杭州地区体检人群乙型肝炎病毒标志物阴性结果分析

钟毓红，戴 宇，张松照

（浙江大学医学院附属第二医院检验科，浙江杭州310009）

乙型肝炎病毒（HBV）是一种DNA 病毒，感染HBV 将严重威胁人类健康。全球约20亿人曾感染HBV，其中3.5亿人为慢性HBV 感染者，约占全球人口的6%；我国属于HBV 高流行地区，每年有30万人死于HBV 感染引起的肝硬化和肝细胞癌［1］。酶联免疫吸附试验（ELISA）是广泛用于检测乙型肝炎病毒血清学五项标志物（HBV－M）的一项定性实验。目前多使用ELISA 法分析体检人群的HBV－M 阳性模式［2－3］，而对HBV－M 阴性模式分布特征的分析研究较粗略。为探讨HBVM 阴性体检人群的流行病学特点以及为制定HBV－M 阴性人群预防感染HBV 的措施提供科学依据，本课题组收集了本院2014年体检人群的9 143例标本，对其HBV－M 阴性模式情况进行了回顾性分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年在本院进行HBV－M 检测的体检人群，年龄18～83岁，共9 143例。其中男5 177例，年龄为（44.27±11.00）岁；女3 966 例，年龄（42.66±11.89）岁。本研究获得浙江大学医学院附属第二医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 采集空腹静脉血3mL，3 000r／min离心10min后分离血清。（1）采用酶联免疫吸附试验检测HBVM，试剂由厦门英科新创有限公司提供；（2）Architech i4000全自动化学发光免疫分析仪及其配套试剂定量检测HBsAg和HBsAb；（3）转录介导的扩增（TMA）法定性检测HBV－DNA，试剂购自美国诺华生物诊断公司PROCLEIX ULTRIO?Assay及其配套的Tigris操作平台（单人份标本检测）；（4）荧光定量PCR 仪对HBV－DNA 反应性标本进行病毒载量测定，诊断试剂为上海复星长征医学科学有限公司产品，自动荧光PCR仪为AB StepOne Plus。由持有PCR 实验室上岗证的专业人员操作。

1.2.2 判定规则 （1）ELISA 检测HBV－M 判定规则：HBVM ELISA 检测结果小于临界值（其中HBeAb检测结果大于临界值）判定标本为该项目ELISA 检测阴性；ELISA 试剂检测结果大于或等于临界值（其中HBeAb检测结果小于或等于临界值）判定标本为该项目ELISA 检测阳性。（2）HBsAg 和HBsAb定量判定规则如下，HBsAg 无反应性：＜0.05IU／mL；HBsAg反应性：≥0.05IU／mL；HBsAb无反应性：＜10 mIU／mL；HBsAb 反 应 性：≥10 mIU／mL。（3）PROCLEIX ULTRIO?Assay检测HBV－DNA 判定规则：待测标本HBVDNA S／CO 值小于临界S／CO 值1，判定HBV－DNA 呈无反应性；待测标本HBV－DNA S／CO 值大于或等于临界S／CO 值1，则判定HBV－DNA 呈反应性。（4）HBV－DNA 荧光定量判定规则：检测样本中HBV DNA≥1.0×102IU／mL 时，按实际检测结果报告；检测样本中HBV DNA ＜1.0×102IU／mL时，报告为低于定量检出限。

1.3 统计学处理 使用SPSS13.0统计软件分析，阴性率的比较使用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 体检人群年龄、性别分布情况 共有9 143例体检者参加本研究，见表1，男女比例为1.31∶1。体检人群年龄集中分布在31～＜61岁，此年龄段男女比例为1.43∶1。

表1 9 143例体检者年龄、性别分布特征

2.2 不同性别、年龄人群乙肝HBV－M 阴性的检测情况HBV－M 阴性率在18～＜31岁年龄段较高，41～＜51岁和51～＜61岁年龄段中，男、女HBV－M 阴性率比较差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 不同性别、年龄人群乙肝HBV－M 阴性的检测情况

2.3 HBV－M 阴性标本的化学发光免疫分析法和TMA 法检测 在300例HBV－M 阴性标本中，化学发光免疫分析法检测出1例低浓度HBsAg标本，4例低浓度HBsAb标本；TMA 法检测出2例HBV－DNA 反应性标本，见表3。

表3 7例HBV－M ELISA 阴性标本的HBsAg、HBsAb和HBV－DNA 反应性结果

3 讨 论

HBV－M 阴性模式是体检人群中的常见的HBV 血清学模式，一般认为此人群体内不存在HBV，与此同时机体也不具备抵抗病毒感染的自我保护能力，属于HBV 易感人群。

本文使用ELISA 检测杭州地区体检人群的HBV－M，结果显示HBV－M 阴 性 率 为24.20%，低 于 俞 小 忠 等［2］报 道 的42.17%和梁小兵等［3］报道的40.19%，提示体检人群HBV－M阴性率处于下降态势，分析原因可能与体检人群的健康意识增强，主动接种HBV 疫苗预防HBV 感染有关。本研究数据表明HBV－M 阴性人群年龄集中分布于18～＜51 岁年龄段，HBV－M 阴性率女性高于男性，由于这部分人群（尤其是女性）比较会追捧流行元素：如修足、纹身、扎耳环孔等，为HBV 提供了传播途径。此外，成人接种HBV 疫苗并非免费和强制性，多数成人的自我保护意识淡薄，此年龄段的HBV－M 阴性人群将是预防控制HBV 感染的重点和难点。

