咳喘膏穴位贴敷对哮喘豚鼠氨茶碱药代动力学影响的研究*

徐　昕，沈　钧，熊湘明，张秀丽，郭玉莉（.天津市公安医院，天津30004；.天津医科大学，天津300070）

·中药研究·

咳喘膏穴位贴敷对哮喘豚鼠氨茶碱药代动力学影响的研究*

徐昕1，沈钧2，熊湘明1，张秀丽1，郭玉莉1
（1.天津市公安医院，天津300042；2.天津医科大学，天津300070）

［目的］研究中药咳喘膏穴位贴敷对哮喘豚鼠氨茶碱药代动力学的影响，探讨其可能机制。［方法］将30只豚鼠随机分为5组，分别为正常组、模型组、咳喘膏高、中、低剂量组，每组6只。采用卵蛋白致敏-雾化激发方法复制豚鼠支气管哮喘模型。豚鼠均予氨茶碱灌胃，咳喘膏高、中、低剂量组予咳喘膏穴位贴敷，按设定时点经豚鼠内眦取血，高效液相色谱法检测氨茶碱血药浓度，DAS2.0药代动力学软件计算氨茶碱药代动力学参数。［结果］咳喘膏高剂量组与正常组、模型组及低剂量组比较，氨茶碱半衰期（T1/）2延长（P=0.007，P=0.022，P=0.028）、消除速率常数（Ke）减低（P= 0.005，P=0.012，P=0.015），差异有统计学意义；咳喘膏中剂量组与正常组比较，氨茶碱T1/2延长（P=0.029）、Ke减低（P= 0.047），差异有统计学意义。［结论］咳喘膏穴位贴敷可影响氨茶碱药代动力学，使氨茶碱T1/2延长，Ke减低。可以通过调控咳喘膏药物颗粒直径的方法，减小咳喘膏穴位贴敷对氨茶碱药代动力学影响。

咳喘膏；哮喘；豚鼠；氨茶碱；药代动力学

DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2015.07.12

支气管哮喘是临床常见病，具有患病率高、病程长、反复发作等特点。本院运用咳喘膏穴位贴敷治疗支气管哮喘已有40余年历史，临床观察总有效率达90%以上。临床咳喘膏穴位贴敷与氨茶碱联合用药的情况经常出现［1］，研究表明年龄、性别及多种药物可以影响氨茶碱药代动力学［2-8］，并有研究确切表明［9-10］，中药复方对氨茶碱药代动力学存在影响。本研究探讨咳喘膏穴位贴敷对哮喘豚鼠氨茶碱药代动力学的影响，为咳喘膏安全用药提供实验依据。

1　材料

1.1实验动物清洁级白色雄性豚鼠体质量（300±20）g，由中国医学科学院放射医学研究所动物中心提供，动物生产许可证号SCXK（津）2005-0001。

1.2药品及试剂咳喘膏：主要成分为白芥子、延胡索、地龙、半夏、细辛、麝香等。天津市公安医院制剂室提供（制剂号：TJZB-Z2007010278）；鸡卵清白蛋白，美国Sigma公司；氨茶碱注射液，天津金耀氨基酸有限公司；氨茶碱标准品、内标咖啡因标准品，中国药品生物制品检定所。

1.3仪器Agilent1100高效液相色谱系统，美国Agilent公司；不锈钢柱，HypersilODCC18柱（4.6mm× 250mm×5μm）。

2　方法

2.1分组与模型制备将雄性豚鼠30只，按随机数字表法随机分为5组：正常组、模型组、咳喘膏低剂量组、咳喘膏中剂量组、咳喘膏高剂量组。每组6只。参照相关文献［11］方法，复制支气管哮喘豚鼠模型。实验第1天，除正常组外分别腹腔注射10%卵蛋白生理盐水1mL致敏，第8天重复注射1次加强致敏。第15天起予1%卵蛋白生理盐水10mL雾化吸入，激发哮喘，每日1次，连续7 d。正常组给予等体积生理盐水腹腔注射及雾化吸入。造模过程中豚鼠均出现呼吸困难，呼吸节律改变、进食量减少、活动能力下降、体质量增长缓慢的表现，符合哮喘临床症状特征，证明动物模型复制成功。

