替米考星缓释颗粒对猪传染性胸膜肺炎病的临床疗效研究

2015-08-15叶盛恒

中兽医学杂志 2015年5期

叶盛恒

（广州市白云区人和镇畜牧兽医站，广东广州510470）

1 材料与方法

1.1 试验动物及基础日粮猪传染性胸膜肺炎病猪150头，体重25～30kg，70日龄，未使用过胸膜肺炎放线杆菌疫苗，公母兼有，选自广东省广州市白云区猪场。经鼻黏膜采样分离细菌，并从前腔静脉采血3mL分离血清，采用ELISA法进行血清学确诊。胸膜肺炎放线杆菌（APP）及血清学检测呈阳性方可参与试验分组。按常规饲养，自由饮水和采食，饲料参照家畜营养需求标准配制的不含任何抗菌药物的仔猪全价日粮。

1.2 供试药品和菌种供试药物：替米考星缓释颗粒，含量10%，批号201201101，由华南农业大学兽医药理研究室提供，试验前由广东省兽药饲料监察所检测含量合格。

对照药物：替米考星预混剂，市售，有正规厂家和批号、含量信息。

猪胸膜肺炎放线杆菌（APP259）购自中国兽医药品监察所。血清1型，生物Ⅰ型。冻干保存，－20℃保存备用。

猪胸膜肺炎放线杆菌（APP260）购自中国兽医药品监察所。血清2型，生物Ⅰ型。冻干保存，－20℃保存备用。

1.3 试验试剂 MH肉汤培养基、MH琼脂培养基均购自环凯生物科技有限公司。

脱纤维绵羊血购自广州蕊特生物技术有限公司。

新生小牛血清、辅酶Ⅰ（NADⅠ）均购自普博欣生物技术有限公司。

胰蛋白大豆琼脂培养基（TSA）、胰蛋白大豆肉汤培养基（TSB） (OXIDE)。

上述培养基在使用前，121℃高压20分钟，冷却至50～60°C后，加入新生牛血清（或者脱纤维绵羊血）和NADⅠ，使其终浓度分别为8%和100μg/mL。

血细胞分析仪溶血剂、血细胞分析仪清洗液DH-520、血细胞分析仪稀释液DH-640均购自广州市贝立医学科技有限公司。

猪传染性胸膜肺炎ApxⅣ-ELISA抗体检测试剂盒购自武汉科前动物生物制品有限责任公司。

1.4 病原菌的分离、培养及鉴定

1.4.1 病原菌的分离与培养无菌取肺脏、气管、脾脏等病料组织，经分离纯化及生化PCR鉴定后，接种于含终浓度为8%的脱纤维绵羊血和100μg/mLNADⅠ的TSA平板上备用。

1.4.2 病原菌的鉴定剖检病死猪，取肺脏、肝脏涂TSA培养基进行病原菌分离并采用ELISA法进行血清学鉴定。

1.5 试验猪分组及给药方案从2013年1月10日开始安排实验事宜。在广州人和横沥、广东佛山、肇庆广宁和广州从化太平等地区共4个猪场（均为1～3万头规模化猪场）于2013/1/10～2013/3/20期间共收集了4批疑似猪传染性胸膜肺炎的自然感染病例猪190头，长白、大白、杜洛克等品种及公母均有，大多数猪在40～90日龄间。经以下猪传染性胸膜肺炎诊断方法进行确诊后，选择150头病猪为试验用猪，所有被选的试验猪的发病程度基本一致，即在确诊后表现为轻至中度临床症状，已发病约为2～4天。另选相同日龄或体重的健康猪30头作为健康对照组。

所有试验猪均分成5组（保证每批试验均包含有各个试验组），每组30头：

第1组：供试药物高剂量组（替米考星缓释颗粒2倍推荐剂量）；

第2组：供试药物中剂量组（替米考星缓释颗粒推荐剂量）；

第3组：供试药物低剂量组（替米考星缓释颗粒1/2倍推荐剂量）；

第4组：对照药物组（替米考星预混剂推荐剂量）；

第5组：发病不给药对照组（感染对照组）。

1.6 传染性胸膜肺炎病猪的确诊接种前和接种14天后，从前腔静脉采血3mL，分离血清，采用ELISA法进行胸膜肺炎放线杆菌ApxIV毒素抗体血清学检测。

在酶标仪上测各孔OD630nm值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630nm值大于或等于0.6，阴性对照孔平均OD630nm值小于0.2。根据公式：S：样品孔OD630nm值?P:阳性对照孔平均OD630nm值。如果S≥P×0.29，判为阳性，S＜P×0.29判为阴性。

1.7 实验性治疗经过确诊后，立即选择猪传染性胸膜肺炎病猪共150头（均表现有典型症状），按表1分别对各组猪给药。停药后对猪的临床情况进行跟踪观察，观察期持续15天。

2 数据处理

试验数据用EXCEL软件进行处理后，采用SPSS17.0统计软件进行 Means、χ2检验及One-Way ANOVA分析，然后横向进行Duncan氏法和LSD法多重比较。试验数据的结果以平均数±标准差表示（P>0.05表示差异不显著；P<0.05表示差异显著）。

3 结果与分析

3.1 传染性胸膜肺炎病猪指标

3.1.1 临床症状传染性胸膜肺炎病猪呼吸有湿罗音、精神沉郁、喜静、喜欢呆在暗角落、体温升高，部分猪出现短暂性呕吐。接种后4～6h，猪直肠体温达到最高值、呼吸困难，腹式呼吸严重、不吃料、毛发竖立、成犬坐状等临床症状。感染组感染12～24 h，精神极度沉郁、口吐白沫、呼吸困难，全身浅表部位发绀。病程发展严重，最后死亡时口鼻流血样泡沫状液体。

3.1.2 病理剖检从对分离菌的生化及PCR鉴定可以得出，从病死猪的肺部分离的细菌为攻毒菌株，再根据猪的发病临床症状可以初步判定试验猪感染了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌。

3.1.3 血清学诊断根据试剂盒结果判定标准：样品孔OD630nm值大于等于0.29倍阳性孔的OD630nm值，可判为阳性表7中突出显示为黄色的样品孔的猪传染性胸膜肺炎ApxⅣ-ELISA抗体检测呈阳性。

3.2 治疗试验疗效评价指标

3.2.1 X光诊断经X光检查确诊，给药前猪肺部出现明显的纤维素性渗出特征。与治疗猪肺部X光对照，感染猪的左侧肺脏出现了白色高密度物质，这表明感染组的左侧肺部出现了实质性病变。

3.2.2 病例剖检从切片中可以看出，感染死亡猪肺泡内、各级支气管内出现了红细胞，充血。炎性细胞渗出，有的甚至填满整个肺泡腔、肺泡间隔、各级支气管。

3.2.3 治疗结果本试验治疗效果统计显示，替米考星缓释颗粒高、中、低三个剂量组及药物对照组均能治疗猪传染性胸膜肺炎，治愈率分别为86.7%、76.7%、66.7%、70%，差异不显著（p>0.05，X2=0.42～3.27）。当与患病不给药组（自愈有效率为26.7%）进行比较，差异均极显著（p<0.01，X2=15.02～27.78）。其中高、中、低剂量治疗组、药物对照组与健康对照组14天增重（5.51kg）之比分别为96.5%、93.5%、97.7%、94.3%，无显著差异（P>0.05）。