UPLC法测定痤疮凝胶中黄芩苷和蒙花苷的含量*

范丽丽，李　楠，顾　星，朱　蕴，刘志东，夏庆梅，郭丽丽，王爱潮（.天津中医药大学，天津市现代中药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地，天津30093；.天津中医药大学，天津30093）

UPLC法测定痤疮凝胶中黄芩苷和蒙花苷的含量*

范丽丽1，李楠1，顾星1，朱蕴1，刘志东1，夏庆梅2，郭丽丽1，王爱潮1
（1.天津中医药大学，天津市现代中药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地，天津300193；2.天津中医药大学，天津300193）

［目的］建立痤疮凝胶中黄芩苷、蒙花苷含量测定方法。［方法］采用Acquity BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）色谱柱；以乙腈-0.1%甲酸（20∶80）为流动相，流速0.3 mL/min，检测波长320 nm，柱温35℃。［结果］黄芩苷和蒙花苷分别在3.767～75.34 μg和0.840 96～33.638 4 μg范围内线性关系良好，平均回收率分别为99.04%和97.42%（n=6）；RSD分别为1.97%和1.81%。［结论］该方法简便、准确、重现性良好，为痤疮凝胶的质量控制提供了理论依据。

痤疮凝胶；黄芩苷；蒙花苷；超高效液相色谱法；含量测定

DOI：10.11656/j.issn.1673-9043.2015.01.12

痤疮是一种好发于青春期的毛囊皮脂腺的慢性炎症性皮肤病，治疗不当容易遗留瘢痕和色素沉着等损容性的皮肤损害，发病率较高［1-4］。痤疮凝胶是天津中医药大学制剂中心研制的纯中药外用制剂，由黄芩、野菊花、丹参、白花蛇舌草、红花、白薇、甘草等7味中药组成，具有清热凉血、活血消痈、散瘀止痛等功效［5-13］。实验已证明［14］，痤疮凝胶对兔耳痤疮模型有确切治疗效果，且临床用于寻常痤疮的治疗疗效显著。为了控制该制剂质量，保证临床用药的安全有效，本研究采用超高效液相色谱法（UPLC法）对处方里黄芩中的黄芩苷和野菊花中的蒙花苷进行了含量测定，为该方的进一步开发利用奠定基础。

1　仪器与试药

超高效液相色谱仪（Waters，Acquity，TUV Detector，Sample Manager-FTN，Quaternary Solvent Manager美国），台式通用冷冻离心机（THERMO FISHER美国），SZCL-4B磁力搅拌（巩义市予华仪器有限责任公司），C3860A超声清洗器（天津奥特赛恩斯仪器有限公司），AX205电子天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）。

黄芩苷（批号110715-201117）、蒙花苷（批号111528-201308），均购于中国药品生物制品检定所，痤疮凝胶及阴性样品均为课题组自制，甲醇、乙腈、甲酸均为色谱纯，水为超纯水。

2　方法与结果

2.1色谱条件Waters ACQUITYUPLC BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），乙腈-0.1%甲酸水（20∶80）为流动相；检测波长320 nm，流速0.3 mL/min，柱温35℃，进样量1 μL。理论板数按黄芩苷峰计算应不低于8 000。

2.2对照品溶液的制备取黄芩苷、蒙花苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含8.0 μg黄芩苷和1.5 μg蒙花苷的混合对照品溶液。

2.3供试品溶液及阴性样品溶液的制备精密称取本品1 g，至50 mL量瓶中，加甲醇适量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）10 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，14 000 r/min离心10 min，取上清液用去离子水稀释5倍，过0.22 μm滤膜，取续滤液，即得供试品溶液。按处方比例及制备工艺制备缺黄芩和野菊花的阴性样品，称取相应量，如上处理，得阴性样品溶液。

2.4专属性实验取黄芩苷、蒙花苷的混合对照品、痤疮凝胶供试品和阴性样品溶液，进样，结果阴性样品无干扰，证明此色谱条件可行。见图1。

2.5标准曲线制备精密称取黄芩苷、蒙花苷对照品适量，分别配成含黄芩苷0.935 3、2.338 4、4.676 7、9.353 4、14.030 1、18.706 8 μg/mL和蒙花苷0.346 2、0.865 4、1.730 8、3.461 6、5.192 5、6.923 3 μg/mL的标准品溶液。按色谱条件进样1 μL，测定峰面积，以峰面积（Y）对浓度（X）进行线性回归，黄芩苷回归方程为：Y=8 755X-2 217，r2=0.999；蒙花苷回归方程为：Y=7 681X-1 537，r2=0.998。结果表明黄芩苷和蒙花苷分别在3.767～75.34 μg和0.840 96～33.638 4 μg范围内线性关系良好。