2.2咳喘膏制备经检索文献，未发现中药外用药划分高、中、低剂量组方法的相关报道。笔者尝试将天津市公安医院制剂室提供的咳喘膏生药粉等分3份，用研钵充分研细过筛，分别制成80、100、120目（筛孔直径分别为0.180、0.150、0.125mm）的颗粒，代表低、中、高、剂量。各组药粉分别与蒸馏水按1∶1（W∶V）混合均匀，制成10mm×10mm×10mm的咳喘膏备用，每剂咳喘膏含咳喘膏生药粉1g。

2.3给药与取材末次雾化激发结束后24 h，豚鼠背部备皮，参照文献［12］选取豚鼠肺俞、定喘穴，咳喘膏低、中、高剂量组以相应剂量咳喘膏穴位贴敷，正常组及模型组生理盐水纱布穴位贴敷，根据本课题组前期研究结果［13］，贴敷时间确定为180min。各组豚鼠均予氨茶碱40mg/kg灌胃。按参考文献［14］设定标本留取时点，各组豚鼠分别于灌胃完毕后15、30、60、120、180、240、360、480、600 min经内眦取血，每次取血0.5 mL，离心后-80℃冰箱保存备测。

2.4氨茶碱血药浓度测定本研究采用高效液相色谱法测定豚鼠血清中氨茶碱血药浓度。按参考文献［15］方法，制备氨茶碱标准曲线，进行样品预处理及氨茶碱血药浓度测定。

2.5药代动力学参数计算采用安徽省药物临床评价中心研发的DAS（Drug And Statistics）2.0药代动力学软件拟合氨茶碱药代动力学参数。

2.6统计学方法采用SPSS18.0软件进行统计分析，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

3　结果

3.1氨茶碱血药浓度各组豚鼠在设定时点氨茶碱血药浓度均数，见表1。

3.2咳喘膏对氨茶碱药代动力学参数的影响经DAS2.0药代动力学软件分析，氨茶碱在豚鼠体内代谢符合一室模型，经软件拟合药代动力学参数，并经SPSS18.0统计软件进行方差分析，各组氨茶碱药代动力学参数［半衰期（T1/2）、消除速率常数（Ke）、表观分布容积（Vd）、清除率（CL）、药时曲线下面积（AUC）］比较见表2。

结果显示，咳喘膏高剂量组与正常组、模型组及低剂量组比较，氨茶碱T1/2延长（P=0.007，P= 0.022，P=0.028）、Ke减低（P=0.005，P=0.012，P= 0.015），差异有统计学意义；咳喘膏中剂量组与正常组比较，氨茶碱T1/2延长（P=0.029）、Ke减低（P= 0.047），差异有统计学意义。咳喘膏低剂量组与正常组和模型组比较，各药代动力学参数差异均无统计学意义。

4　讨论

中药穴位贴敷治疗哮喘早在清代《张氏医通》即有记载“夏日三伏中，用白芥子涂法，往往获效。方用白芥子净末一两，延胡一两，甘遂、细辛各半两，共为细末，入麝香半钱。杵匀姜汁调涂肺俞、膏肓、百劳等穴”，现作为哮喘冬病夏治的常用疗法广泛使用［16］。本院咳喘膏方中白芥子温肺豁痰利气；地龙清肺化痰定喘；细辛辛散温肺化饮；半夏燥湿化痰平喘；延胡索通行气血、麝香芳香走窜，以利药物吸收。诸药并用直捣哮喘痰饮伏肺之“夙根”起到辛散温通、化痰平喘的作用［17］。贴敷穴位中肺俞穴属膀胱经，为肺的背俞穴，可补益肺气、散寒定喘；定喘穴为经外奇穴，可通利肺气、止咳平喘。咳喘膏穴位贴敷，药物与穴位经络协同作用，可达到调节阴阳、疏通经络、祛邪扶正的疗效。

表1　豚鼠氨茶碱血药浓度（x±s）Tab.1 Theblood concentration ofam inophylline inguinea pigs（x±s）

表2　氨茶碱药代动力学参数比较（x±s）Tab.2 Com parison ofam inophylline pharmacokineticsparameters（x±s）

随着咳喘膏穴位贴敷治疗哮喘的深入开展，其用药安全性越来越受到重视。临床咳喘膏穴位贴敷经常与氨茶碱联合用药，而氨茶碱的药代动力学受诸多因素影响。本研究表明，咳喘膏穴位贴敷可使哮喘豚鼠氨茶碱T1/2延长、Ke减低，影响了氨茶碱在哮喘豚鼠体内的消除过程。根据研究结果，临床两者联合用药时，应适当延长氨茶碱的给药间隔时间，调整用药剂量，并注意监测氨茶碱血药浓度，以确保临床安全用药。同时可通过调控咳喘膏药物剂量，即调整咳喘膏药粉颗粒直径的方法，减少咳喘膏穴位贴敷对氨茶碱药代动力学的影响。

