型肝炎病毒产生免疫反应。诚然,本研究存在一定的局限性,缺乏纵断面乙型肝炎病毒感染患者不同病情临床分期,以及治疗前后的分析;缺乏其他肝炎病毒(如丙型肝炎)的比较研究。这些将在日后的观察研究中进行补充。

综上所述,现代检验技术的发展为临床疾病的诊疗提供大量准确的信息,血细胞分析(血常规)报告已经不单单是一种细胞数量检测的项目,更应该提供给临床医生关于血细胞形态学方面的信息,往往这些形态改变的信息与疾病的发生、变化,以及疾病的治疗预后有非常重要、紧密的关联,需要检验工作者更多地去发掘这些良好的指标、参数。

[1]Ferrari C.HBV and the immune response[J].Liver Int,2015,35(Suppl 1):S121-128.

[2]史鸣树,闵建荣.乙型病毒性肝炎[M].北京:人民军医出版社,2009.

[3]黄黎.病毒感染患者的淋巴细胞及单核细胞VCS参数与异型淋巴细胞的临床特点研究[J].检验医学与临床,2014,11(1):81-83.

[4]丁宁,黄丽利,刘妍,等.乙肝患者HBV 特异性细胞毒T 淋巴细胞的分析[J].解放军医学杂志,2011,36(4):361-364.

[5]王晓欧,陈小剑,舒旷怡,等.Sysmex XE2100血液分析仪散点图对检测异型淋巴细胞的价值[J].检验医学,2012,27(5):379-381.

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[7]李广明.慢性HBV 病毒感染者T 淋巴细胞亚群变化的临床研究[J].中国实用医药,2013,8(29):87-88.

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