快速检测在成人呼吸道病毒及非典型病原体检测中的应用效果

刘凤霞

[摘要] 目的 探讨快速检测方法在成人呼吸道病毒及非典型病原体检测中的应用。 方法 选择成人呼吸道感染患者500例为研究对象，鼻咽部分泌物中流感病毒A、B抗原采用胶体金免疫层析法检测，肺炎支原体抗体采用快速培养法检测，同时采用间接免疫荧光法检测血清常见呼吸道病原体IgM抗体。 结果 流感病毒A：快速检测阳性率3.6%，血清学检测阳性率9.2%（P<0.01）；阳性似然比：6.3，阴性似然比：0.9。流感病毒B：快速检测阳性率0.8%，血清学检测阳性率7.0%（P<0.01）；阳性似然比：43.0；阴性似然比：0.9。支原体：快速检测阳性率20.2%，血清学检测阳性率12.6%（P<0.01）；阳性似然比：1.7；阴性似然比：0.8。 结论 成人呼吸道病毒及非典型病原体快速检测方法具有快速、简便、结果快速等优点，但是其灵敏度相对较低。在临床工作中可将快速检测方法作为血清学检查的辅助检查，指导临床诊断和治疗。

[关键词] 呼吸道病毒；非典型病原体；胶体金免疫层析法；快速培养法；间接免疫荧光法

[中图分类号] R56；R446.5 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）22-0113-03

Application effect of rapid detection in diagnosis of adult respiratory viruses and atypical pathogens

LIU Fengxia

Department of Laboratory， Juye County Hospital of Traditional Chinese Medicine in Shandong Province， Juye 274900， China

[Abstract] Objective To discuss the effect of rapid detection in diagnosis of adult respiratory viruses and atypical pathogens. Methods A total of 500 cases with adult respiratory infection were selected as research subjects. Colloidal gold immunochromatographic assay was used to detect nasopharyngeal secretions influenza virus A， B antigen. Rapid culture was used to detect Mycoplasma pneumoniae antigen. At the same time， indirect immunofluorescence was used to detect serum IgM of common respiratory pathogens. Results Influenza virus A： the positive rate of rapid detection was 3.6%， serology detection was 9.2%（P<0.01）； The positive likelihood ratio was 6.3， and the negative likelihood ratio was 0.9. Influenza virus B： the positive rate of rapid detection was 0.8%， serology detection was 7.0%（P<0.01）； the positive likelihood ratio was 43.0， and the negative likelihood ratio was 0.9. Mycoplasma： the positive rate of rapid detection was 20.2%， serology detection was 12.6%（P<0.01）； The positive likelihood ratio was 1.7， and the negative likelihood ratio was 0.8. Conclusion Rapid detection in adult respiratory viruses and atypical pathogens is rapid， simple， fast results， but with low sensitivity. In clinical work， rapid detection methods can be used as an auxiliary examination serology to guide clinical diagnosis and treatment.

[Key words] Respiratory viruses； Atypical pathogens； Gold immunochromatographic assay； Rapid culture； Indirect immunofluorescence

呼吸道感染是呼吸内科的常见病，目前临床上主要的病原学检查是血清学抗体检查，相对来说，检查结果不够快速简便。随着对呼吸道病毒及非典型病原体病原学的研究，对鼻咽部分泌物病原学的检验方法越来越受到临床重视[1，2]。本研究以血清抗体学检查为参照，分析胶体金免疫层析法检查鼻咽部分泌物流感病毒及快速培养法检测鼻咽部分泌物肺炎支原体抗原在成人呼吸道病毒、非典型病原体检测中的应用，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2013年1月～2014年12月在我院呼吸内科治疗的500例呼吸道感染患者为研究对象。其中男280例，女220例，年龄18～83岁，平均（61.4±24.7）岁。纳入标准[3]：急性支气管炎、肺炎、支气管扩张合并感染、支气管哮喘急性发作、慢性阻塞性肺疾病急性加重，肺间质肺病合并感染患者及发热待查患者。排除耳鼻喉感染患者。其中急性支气管炎131例，肺炎144例，支气管扩张合并感染82例，支气管哮喘急性发作61例，慢性阻塞性肺疾病急性加重48例，肺间质肺病合并感染19例，发热待查15例。

1.2 检测方法

试剂：流感病毒A检测试剂盒，流感病毒B检测试剂盒，支原体培养基，呼吸道感染病原IgM抗体检测试剂盒。

检测方法：患者入院后采集鼻或咽部分泌物，鼻部分泌物或咽部分泌物的采集根据患者的意愿选择。咽拭子采集：患者漱口，压舌板压住舌根，将2支无菌拭子自口腔插入咽喉擦拭扁桃体隐窝及咽喉壁；鼻拭子：将2支无菌拭子插入鼻腔1～2 cm，转动，并向内部推送，至鼻甲处，贴鼻腔内壁扭转拭子多次后取出。2支拭子分别用于检测流感病毒及支原体抗原培养。胶体金免疫层析法检测流感病毒，分别向流感病毒A和流感病毒B检测试纸卡中加含有鼻或咽分泌物裂解液4滴，加样后15 min观察结果，阳性为检测区和质控区均出现红线，阴性为仅质控区出现红线。支原体培养：将培养瓶放入37℃恒温培养箱汇总，培养24～48 h观察结果。培养基由红色变为绿色或浅黄色，但仍然透明则有支原体生长；颜色未变或变得不清亮则为阴性；培养基浑浊，有絮状、片状物则为无效。血清学检查：入院后24 h内采集静脉血3 mL，离心后取血清，采用呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒进行检测。所有操作严格按照说明书进行。阳性为观察道细胞质、细胞核或细胞膜出现苹果绿色荧光，阴性为无荧光或细胞呈红色。

