硅钨酸质量法测定延胡索总生物碱质量分数

王 淼，孙思邈，田 明

(1.哈药集团技术中心，哈尔滨150025;2.黑龙江中医药大学 药学院，哈尔滨150040;3.黑龙江中医药大学实验中心，哈尔滨150040)

延胡索总生物碱是罂粟科植物延胡索的干燥块茎中提取分离出来的总生物碱有效部位，具有活血化瘀，利气止痛的作用[1－2].根据中药新药的技术研究要求，中药五类新药为“未在国内上市销售的从植物、动物、矿物等物质中提取的有效部位及其制剂”，其有效部位含量应占提取物的50%以上[3－4].本文选取硅钨酸质量法，将延胡索生物碱转化成为可以准确称量的形式，进行质量分数检测和计算[5－7].

1 仪器与试药

电子分析天平:AB204－N，梅特勒－托利多仪器上海有限公司

电子分析天平:ESJ182－4，沈阳龙腾电子有限公司

电热鼓风干燥箱:DZF－6030A，上海一恒科技有限公司

茂福炉:沈阳市电炉厂RJM－28－10

差热－热重分析仪:北京光学仪器厂WCF－2A(北京恒久科学仪器厂)

垂熔玻璃漏斗:G4

延胡索总生物碱:自制

硅钨酸:天津市光复精细化工研究所2011年5月20日

冰乙酸、碘化铋钾、碘化汞钾、碘化钾均为分析纯

2 硅钨酸测定总生物碱原理

在酸性环境下，硅钨酸能够和多数生物碱生成一定的沉淀，一分子硅钨酸可以和四分子含1个碱性氮原子或二分子含二个碱性氮原子的生物碱相结合，生成硅钨酸盐沉淀.延胡索提取物当中，已知的生物碱均为含1个氮原子的，若以M表示生物碱，则反应原理如下:

4M+SiO2·12WO3·26H2O → M4·2H2O·SiO2·12WO3·5H2O ↓+19H2O

生成的硅钨酸盐在高温灼烧后，有机成分被分解，留下二氧化硅和氧化钨残渣:

M4·2H2O·SiO2·12WO3·5H2O → SiO2·12WO3+CO2↑ +N2↑ +H2O↑

根据化合物的质量比例关系，称其质量，即可计算总生物碱的质量分数.

3 实验方法

3.1 供试品溶液的制备

取延胡索总生物碱约5 g，精密称定5.037 1 g，记为W，置于100 mL容量瓶当中，加0.1 mol/L的冰醋酸溶液适量，振摇使溶解并定容至刻度，摇匀，即可.

3.2 硅钨酸溶液的制备

取硅钨酸适量，加水制成体积分数约为20%的硅钨酸溶液.

3.3 测定方法

精密量取供试品溶液30 mL，置于100 mL三角烧瓶当中，缓慢加入硅钨酸溶液30 mL，在加入的过程中用玻璃棒不断搅拌.密闭，放置过夜.

将垂熔玻璃漏斗置于电热鼓风干燥箱中，105℃条件下干燥，直至恒重，精密称定，记为M;用已恒重的垂熔玻璃漏斗对沉淀物进行过滤，用0.05 mol/L的冰乙酸溶液冲洗三角烧瓶和玻璃棒，冲洗3次，每次15 mL，再用0.05 mol/L的冰乙酸溶液200 mL洗涤沉淀物;将附有沉淀物的垂熔玻璃漏斗于105℃干燥至恒重，精密称定，记为W1.

取已干燥至恒重的沉淀约2 g，精密称定，记为W2，置于炽灼至恒重的坩埚中，800～850℃高温灼烧至恒重，称定，计算灼烧后残渣质量，记为W3.根据下列公式计算生物碱质量分数.

4 方法学考察

4.1 反应完全性的考察

取供试品溶液30 mL，置于100 mL三角烧瓶当中，加入缓慢加入硅钨酸溶液30 mL，边加边搅拌或振摇.密闭，放置过夜.取上清液3份，每份5 mL，分别置于试管中，分别加入碘化铋钾试液、碘化汞钾试液、碘化钾碘试液，观察是否产生沉淀.

