高效液相色谱仪与联用技术在药物分析及药物质量控制中的应用

黄洁琼

（苏州大学医学部药学院，江苏 苏州 215006）

高效液相色谱法是现代药物分析与药物质量控制的一种重要手段。高效液相色谱法引用了气相色谱的理论，用高压输送流动相，用小粒径的填料填充色谱柱，使得柱效率远高于经典液相色谱。色谱柱后连有高灵敏度的检测器，色谱柱分离出的样品组分和含量被转化成可供检测的信号，可以对样品进行定性和定量分析以及各组分分离情况的判断，因此检测器的好坏直接决定药物分析的准确度和灵敏度。笔者查阅相关文献，对高效液相色谱仪与不同的检测器联用技术及其在药物分析与药物质量控制中的应用做一小结。

1 高效液相色谱仪联用二极管阵列检测器（HPLC-DAD）

二极管阵列检测器是一种光学多通道检测器，20世纪80年代开始使用。其原理是由光源发出的光线经过样品池，然后经分光技术，使所有波长的光在检测端同时被检测，得到时间、波长和光强度的三维谱图。在实际应用中，二极管阵列检测器可以同时检测出多个波长的色谱图，宽谱带检测和计算不同波长的相对吸光度，所以一次进样就能得到样品所有组分的信息，而每个组分都有全波段的光谱吸收图，从而对样品进行定性、定量分析。刘欣荣等[1]采用高效液相色谱仪联用二极管阵列检测器对羟基喜树碱人血清白蛋白纳米颗粒中的药物含量进行了测定，该方法准确可靠、简单易行。林佶等[2]采用高效液相色谱仪联用二极管阵列检测器对三七中人参皂苷Rb1的纯度进行了鉴定，选择203nm作为DAD检测人参皂苷Rb1的波长，用外标法准确测得三七样品中人参皂苷Rb1的平均含量。

2 高效液相色谱仪联用荧光检测器（HPLC-FLD）

荧光检测器也是高效液相色谱仪常用的一种检测器，用于检测能产生荧光的化合物。荧光检测器由激发光源、激发光单色器、样品池、发射光单色器、和检测发光强度的光电检测器组成。光源发出的光经过激发光单色器后得到所需波长的激发光，激发光通过样品池被荧光物质吸收，荧光物质受激发后发射荧光，经发射光单色器后由光电检测器接收。荧光检测器选择性高，只对荧光物质有响应；灵敏度也高，最低检出限可达10-12ug/ml，适用于多环芳烃及各种荧光物质的痕量分析，也可用于检测不发荧光但经化学反应后可发荧光的物质。孙丽等[3]采用反相高效液相色谱联用荧光检测器，准确测定了维压静片中利血平的含量。

3 高效液相色谱仪联用示差折光检测器（HPLC-RID）

示差检测器是根据折射原理设计的一种检测器，可连续检测样品流路与参比流路间液体折光指数差值的检测器。光从一种介质进入到另一种介质中时，由于两种物质的折射率不同就会产生折射。当样品组分和流动相的折光率不同时，就可被检测。示差折光检测器是一种浓度型检测器，在一定浓度范围内检测器的响应信号与溶质浓度成正比，但其不适用于梯度脱洗。戴立波等[4]用高效液相色谱仪联用示差折光检测器建立了一种简单、快速、准确分析肌醇的方法，能及时得到生产各个环节中肌醇质量分数的指标，可用于监测肌醇生成的整个过程。

