miR-128在胃癌中的表达及临床意义的研究

夏静 周淑平 陈富明 谢清云 柏艳萍 杨铭

miR-128在胃癌中的表达及临床意义的研究

夏静 周淑平 陈富明 谢清云 柏艳萍 杨铭

目的 研究miR-128在胃癌中的表达及临床意义。方法 采用原位杂交法检测112例胃癌组织及癌旁正常组织的表达，统计分析miR-128与胃癌患者临床参数的关系。结果 miR-128在胃癌中表达下调，在胃癌组织中阳性表达35例，阴性表达77例，而在癌旁正常组织中阳性表达89例，阴性表达23例；与患者的TNM分期相关，TNM I～II期患者中miR-128低表达的42例，高表达28例，TNM III～IV期患者中miR-128低表达的35例，高表达的7例。结论 miR-128在胃癌组织中表达低于癌旁正常组织，与胃癌患者TNM分期，可作为胃癌分期预测的潜在分子标志物。

胃癌；miR-128；TNM分期

胃癌是一个严重威胁人类健康的恶性肿瘤，其发病率居全球恶性肿瘤发病的第4位，死亡率居全球恶性肿瘤导致死亡的第2位[1]。胃癌的5年生存率在过去的10年有较大的提高，但是这个5年生存率的提高仅限于胃癌早期的患者[2]。胃癌晚期或有远处转移患者的5年生存率低于5%，中位总生存时间低于1年[3]。

miRNA是，约18～23 nt长的微小非编码RNA，在肿瘤中表达失调，可发挥抑瘤基因或瘤基因的功能，并通过调控多个信号通路影响肿瘤细胞的功能。miRNA通过转录后抑制，调控靶基因的表达。成熟的miRNA通过识别靶基因3’非翻译区（untranslated region，UTR），与3’UTR结合，降解mRNA或抑制mRNA翻译[4]。miR-128在多种肿瘤中表达下降，具有抑制肿瘤的作用。

本研究拟通过免疫组化法检测miR-128在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达情况，统计分析miR-128在胃癌组织中表达与临床参数的关系，从而确定miR-128在胃癌中的表达及与临床参数的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2011年1月～2013年12月在南华大学附属永州市中心医院就诊的112例原发性胃癌患者的肿瘤组织及癌旁正常组织。男72例，女50例；年龄31～73岁，其中年龄≥54岁的患者69例，＜54岁的患者43例；高分化患者39例，中分化患者50例，低分化患者23例；肿块大小≥3 cm的患者65例，＜3 cm的患者57例；TNM分期I～Ⅱ期患者70例，Ⅲ～Ⅳ期患者42例；有淋巴结转移的患者79例，无淋巴结转移的患者33例。上述组织标本的使用已由永州市中心医院伦理委员会同意。

1.2 主要试剂 原位杂交试剂盒购自武汉博士德公司。

1.3 原位杂交法 根据试剂盒说明书进行操作。

1.4 原位杂交检测法结果分析 根据组织阳性染色程度计分：阴性，1分；++，2分；++，3分；+++，4分；根据组织中的染色阳性细胞数进行计分：1分，0%～25%；2分，26%～50%；3分，51%～75%；4分，76%～100%。根据以上两种方法得到的分数相乘多得的数值判定表达情况，＜8为低表达，≥8为高表达。

1.5 统计学方法 采用SPSS 17.0统计学软件分析数据。计量资料2组或2组以上采用student t-test或One-way ANOVA分析；率的比较用χ2检验和Fisher’s exact test分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 miR-128在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达情况原位杂交检测法结果显示，miR-128在胃癌组织中的表达阳性率明显低于同一患者对应癌旁正常组织，差异有统计学意义（P＜0.001）。见表1。

表1 miR-128在胃癌及癌旁正常胃黏膜组织中的表达（n）

2.2 miR-128与胃癌患者临床参数的关系 结果显示，miR-128的表达与患者的性别、年龄、组织学分级、肿瘤大小及淋巴结转移无关，差异无统计学意义。miR-128的表达与胃癌患者TNM分期相关，TNM I～Ⅱ期患者中miR-128高表达比例高于TNM Ⅲ～Ⅳ分期患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