化学发光免疫分析法是一项新的定量分析方法，与ELISA 相比具有更高的灵敏度和测量范围，同时能缩短检测时间，已逐渐用于临床检测抗体和抗原［4］。本研究使用化学发光免疫分析法检测出1例HBsAg低浓度标本，4例HBsAb低浓度，提示ELISA 存在漏检HBV－M 的风险，这与王巧莲等［5］的报道相符，这要求在具体的检测过程中对此类HBV－M 阴性结果引起注意，必要时询问相应体检者的既往HBV－M 检测结果加以确认。

由于血清学检测存在窗口期长、免疫静默感染和病毒变异等问题，检测和定量HBV－DNA 在诊断和监测HBV 感染以及评估治疗反应方面发挥重要作用。Dong 等［6］使用PROCLEIX ULTRIO?Assay在178 447例无偿献血标本中检测出94例隐匿性HBV 感染（OBI）标本，2例HBV 血清学窗口期标本。本研究中300 例HBV－M 阴性标本中有2 例为HBVDNA 反应性，其中1例标本定量结果为560IU／mL。隐匿性HBV 感染是对HBV 疫苗无应答的重要因素之一，低水平的HBV 感染对HBsAg处于免疫耐受状态［7］。笔者未进一步区分这1例标本是否为OBI，将通过后续追踪检测实验加以确定。

蒋汝刚等［8］和王德全等［9］分别指出接种常规重组酵母HBV 疫苗（HBsAg亚单位疫苗），成年人全程接种乙肝疫苗后无、弱应答率分别为12.98%和25.38%。这些无、弱应答的对象仍然对HBV 敏感，很有可能成为HBV 慢性携带者，成为乙肝防控工作中的难题。接种HBV 疫苗后抗体的产生与疫苗接种因素、饮食因素、机体发育因素、不良生活习惯和遗传因素密切相关。接种乙肝疫苗后无或弱应答可能与人类白细胞抗原（HLA）有关，其中HLAⅡ类基因DRB1 和DRB2 与HBV疫苗接种后HBsAb反应性有关［10］。HBV 疫苗无应答者体内具有针对HBV 感染的细胞免疫反应，能保护其抵抗HBV 的侵袭。对此，本课题组下一步将从细胞和分子水平研究HBVM 阴性体检人群中体液免疫和细胞免疫对HBV 疫苗所起的作用。

目前人类尚无法彻底治愈HBV 感染，一般建议是对HBV 疫苗无应答或低应答且非HBV 感染者进行1次或数次加强免疫。而此类人群再次接种后应答状况和抗体的持续时间仍是难题。第三代HBV 疫苗Sci－B－VacTM（除小S抗原外，含有前S1和前S2抗原）通过诱导机体产生强有力的细胞和体液免疫，使对常规HBV 疫苗无或弱反应的健康个体产生了保护性HBsAb［11］。与传统的肌内接种HBV 疫苗相比，皮内接种HBV 疫苗能更好地诱导对常规疫苗无反应的机体产生免疫应答［12］。这些措施或许能成为HBV－M 阴性人群对常规HBV 疫苗无应答时的一种选择。

综上所述，HBV－M 阴性人群属于HBV 的易感人群，建议对ELISA HBV－M 阴性的标本进行HBsAg、HBsAb和HBVDNA 定量，以确定是否存在HBV 感染；若无感染，对未接种HBV 疫苗者，及时注射HBV 疫苗；而对HBV 疫苗无（弱）应答者，应加强健康教育，改变不良习惯，通过增加接种剂量、接种时加入佐剂、进行皮内接种或使用新型HBV 疫苗等有效措施，提高对HBV 疫苗的应答率，从而防止HBV－M 阴性人群感染HBV。

［1］Lu FM，Li T，Liu S，et al.Epidemiology and prevention of hepatitis B virus infection in China［J］.J Viral Hepat，2010，17（Suppl 1）：4－9.

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［3］梁小兵.珠海市健康体检人群乙型肝炎病毒感染分析［J］.实用预防医学，2008，15（3）：724－725.

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［5］王巧莲.化学发光法与ELISA 法检测乙肝病毒血清标志物结果比较［J］.包头医学院学报，2006，22（1）：82－84.

［6］Dong J，Wu Y，Zhu H，et al.A pilot study on screening blood donors with individual－donation nucleic acid testing in China［J］.Blood Transfus，2014，12（2）：172－179.

［7］程东燕，贾宇.乙肝疫苗成人免疫无／低应答研究进展［J］.中国公共卫生，2010，26（5）：649－650.

［8］蒋汝刚，付翔，周静，等.成年人接种乙肝疫苗后无（弱）应答状况及其影响因素分析［J］.中华疾病控制杂志，2011，15（3）：210－212.

［9］王德全，陈思东，周卫平，等.乙肝疫苗接种后无（弱）应答状况及影响因素［J］.中国公共卫生，2006，22（6）：674－675.

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