1.3 研究方法

本研究以血清学检查结果为参照，分别比较流感病毒A、流感病毒B、支原体快速培养快速检测方法与血清学检查结果的阳性似然比、阴性似然比、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值。灵敏度：即患者中得出阳性检测的样本占患者总数的百分比，即A/A+C；特异度：即健康人中得出阴性检测的样本占健康人总数的百分比，即D/B+D；阳性预测值：即得出阳性检测的样本总数中，患者样本占阳性检测样本总数的百分比，即A/A+B；阴性预测值：即得出阴性检测的样本总数中，正常人样本占阴性检测样本总数的百分比，即D/C+D；阳性似然比：灵敏度/（1-特异性）；阴性似然比：（1-灵敏度）/特异度。当阳性似然比>10 或阴性似然比<0.1时，诊断或排除某种疾病的可能性显著增加[3]。

1.4 统计学方法

采用SPSS13.0统计学软件对数据进行分析，阳性率比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 流感病毒A两种检查方法结果比较

快速检测阳性率3.6%（18/500），血清学检测阳性率9.2%（46/500）（χ2=15.68，P<0.01）。灵敏度15.2%（7/46），特异度97.6%（443/454），阳性预测值38.9%（7/18），阴性预测值91.9%（443/482），阳性似然比：0.152/（1-0.976）=6.3，阴性似然比：（1-0.152）/0.976=0.9。见表1。

表1 流感病毒A两种检查方法结果比较

2.2 流感病毒B两种检查方法结果比较

快速检测阳性率0.8%（4/500），血清学检测阳性率7.0%（35/500）（χ2=29.12，P<0.01）。灵敏度8.6%（3/35），特异度99.8%（464/465），阳性预测值75.0%（3/4），阴性预测值93.5%（464/496），阳性似然比：0.086/（1-0.998）=43.0，阴性似然比：（1-0.086）/0.998=0.9。见表2。

表2 流感病毒B两种检查方法结果比较

2.3支原体两种检测方法结果比较

快速检测阳性率20.2%（101/500），血清学检测阳性率12.6%（63/500）（χ2=49.19，P<0.01）。灵敏度31.7%（20/63），特异度81.5%（356/437），阳性预测值19.8%（20/101），阴性预测值89.2%（356/399），阳性似然比：0.317/（1-0.815）=1.7，阴性似然比：（1-0.317）/0.815=0.8。见表3。

表3 支原体两种检测方法结果比较

3讨论

呼吸道感染可同时存在多种病毒及非典型病原体感染，病原学快速检验对及时诊断及选择合理治疗方案至关重要。呼吸道病毒感染及非典型病原体感染所导致的临床症状和体征缺乏特异性，盲目使用抗生素治疗，一方面可能取不到良好的临床疗效，一方面也会造成抗生素的滥用。因此在临床诊断中，能够尽早快速检测抗原，对诊断、治疗以及疫情报告均具有重要的意义。

胶体金技术创于20世纪70年代，是以胶体金作为示踪剂标志物或显色剂，应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术[4]。胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金[5，6]。由于胶体金具有肉眼可观测的红色，所以既可用于免疫电镜、光镜检测，也可作为指示物结合固相载体用于体外免疫检测抗原或抗体，特别是试纸条的发展，使操作更加方便快捷[7，8]。试纸条技术的特点是快速、简便，全部检测过程在20 min内，不需要其他任何仪器设备，操作也极其简单，无需专业人员，携带方便，能随时随地进行。其多用于血液检查，也可用于尿检、唾液检查、分泌物检测等，适合各种检查[9]；缺点是只能定性检查，不能定量检查，另外灵敏度相对较低[10]。

在本次研究中，流感病毒A检测结果显示，胶体金层析法与血清学比较，特异度较高，而灵敏度较低。流感病毒B检测结果显示，胶体金层析法特异度较高，阳性预测值和阴性预测值均较高，而阳性似然比显著高于1，阴性似然比超过0.1，说明在流感病毒B的检测中阳性检测结果说明诊断的可能性较高。肺炎支原体快速培养法是利用肺炎支原体的代谢产物使培养基液体中的指示剂颜色发生改变来判断其生长，标本中的其他支原体和细菌则被培养基中的青霉素和醋酸陀抑制[11-14]。此法操作简便、快速、无痛苦。在本次研究中，支原体抗原快速培养结果阳性率高于血清学检测结果，提示假阳性率相对较高，灵敏度31.7%，特异度81.5%，阳性预测值19.8%，阴性预测值89.2%，阳性似然比1.7，阴性似然比0.8。阳性似然比低于10，阴性似然比高于0.1，说明在支原体病原检测中快速培养法诊断或排除支原体感染的可能性相对较低。

综上所述，成人呼吸道病毒及非典型病原体快速检测方法具有快速、简便、结果快速等优点，但是其灵敏度相对较低。在临床工作中，可将快速检测方法作为血清学检查的辅助检查，指导临床的诊断和治疗，并且随着技术的发展，快速检测方法的灵敏度也会有所提高。

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（收稿日期：2015-04-15）