高效液相色谱法测定香芍甘草颗粒中α-香附酮的含量

曲林　刘文亮（1.哈尔滨商业大学，黑龙江哈尔滨 150076；.哈药集团中药二厂，黑龙江哈尔滨 150078）

高效液相色谱法测定香芍甘草颗粒中α-香附酮的含量

曲林1，2刘文亮2
（1.哈尔滨商业大学，黑龙江哈尔滨 150076；2.哈药集团中药二厂，黑龙江哈尔滨 150078）

目的：利用HPLC法检测α-香附酮在香芍甘草颗粒中的含量。方法：HPLC法。色谱柱为Agilent C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-水（77：23）；流速1.0ml/min；柱温：20℃；检测波长250nm。结果：HPLC含量测定方法平均回收率为100.34%，RSD为1.38%（n=9）。结论：本文所用方法简洁快捷，可以用于检测α-香附酮在香芍甘草颗粒中的含量。

香芍甘草颗粒 HPLC α-香附酮

香芍甘草颗粒是由炙甘草、白芍、生香附三味中草药得到的中药复方制剂，具有养血滋阴、和胃理气、舒肝止痛的功能。临床首要应用于消化科各类溃疡疾病的有效治疗。为了有效控制香芍甘草颗粒的质量，经过文献检索［1］及反复试验验证，本试验采用的HPLC方法检测α-香附酮在香芍甘草颗粒中的含量。

1　仪器与试药

1.1仪器

METTLER XS205电子天平；Agilent-HPLC1200系列，并带有其对应的工作站。

1.2试药

α-香附酮标准品（南京泽朗生物科技有限公司，纯度：HPLC &ge；98%），色谱乙腈（Concord），分析甲醇（Concord）；香芍甘草颗粒（哈药集团中药公司科研自制）。

2　实验方法与结果

2.1色谱条件与系统适应性试验

色谱柱Agilent C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-水（73：27）；流速1.0ml/min；柱温20℃；检测波长250nm；进样量10μl。

2.2溶液制备

2.2.1配制标准品溶液

精密量取α-香附酮标准品，置于50ml的量瓶中，加入适量甲醇至标线，即得1μl/ml的标准品溶液。

2.2.2配制样品溶液

将香芍甘草颗粒粉碎成细粉，取约10g，精密称定，将其加入到100ml的磨口锥形瓶中，精密量取50ml甲醇，称定，超声处理35分钟，放凉，再次称定，吸取甲醇溶液适量补充缺失的重量，振荡均匀，再用孔径为0.45μm的有机微孔滤膜过滤，即得样品溶液。

2.2.3测定法

设定自动进样器进样量为10μl，样品名称分别为α-香附酮标品、香芍甘草颗粒样品，在2.1项条件下进行检测，得到含量值。

2.3专属性试验

配制只含有甘草和白芍的溶液，按样品溶液的方法配制为阴性样品溶液，设定进样量为10μl，在2.1条件下进行检测，测定结果表明，缺样空白溶液无干扰，即此检测方法的专属性良好。

2.4线性关系考察

精密量取0.5mlα-香附酮标准品，放于50ml量瓶中，加入适量分析甲醇到容量瓶标线，制成的标准品溶液，浓度为10μl/ml。分别精密量取上述标准品溶液1、3、5、7、9、11ml置于50ml量瓶中，加入分析甲醇再次到标线，振荡均匀，制成浓度为0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.2μl/ml的标准品溶液，设定进样量为10μl，按2.1条件检测，记录峰面积分别为1578.71、4761.13、7866.44、11003.23、13978.34、17276.37。纵坐标是峰面积，横坐标为α-香附酮浓度，得到标准曲线，其回归方程为：A=7805.2C+44.243，r2=0.9998。结果表明：在0.2μl/ml ～2.2μl/ml的浓度区间内，α-香附酮浓度与其峰面积之间有着良好的线性关系。

2.5精密度试验

选用浓度为1.0μl/mlα-香附酮标准品溶液，设定进样量10μ l，6次进样，记录峰面积分别为7884.92、7864.24、7861.35、7866.41、7853.02、7860.51。测定计算，RSD值为0.13%（n=6），试验结果表明系统有良好的精密度。

2.6稳定性试验

取2.2.2项下样品溶液，分别在1、3、5、7、10、12h时间点按照2.1项下条件检测，计算含量，RSD为0.57%，由此可以判断在12h内α-香附酮在香芍甘草颗粒中的含量稳定。

2.7重复性试验

称取相同批次香芍甘草颗粒6份，精密称定，在2.1项条件下检测，检测α-香附酮的含量，其含量结果的平均数计算为5.03μl/g，RSD为0.54%，结果表明此方法有良好的重复性。

2.8加样回收试验取含量为5.03μl/g 的9份香芍甘草颗粒试样，每份取约5g，精密称定，加入10μl/mlα-香附酮对照品溶液2ml、2.5ml、3ml（含α-香附酮分别为20μl/ml、25μl/ml、30μl/ml），按2.2.3项下操作方法，在2.1条件下进行检测。测定记录结果见表1。

表1　α-香附酮加样回收率记录表（n=9）

3　讨论

通过实验，本文所建立α-香附酮含量检测方法在检测浓度区间内有良好的线性关系，其重复性、精密度、稳定性试验结果均符合要求，操作快速简易，可用于本品中α-香附酮的测定，可以用来控制香芍甘草颗粒质量。

本文用UV法在200nm-400nm对α-香附酮进行了检测，其结果是在250nm处α-香附酮的吸收值最大，所以设定250nm为选择的检测波长。

［1］许世辉.高效液相色谱法测定妇科调经片中α-香附酮的含量［J］.海峡药学，2010，（9）：62-63.