4 高效液相色谱仪联用蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD）

20世纪80年代澳大利亚的Union Carbide研究实验室的科学家研制开发第一台ELSD，并将其转化为商品。此后，通过不断改进，ELSD的操作性能得到不断提高。现在ELSD越来越多的作为通用型检测器用于高效液相色谱、超临界色谱和逆流色谱中。蒸发光散射检测器的检测原理是先将柱洗脱液雾化形成气溶胶，然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发，最后剩下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。蒸发光散射检测器不需要样品含有发色基团即可检测挥发性低于流动相的任何样品。蒸发光散射检测器灵敏度比示差折光检测器高，对温度变化不敏感，基线稳定，适合与梯度洗脱液相色谱联用。碳水化合物、类脂、脂肪酸和氨基酸、药物以及聚合物等的检测均可使用蒸发光散射检测器。段瑞等[5]用高效液相色谱仪联用蒸发光散射检测器测定了红药片中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量。该方法准确，分离效果好，无干扰，可用于红药片的质量控制。刘亚风等[6]采用超高效亲水作用色谱联用蒸发光散射检测器测定了牛磺酸颗粒和牛磺酸滴眼液中牛磺酸的含量。该方法省去了复杂的样品预处理，缩短了牛磺酸的分析时间，提高了检测工作效率。

5 高效液相色谱仪联用电化学检测器（HPLC-ECD）

电化学检测器可检测具有电活性的物质，包括极谱检测器、库仑检测器、安培检测器和电导检测器等。前三种统称为伏安检测器，用于具有氧化还原性质化合物的检测，电导检测器主要用于离子检测。电化学检测器灵敏度很高，尤其适用于痕量组分分析，缺点是干扰比较多，电极寿命有限，对温度和流速的变化比较敏感。李海英等[7]将高效液相色谱仪—电化学检测器联用技术用于硫酸阿奇霉素含量的测定及有关物质概况的分析，取得了可喜的结果。

6 高效液相色谱仪联用质谱检测器（HPLC-MSD）

质谱检测器是一种灵敏度高、选择性好、指纹性强的通用型检测器，可用于微量或痕量分析。高效液相色谱仪联用质谱检测器是一种高度自动化、常规化的分析手段，发挥了色谱分离的长处和质谱定性结构分析的优势，在中药色谱指纹图谱研究中发挥着重要作用。蔡爽等[8]将超高效液相色谱联用质谱用于2型糖尿病大鼠粪样代谢物指纹图谱研究，该研究有利于糖尿病的早期诊断。徐娟等[9]用超高效液相色谱联用质谱法同时检测口腔卫生用品中的5种硝基咪唑类药物。该方法操作简单，结果稳定可靠，为监管部门规范管理口腔卫生用品市场提供了依据。

总之，高效液相色谱法吸取了经典液相色谱和气相色谱两种方法的优点，其检测器也从固定单波长紫外检测器发展到可变波长紫外一可见光检测器、示差析光检测器、荧光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测器、质谱检测器以及核磁共振检测器等。随着科学技术的进步，检测器会向着灵敏度高、选择性好、适应范围广等方向发展，检测器的联用技术也逐步完善。将不同的检测器联用可以在一次进样分析中得到更多、更准确的信息，这使高效液相色谱检测技术在药物分析与药物质量控制方面具有不可替代的作用。

［1］刘欣荣,王龙,卢懿,等.HPLC法测定羟基喜树碱人血清白蛋白纳米颗粒中的药物含量[J].沈阳药科大学学报,2009,1:48.

［2］林佶,段志敏,万玉萍,等.HPLC二极管阵列检测器定量分析三七中人参皂苷Rb1[J].实用预防医学,2004,12(6):1273.

［3］孙丽,游强,闻京伟.中国药品标准[S].2003,4(6).

［4］戴立波,李建桥,胡清.采用带示差折光检测器的高效液相色谱法检测肌醇[J].化学工业与工程技术,2006,8.

［5］段瑞,沙冬旭,杨文.沈阳药科大学学报,2008,5:376.

［6］刘亚风,祝伟霞,袁萍,等.超高效亲水作用色谱—蒸发光散射检测牛磺酸颗粒和牛磺酸滴眼液中牛磺酸的含量[J].分析试验室,2011,3:101.

［7］李海英,陈悦.西北药学杂志,2003,8:147.

［8］蔡爽,霍韬光,徐静华,等.超高效液相色谱—质谱用于2型糖尿病大鼠粪样代谢物指纹图谱研究[J].沈阳药科大学学报,2009,10:811.

［9］徐娟,陈健,邵琳智,等.超高效液相色谱法同时检测口腔卫生用品中的硝基咪唑类药物[J].色谱,2011,5:450.