3 讨论

研究表明，多个miRNA参与了胃癌耐药机制的调控。miR-103/107在胃癌细胞中表达降低，当增加miR-103/107的表达可促进SGC 7901/ADR细胞对多柔比星的敏感性，并且可抑制耐药蛋白P-gp的表达[5]。miR-503通过靶向IGF 1R和BCL-2，抑制胃癌SGC 7901/DDP增殖，增加SGC 7901/DDP对顺铂的敏感性[6]。miR-106 a通过促进ADR外流，抑制化疗药物诱导的细胞凋亡，靶向抑制RUNX 3诱导胃癌细胞耐药[7]。

miR-128在多种肿瘤中表达失调，并且miR-128在不同肿瘤中的表达差异非常大。miR-128可抑制肿瘤的生长。miR-128通过抑制其靶基因BMI-1、BAG-2、 BAX、H 3f 3b及Paip 2的表达抑制头颈部鳞癌细胞JHU-13和JHU-22的体外生长及体内成瘤[8]。miR-128可增加化疗敏感性。高表达胶质母细胞瘤细胞中miR-128，可靶向抑制RapB介导的细胞骨架形成，并增加胶质瘤细胞对他莫昔芬的敏感性[9]。miR-128具有抑制肿瘤血管生成的功能。研究表明，miR-128通过抑制其靶基因血管内皮生长因子C（vascular endothelial growth factor-C，VEGFC）的表达，抑制人非小细胞肺癌的肿瘤形成、血管生成及淋巴管生成[10]。miR-128与预后相关。在结直肠癌患者组织中，miR-128表达降低，而miR-128低表达的患者复发率低于miR-128高表达的患者[11]。过表达急性粒细胞性白血病细胞中的miR-128可促进细胞程序性死亡及DNA损伤，但是不能引起细胞周期阻滞和自噬[12]。研究显示，miR-128在肝细胞癌中表达下降，其在血清中的表达可作为肝细胞癌预后预测的标记物[13]。有研究者利用miRNA芯片、norther blot及qRT-PCR的方法检测了miR-128在多形性胶质瘤和成神经管细胞瘤中表达降低[14-15]。而另一项研究表明miR-128在胶质瘤患者血清中升高[16]。有人检测了57例乳腺癌患者肿瘤组织中miR-128的表达，结果发现miR-128在化疗耐药的组织中表达下降，而在化疗敏感的组织中表达升高[17]。本研究首先检测了miR-128在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达，结果发现miR-128在胃癌组织中的表达显著降低，阳性率仅为31.3%，而miR-128在癌旁正常组织中的阳性率为79.5%。说明miR-128在胃癌组织中的表达是降低的。随后，本研究统计分析了miR-128与胃癌患者临床参数的关系。结果发现，miR-128与胃癌患者的TNM分期密切相关，而与患者的性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移等无关。说明，miR-128可作为胃癌患者TNM分期的潜在判定指标。

表2 miR-128表达与胃腺癌患者临床参数的关系(n)

过表达miR-128可增加卵巢癌细胞SKOV 3/CP对顺铂的敏感性[18]。可见，miR-128具有增加肿瘤化疗敏感性的功能，参与了肿瘤耐药机制的调控。尽管已经有许多关于miR-128在肿瘤中表达及作用机制的研究报道，但是miR-128在胃癌中的表达及作用尚不清楚。这将是本文作者的研究方向。

通过本研究可以确定miR-128在胃癌组织中表达降低，并且与TNM分期负相关，miR-128胃癌中可作为TNM分期预测的潜在分子生物学靶点。

[1] Jemal A,Bray F,Center MM,et al.Global cancer statistics[J].CA Cancer J Clin，2011,61(2):69-90.

[2] Siegel R,Naishadham D,Jemal A.Cancer statistics for Hispanics/ Latinos,2012[J].CA Cancer J Clin，2012,62(5):283-298.

[3] Power DG,Kelsen DP,Shah MA.Advanced gastric cancer--slow but steady progress[J].Cancer Treat Rev,2010,36(5):384-392.

