‘阿里山’蝴蝶兰组织培养及其驯化移栽技术

林秀莲，马骁勇

(惠州农业学校，广东 惠州516023)

蝴蝶兰(Phalaenopsis spp.)属兰科蝴蝶兰属植物，有“兰中皇后”之美誉，观赏价值和经济价值较高，备受消费者青睐。引进台湾地区新品种可丰富蝴蝶兰市场，在引进新品种的同时，建立快速繁殖优化体系显得尤为重要。惠州市近年畅销的蝴蝶兰品种包括内山姑娘、大辣椒等，这些品种有性繁殖的品系后代易分离，颜色深浅不一，随着栽培年数的增加，易发生颜色淡化等品种退化现象。组织培养技术可以克服这些问题。从现有文献资料［1－5］来看，蝴蝶兰的组织培养技术较为成熟，但对生根组培苗驯化移栽研究相对较少，而生根苗的移栽成活率是商品效益高低的关键因素之一［6］，对移栽的基质、水分、温度、湿度等研究尤为重要。本文拟对台湾引进的大红蝴蝶兰新品种‘阿里山’进行花梗诱导、丛生芽增殖、生根培养等研究，并初步分析了该品种的驯化移栽技术，以期建立简便、实用、高效的产业化蝴蝶兰繁殖体系，满足花卉市场需求。

1 材料与方法

1.1 材料

‘阿里山’蝴蝶兰取自惠州绿湖公司蝴蝶兰圃，为温室栽培的2年生优良蝴蝶兰品种。3月份花开过后，剪取生长健壮、无病虫害的‘阿里山’花梗。选择天气晴朗的下午进行采样。

1.2 方法

1.2.1 花梗诱导 将剪下的花梗用洗衣粉浸泡10 min，流水冲洗30 min 左右，置于超净工作台，用酒精消毒30 s，升汞消毒8 －10 min，再用无菌水清洗。在1/4MS +0.3 mg·L－1NAA+20%蔗糖+7%琼脂的培养基上，分别添加2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 mg·L－1BA，比较不同BA 浓度对花梗诱导芽的影响。培养基代号分别为Ⅰ1－Ⅰ6，pH 值为5.8，在1.1 kg·cm－2、121 ℃下消毒20 min。每个处理40 瓶，每瓶接种1个花梗芽，每3 天观察记录1 次，14 d 后统计污染率:污染率/% =污染植株总数/接种总数×100，30 d 后统计诱导分化率:诱导分化率/% =植株分化总数/接种总数×100。

1.2.2 丛生芽增殖 在1/2MS+20%蔗糖+7%琼脂+200 mL·L－1椰汁的培养基上，分别添加6.0、7.0、8.0 mL·L－1BA 与0.2、0.5、0.8 mL·L－1NAA，比较不同BA、NAA 浓度对丛生芽增殖的影响。培养基代号分别为Ⅱ1－Ⅱ9，pH 值为5.8，在1.1 kg·cm－2、121 ℃下消毒20 min。每个处理40 瓶，每瓶接2 丛，每5天观察记录1 次，40 d 后统计增殖系数:增殖系数/% =40 d 后丛生芽数/接种数×100。

1.2.3 生根培养 以改良1/2KC 为基本培养基，添加30 g·L－1蔗糖、6 g·L－1琼脂、100 g·L－1香蕉泥，比较0、0.1、0.5、1.0、1.5 mg·L－1NAA 对生根的影响。培养基代号分别为:Ⅲ1－Ⅲ5，pH 值均为5.8，并在1.1 kg·cm－2、121 ℃下消毒20 min。选取2 cm 以上，有3 片完整叶片的无根苗转入生根培养基中培养生根。每个处理40 瓶，每瓶接种2 株，每3 天观察记录1 次，30 d 后统计生根率。

1.2.4 驯化移栽 将具有3 －4 片叶的‘阿里山’生根组培苗进行大棚驯化7、14、21、28 d，以水草为基质。每个处理30 株生根组培苗，设3 次重复，移栽45 d 后记录小苗长势情况。