表1 沉淀反应结果表

结果分析:经三种生物碱沉淀试剂检测，均无肉眼可见沉淀产生，证明生物碱沉淀完全.

4.2 干燥及炽灼温度范围考察

在差热－热重分析仪中，放入空的样品坩埚和参比坩埚，仪器稳定后清零;在参比坩埚中放入约7 mg α－三氧化二铝，仪器稳定后再次清零;在样品坩埚中放入约5 mg的3.3项下沉淀，仪器稳定后，读取样品质量，编辑温度程序，温度:室温～850℃，程序升温指数:0～80 min.结果分析:由图1可知，蓝色线为供试品热量曲线，红色线为供试品质量曲线，黑色线为程序升温曲线.

供试品在25～200℃时，供试品质量线比较平稳，表明未有明显吸热、放热反应发生，结构未发生分解，故干燥温度选择在0～200℃范围内.供试品在200～600℃时，供试品热量曲线有较大变化，表明供试品有明显的吸热、放热反应发生，在温度600℃时，吸热达到顶峰，然后开始放热，此时，质量曲线也开始有着明显的下降趋势，直至650℃开始平稳，表明沉淀中的结晶水失去，化学结构发生改变，故炽灼温度选择应大于600℃.结合硅钨酸的性质，保证沉淀干燥、灼烧完全，最终确定干燥温度定为105℃，炽灼温度范围为800～850℃.

图1 差热－热重分析图

4.3 重现性实验

取延胡索总生物碱，5份，照3.1项下供试品处理方法处理，取每份供试品溶液30 mL，按3.3项下测定方法进行实验，计算生物碱的量.见表2.

上述结果表明，该实验方法重现性良好.

4.4 供试品质量分数测定

见表3.

表2 重现性实验结果表

表3 供试品测定结果

5 讨论

根据中药新药的技术研究要求，中药五类新药为“未在国内上市销售的从植物、动物、矿物等物质中提取的有效部位及其制剂”，其有效部位含量应占提取物的50%以上.延胡索总生物碱是由20多种生物碱所组成，运用比色法、高效液相色谱法，以其中的某一种或几种生物碱为对照进行测定，所测得的结果不够全面和准确，因此，选取硅钨酸质量法.

在试验的过程中，本文做了大量的基础实验，分别以盐酸小檗碱、原阿片碱、硝酸脱氢紫堇碱、盐酸巴马汀、盐酸黄连碱等近10种对照品作为对照，采用酸性染料比色法进行了总生物碱质量分数测定，测定结果亦不尽相同，故采用质量法来测定总生物碱含量，选取硅钨酸作为生物碱沉淀试剂，将所有生物碱转变成为能够准确称量的形式，根据沉淀的质量，以及反应相应的比例关系，来计算总生物碱的质量分数，方法新颖，结果直接、准确.

[1]孙世晓，夏学丽，苏晓悦，等.延胡索总生物碱防治大鼠急性心肌缺血作用的实验研究[J].中医药学报，2012，40(4):45－49.

[2]曲丽.延胡索总生物碱对Iso诱导急性心肌缺血大鼠模型保护作用的研究[D].哈尔滨:黑龙江中医药大学，2010.

[3]章育中，周同惠，沙世炎，等.植物药中一些主要成分测定方法的研究[J].药学学报，1962，9(9):541－547.

[4]胡季强，王如伟，吕 燊，等.大孔树脂分离纯化延胡索总生物碱的工艺研究[J].中国现代应用药学，2009，26(4):271－273.

[5]国家药典委员会编.中华人民共和国中国药典2010版一部[M].北京:中国医药科技出版社，2010.130－131.

[6]孙宏宇.延胡索总生物碱醋酸盐制备工艺与质量标准研究[D].哈尔滨:黑龙江中医药大学，2010.

[7]姜霁洺，杨 婧，邱金双，等.蛇床子干乳剂的制备与稳定性考察[J].哈尔滨商业大学学报:自然科学版，2014，30(4):409－412.