[4] Xue J,Niu J,Wu Jand,et al.MicroRNAs in cancer therapeutic response:Friend and foe[J].World J Clin Oncol,2014,5(4):730-743.

[5] Zhang Y,Qu X,Li C,et al.miR-103/107 modulates multidrug resistance in human gastric carcinoma by downregulating Cav-1[J].Tumour Biol,2014.

[6] Wang T,Ge G,Ding Y,et al.MiR-503 regulates cisplatin resistance of human gastric cancer cell lines by targeting IGF 1R and BCL 2[J].Chin Med J(Engl),2014,127(12):2357-2362.

[7] Zhang Y,Lu Q,Cai X.MicroRNA-106 a induces multidrug resistance in gastric cancer by targeting RUNX 3[J].FEBS Lett,2013,587(18):3069-3075.

[8] Hauser B,Zhao Y,Pang X,et al.Functions of MiRNA-128 on the Regulation of Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Growth and Apoptosis[J].PLoS One,2015,10(3):e 0116321.

[9] She X,Yu Z,Cui Y,et al.miR-128 and miR-149 enhance the chemosensitivity of temozolomide by Rap 1B-mediated cytoskeletal remodeling in glioblastoma[J].Oncol Rep,2014,32(3):957-964.

[10] Hu J,Cheng Y,Li Y,et al.microRNA-128 plays a critical role in human non-small cell lung cancer tumourigenesis,angiogenesis and lymphangiogenesis by directly targeting vascular endothelial growth factor-C[J].Eur J Cancer,2014,50(13):2336-2350.

[11] Takahashi Y,Iwaya T,Sawada G,et al.Up-regulation of NEK 2 by microRNA-128 methylation is associated with poor prognosis in colorectal cancer[J].Ann Surg Oncol,2014,21(1):205-212.

[12] Seca H,Lima RT,Almeida GM,et al.Effect of miR-128 in DNA damage of HL-60 acute myeloid leukemia cells[J].Curr Pharm Biotechnol,2014,15(5):492-502.

[13] Zhuang L,Xu L,Wang P,et al.Serum miR-128-2 Serves as a Prognostic Marker for Patients with Hepatocellular Carcinoma[J].PLoS One,2015,10(2):e 0117274.

[14] Lages E,Guttin A,El Atifi M,et al.MicroRNA and target protein patterns reveal physiopathological features of glioma subtypes[J].PLoS One,2011,6(5):e 20600.

[15] Venkataraman S,Alimova I,Fan R,et al.MicroRNA 128 a increases intracellular ROS level by targeting Bmi-1 and inhibits medulloblastoma cancer cell growth by promoting senescence[J].PLoS One,2010,5(6):e 10748.

[16] Roth P,Wischhusen J,Happold C,et al.A specific miRNA signature in the peripheral blood of glioblastoma patients[J].J Neurochem, 2011,118(3):449-457.

[17] Zhu Y,Yu F,Jiao Y,et al.Reduced miR-128 in breast tumor-initiating cells induces chemotherapeutic resistance via Bmi-1 and ABCC 5[J].Clin Cancer Res,2011,17(22):7105-7115.

[18] Li B,Chen H,Wu N,et al.Deregulation of miR-128 in ovarian cancer promotes cisplatin resistance[J].Int J Gynecol Cancer, 2014,24(8):1381-1388.

Objective To identify the expression and clinical signif i cance of miR-128 in gastric cancer. Methods The expression of miR-128 in 112 gastric cancer samples was detected by ISH. The correlation between the expression of miR-128 and clinical parameters was analyzed. Results miR-128 was downregulated in gastric cancer tissues. It negatively correlated to the TNM stage. Conclusion The expression of miR-128 was downregulated in gastric cancer tissues, correlated to TNM stage. miR-128 could be a potential biomarker in evaluating TNM stage, sensitivity to target therapy.

Gastric cancer; miR-128; TNM stage

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.14.001

湖南 425006湖南省永州市中心医院 （夏静 周淑平 陈富明谢清云） 永州市职业技术学院（柏艳萍 杨铭）

杨铭 E-mail：ym 74621123@sina.com