小鹅瘟病毒抗原免疫鸡对蛋黄抗体产生规律的研究

秦淑美邹建香陈 华

(1.江苏省金湖县动物疫病预防控制中心,江苏金湖 211600; 2.江苏省金湖县动物疫病预防控制中心,江苏金湖 211600; 3.江苏省金湖县动物疫病预防控制中心,江苏金湖 211600)

小鹅瘟病毒抗原免疫鸡对蛋黄抗体产生规律的研究

秦淑美1邹建香2陈 华3

(1.江苏省金湖县动物疫病预防控制中心,江苏金湖 211600; 2.江苏省金湖县动物疫病预防控制中心,江苏金湖 211600; 3.江苏省金湖县动物疫病预防控制中心,江苏金湖 211600)

小鹅瘟病是3周龄以内雏鹅的一种急性或亚急性的败血性传染病,传播快、发病率和致死率高。本试验通过对产蛋鸡注射不同剂型小鹅瘟病毒的抗原,检测抗体产生规律,找出制造高效率、高质量抗小鹅瘟病毒蛋黄抗体的方法,为防治小鹅瘟病的发生和发展,降低养鹅的风险积累资料。

小鹅瘟抗原;免疫;抗体

小鹅瘟是由小鹅瘟病毒引起的雏鹅急性或亚急性的败血性传染病。本病主要侵害出壳后4～20日龄的雏鹅，具有传播快，发病率和致死率高的特点。本病以消化道和中枢神经系统紊乱为特征。小鹅瘟病毒属于细小病毒科，细小病毒属，鹅细小病毒。病毒球形，无囊膜，二十面体对称，单股DNA病毒。对不良环境的抵抗力强。本病毒存在于患病雏鹅的肝，脾，肾，胰，脑，血液，肠道和心肌等各脏器及组织中，病毒初次分离时，将病料制成悬液接种于12～14日龄易感鹅胚的绒尿腔或绒尿膜，鹅胚一般在接种后5～8d死亡，鹅胚分离病毒连续通过多次传代后，对胚胎致死时间稳定在3～5d。本试验通过收集接种了标准的小鹅瘟病毒株，48～120h死亡的鹅胚绒尿液，加入0.05%甲醛，置37℃24h灭活后，置4℃冰箱保存待用。

各种抗生素和磺胺药对小鹅瘟病均无治疗作用。本病的特异性防治依赖于被动免疫。在本病流行区域，或已被本病毒污染的炕房，雏鹅出炕后立即皮下注射蛋黄抗体，可达到预防或控制本病的流行和发生。蛋黄抗体的琼扩效价必须在1：8以上，抗体用量与效价有密切关系。因此生产中非常需要蛋黄抗体预防和治疗小鹅瘟。

本次试验通过给蛋鸡注射小鹅瘟病毒的不同剂型免疫抗原，检测鸡蛋黄中小鹅瘟抗体的产生规律，为生产环保，科学，高效，特效，无毒副作用的小鹅瘟蛋黄抗体积累资料。

1 材料和试剂

（1）水剂抗原：灭活小鹅瘟病毒绒尿液加生理盐水1：1稀释。

油剂抗原：灭活小鹅瘟病毒绒尿液与矿物油1：1混匀。

（2）琼扩平板（8%氯化钠溶液中加入1.0g优质琼脂粉，加热融化后，加入终浓度为0.01%硫柳贡防腐，浇制凝胶板，冷却后置4℃保存。）

（3）标准小鹅瘟琼扩诊断抗原。（4）健康产蛋鸡36只。

2 方法

（1）免疫方法：每只鸡肌肉注射水剂抗原1.0ml。共注射12笼，每笼3只。从第6天开始，每3-5天取蛋检测，至抗体下降接近（0-1）log2时进行二次免疫。

再次免疫分二组：第一组6笼：每只鸡肌肉注射1.0ml水剂抗原，第二组6笼：每只鸡肌肉注射1.0ml油剂抗原。

（2）抗体检测：免疫前后检测鸡蛋黄中抗小鹅瘟病毒的琼扩抗体。每组取同一天生的蛋分成若干组，每只蛋取等量蛋黄混合作1：1稀释，离心弃脂肪后，取液作检测。将琼扩凝胶板按中央1孔外围6孔打孔，孔径3mm，间距4mm，加样量为25µl，同时做阴阳性血清对照。加样后置37℃湿盒孵育24h，再室温放置24～48h，观察判定结果：与标准抗原形成白色沉淀线的抗体最大稀释倍数即为蛋黄抗体的效价。

3 试验经过和结果

取小鹅瘟水剂抗原，翅下肌肉注射1.0ml小鹅瘟病毒抗原琼扩抗体为阴性的普通蛋鸡36只，鸡群未有应激现象。鸡只正常活动、产蛋。随后定期集蛋并检测其抗小鹅瘟病毒抗体水平。

第27d，测得鸡蛋黄中抗小鹅瘟抗体滴度下降到（0～1）log2时，对鸡群进行分组。一组注射油剂抗原每只1.0ml。另一组注射水剂抗原1.0ml/只。

收集的鸡蛋分组，1：1稀释蛋黄离心弃脂肪后取液检测，结果如下：

一免后蛋黄中抗体水平如下：

二免后蛋黄中抗体水平如下：

4 小结

（1）水剂型抗原首次免疫鸡只，只要6d就能产生超过有效治疗和预防小鹅瘟病毒感染的抗体效价3log2，平均抗体水平达到5.8log2。

（2）首次水剂型抗原刺激机体产生的有效抵制小鹅瘟病毒感染的蛋黄抗体水平（高于5.8log2）维持的时间短，只能维持20d左右。20d以后，蛋黄抗体水平已低至3log2，抗体滴度已不能有效保护雏鹅抵抗外界强毒的感染，27d时，部分鸡只的蛋黄抗体已检测不到。

（3）第27d，分水剂和油剂两种剂型再次接种免疫鸡只，水剂型抗原再次加强免疫后12d，抗体水平上升到3.6log2，然后一直维持这样的水平（3～6）log2。二次免疫后的2个月内，蛋黄抗体最高只能达到6log2。二次免疫后54d时，蛋黄抗体降至3.4log2。油剂型再次加强免疫后，蛋黄抗体水平上升的很快很强，免疫后2个月最高可达到11.2log2。并且维持的时间更为持久，二次免疫54d时，机体产生的蛋黄抗体仍在7.4log2，比水剂抗原产生的滴度高出4log2。

5 分析和讨论

本试验用小鹅瘟病毒抗原水剂和油剂两种剂型免疫产蛋鸡，第一次用水剂可以让鸡群在短时间内快速产生抗小鹅瘟病毒的蛋黄抗体，当抗体下降到一定值时用水剂和油剂进行第二次免疫，产生的蛋黄抗体水平有明显的区别，水剂型产生的蛋黄抗体无论在维持高滴度效价的时间和最高滴度效价都远不如油剂型好。因此，在相同剂量的前提下，二免用油剂型的抗原对蛋黄免疫抗体产生效果更好。

[1]刁有祥.简明水禽疾病诊断与防治原色图谱[M].化学工业，2009.