2.6精密度实验取同一批号样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下方法测定峰面积，连续进样6次，测得黄芩苷和蒙花苷峰面积值的RSD分别为0.47%和0.89%，精密度符合要求。

2.7重复性实验取同一批号（140726）样品6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下方法测定分析，结果6份样品中黄芩苷平均含量为1.99mg/g，RSD=1.54%；蒙花苷平均含量为0.37mg/g，RSD=1.34%。结果表明，重复性符合要求。

2.8稳定性实验取同一供试品溶液分别在0、2、4、6、8、10、12 h进样，依法进行含量测定，结果黄芩苷和蒙花苷峰面积的RSD分别为0.73%和1.19%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.9加样回收率实验取同一批号（140726）样品6份，各0.5 g，精密称定，精密加入每1 mL含黄芩苷334.561 2 μg和蒙花苷65.809 2 μg的甲醇溶液3.0 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定样品中黄芩苷和蒙花苷的含量，计算回收率。结果黄芩苷和蒙花苷的平均回收率分别为99.04%和97.42%（n=6）；RSD分别为1.97%和1.81%。结果见表1。

图1　痤疮凝胶中黄芩苷、蒙花苷的UPLC色谱图

表1　回收率实验测定结果

2.10样品测定取3批样品（批号140724、140725、140726），按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别测定黄芩苷和蒙花苷的峰面积，结果黄芩苷的含量分别为1.901 0、1.909 5、1.878 4 mg/g；蒙花苷的含量分别为0.364 0、0.367 4、0.361 1 mg/g。

3　讨论

3.1色谱条件根据黄芩苷和蒙花苷在200～600nm的紫外全波长扫描结果，考察了波长280、320、328和334 nm［15-17］时两种成分的含量变化，最终选择320 nm为检测波长，此时两种成分含量均较高，且与杂峰分离较好。

考察了不同流动相条件如甲醇-0.05%磷酸水，乙腈-0.1%磷酸水及乙腈-0.1%甲酸水等［18-21］，结果表明乙腈-0.1%甲酸水的峰形较好。又考察了此条件下流动相的比例：乙腈-0.1%甲酸水（15∶85）、（18∶82）、（19∶81）、（20∶80）等，结果乙腈-0.1%甲酸水（20∶80）时黄芩苷和蒙花苷出峰时间适中，分离度高，峰形较好，与杂质峰基线分离，且阴性样品无干扰。

3.2提取溶剂实验中采用4种溶剂甲醇、纯乙醇、75%乙醇、50%乙醇对供试品进行超声提取，结果发现50%乙醇、75%乙醇超声提取完后过滤膜时很费劲，无法过滤，并且蒙花苷溶解性不好，在甲醇中的溶解度最高，最终选择甲醇为提取溶剂。

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Determination of Baicalin and Linarin in Cuochuang Gel by UPLC

FAN Li-li1，LI Nan1，GU Xing1，ZHU Yun1，LIU Zhi-dong1，XIA Qing-mei2，GUO Li-li1，WANG Ai-Chao1
（1.Tianjin Modern Chinese Medicine Key Laboratory-Province and Ministry Co-established State Key Laboratory Cultivation Base，Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China；2.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China）

［Objective］To establish a UPLC method for content determination of Baicalin and Linarin in Cuochuang Gel.［Methods］The column was Acquity BEH C18（2.1 mm×50 mm，1.7 μm）.The mobile phase consisted of a mixture acetonitrile-1%formic acid（20∶80）.The flow rate was 0.3 mL/min.The detection wavelength was 320 nm under 35℃.［Results］The calibration curves for baicalin and Linarin were linear in the ranges of 3.767～75.34 μg and 0.840 96～33.638 4 μg，and the average recovery was 99.04%and 97.42%（n=6），with RSD of 1.97%and 1.81%，respectively.［Conclusion］This method was simple，precise and repeatable，which can be used for quality control of Cuochuang Gel.

Cuochuang Gel；baicalin；Linarin；UPLC；content determination

R285.5

A

1673－9043（2015）01－0042-03

教育部新世纪优秀人才支持计划（NCET-12-1068）。

范丽丽（1990-），女，硕士研究生，主要从事中药制剂方向的研究。

刘志东，E-mail：lonerliuzd@163.com。

（2014-11-07）