笔者推论产生上述影响的可能机制有：1）咳喘膏影响氨茶碱的分布：研究结果显示，咳喘膏有使氨茶碱表观分布容积增加的趋势，但由于本研究实验动物样本量较少差异无统计学意义。实验过程中发现，咳喘膏穴位贴敷后，哮喘豚鼠穴位局部皮肤潮红、充血、皮温相对增高，可能为咳喘膏白芥子、细辛、延胡索、麝香等辛温活血通络药物，使贴敷部位毛细血管充盈扩张、血流增速、进而影响氨茶碱的组织分布，使氨茶碱在一定时期内更多地分布于皮肤等外周组织。2）影响氨茶碱生物转化：茶碱主要经CYPlA2代谢而失活，属于肝药酶依赖性药物，其转化消除速率主要依赖于酶的活性改变而改变［18］。有研究表明延胡索、地龙、半夏、细辛等咳喘膏所含成分对肝药酶具有诱导/抑制作用［19-22］，可能影响氨茶碱的生物转化。对于其确切机制笔者将作进一步研究。

同时笔者注意到，模型组及3个治疗组AUC与正常组比较虽无统计学差异，但有增加趋势。提示哮喘疾病本身或咳喘膏穴位贴敷均可能影响口服氨茶碱的吸收程度，使进入血液循环的氨茶碱总量增加。而氨茶碱在人体内的消除存在零级动力学与一级动力学相互转化的情况，氨茶碱在体内药量过多时转为零级消除，致血药浓度持续上升，不能保持稳态血药浓度。故AUC这一参数虽仅有增加趋势，仍需提起注意，提示了咳喘膏穴位贴敷与氨茶碱联合用药治疗哮喘时，监测氨茶碱血药浓度的必要性。

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（本文编辑：高杉，滕晓东）

Effectofacupoin tapp lication of Kechuan p laster on pharm acokineticsofam inophylline in asthm aticguinea pigs

XUXin1，SHEN Jun2，XIONGXiang-ming1，ZHANGXiu-li1，GUOYu-li1
（1.Tianjin Police Hospital，Tianjin 300042，China；2.Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China）

［Objective］To investigate theeffectofacupointapplication of Kechuan plasteron pharmacokineticsof aminophylline in asthmaticguinea pigs，and to explore its possiblemechanism.［M ethods］The 30guinea pigswere assigned to 5groups random ly，respectively as thenormalgroup，model controlgroup，Kechuan plasterhigh dosegroup，medium dosegroup and low dosegroup，6guinea pigs in eachgroup.Except the normalgroup，all the other 4groupswere injected into the abdominal cavity with OVA to induce allergy reaction，then inhaled OVA forexcitation to prepare theasthmamodelgroups.Allguinea pigswere fed aminophyllinebygavage，Kechuan plasterhigh，medium and low dosegroup was treated with Kechuan plaster acupointapplication according to differentdosage.Blood was taken by inner canthus puncture，according to the set time point.Plasma concentration of aminophyllinewas detected by HPLC.DAS2.0 software wasused to calculate the pharmacokinetics parameters of aminophylline.［Results］Compared with normalgroup，model controlgroup and low dosegroup，plasmahalf-lifeofaminophyllineextended（P=0.007，P=0.022，P=0.028）and elimination rate constantdecreased（P= 0.005，P=0.012，P=0.015）in high dosegroup.Comparedwith normalgroup，plasmahalf-lifeofaminophyllineextended（P=0.029）and elimination rate constantdecreased（P=0.047）inmedium dosegroup.［Conclusion］Kechuan plasteracupointapplication can affect the pharmacokinetics of aminophylline，and it can extend the plasma half-life and decrease the elimination rate constant.The effect of Kechuan plaster could be controlled by changing the drug particles’diameter.

Kechuan plaster；asthma；guinea pig；aminophylline；pharmacokinetics

R562.2

A

1672-1519（2015）07-0428-04

天津市公安局科技基金项目（SJ2009023）。

徐昕（1973-），男，医学硕士，主治医师，主要从事中西医结合治疗心血管疾病、呼吸系统疾病的临床和科研工作。

（2015-02-03）