1.3 培养条件

培养室、温室大棚温度(25 ±2)℃，生根培养与驯化移栽光照3000 lx，其他为暗培养，湿度保持在70%。

2 结果与分析

2.1 BA 浓度对‘阿里山’蝴蝶兰花梗诱导的影响

‘阿里山’蝴蝶兰培养25 d 后可见腋芽萌发(图1A)。培养14 d 后，测量污染植株总数及接种总数，统计‘阿里山’蝴蝶兰污染率(约90%)，表明常规的消毒方法基本能够控制其污染率。培养30 d 后统计其诱导分化率(表1)。由表1 可知，BA 浓度太高或太低均不利于花梗的诱导分化。当BA 浓度为4 mg·L－1时，分化率最高，达82.5%。而过高或者过低的BA 浓度，均导致‘阿里山’蝴蝶兰分化率下降。

图1 ‘阿里山’蝴蝶兰组培过程Fig.1 Tissue culture of P.spp.cv.Ali Mountain

2.2 NAA、BA 浓度对‘阿里山’蝴蝶兰丛生芽增殖的影响

‘阿里山’蝴蝶兰增殖培养23 d 后陆续有新芽萌发(图1B)。NAA、BA 浓度对‘阿里山’蝴蝶兰增殖系数影响不同(表2)。由表2 可知，NAA 从0.2 mg·L－1增加到0.8 mg·L－1时，增殖系数不断提高。添加0.8 mg·L－1NAA 与7.0 mg·L－1BA 对‘阿里山’蝴蝶兰丛生芽增殖效果最佳。培养18 d后开始分化，增殖系数达306.3%。但随着BA 浓度的继续增加，其增值系数有下降趋势，这可能是由于高浓度的分裂素对丛生芽的分化有抑制作用。与此同时，表明NAA 与BA 具有协同作用。

表1 BA 浓度对‘阿里山’蝴蝶兰花梗诱导的影响Table 1 Effect of BA concentration on pedicel inducing of P.spp.cv.Ali Mountain

表2 NAA、BA 浓度对‘阿里山’蝴蝶兰丛生芽增殖的影响Table 2 Effects of NAA and BA concentrations on proliferation of bud clusters in P.spp.cv.Ali Mountain

2.3 培养基对‘阿里山’蝴蝶兰生根率的影响

‘阿里山’蝴蝶兰生根培养26 d 后陆续有新根长出(图1C)。NAA 浓度对‘阿里山’蝴蝶兰生根率的影响见表3。由表3 可知，添加1.0 mg·L－1NAA，‘阿里山’蝴蝶兰生根率最高，在8 d 左右就可见乳白色根系，且苗健壮、根长势较强，不添加NAA 或者NAA 浓度高于1.0 mg·L－1，其生根率均较低。该结果与谭鹏鹏等［5］研究结果相似，表明生长素有助于提高植物生根率，但生长素高于1.0 mg·L－1对‘阿里山’蝴蝶兰的生根反而有所抑制。

表3 NAA 浓度对‘阿里山’蝴蝶兰生根率的影响Table 3 Effect of NAA concentration on rooting of P.spp.cv.Ali Mountain

2.4 驯化时间对‘阿里山’蝴蝶兰组培苗移栽成活率的影响

驯化7、14、21、28 d 后将蝴蝶兰移栽至水草中，45 d 后记录移栽成活率。驯化7、14、21、28 d 后，移栽成活株数分别为19、21、25、28，成活率分别达63.3%、70.0%、83.3%、93.3%。表明在温度27 ℃、湿度约60% －70%时，驯化时间越长(28 d)，‘阿里山’蝴蝶兰组培苗的移栽成活率越高，可达93.3%。与此同时，试验用蝴蝶兰常以水草为栽培基质，能够基本满足‘阿里山’蝴蝶兰的生长需求。

3 讨论

目前，‘阿里山’蝴蝶兰尚未在市面上普及，其组培技术的研究对整个蝴蝶兰花卉组培有一定的借鉴作用。本研究表明，以1/4MS 为基本培养基的无机盐浓度适合‘阿里山’蝴蝶兰的花梗诱导，同时1/2MS的无机盐浓度适合丛生芽的增殖快繁，这与钟海丰等［7］研究一致。褐化是组织培养过程中常见的现象，也是较难克服的问题之一［8］。蝴蝶兰的褐变现象在花梗诱导期就出现，生根阶段添加香蕉泥能明显促进生根和苗的生长，香蕉泥不仅能缓冲pH 值，还含有天然的植物激素，能促进植物根系的形成［9－10］。本试验中增殖芽苗也不同程度出现了褐变现象，因此在今后的研究中，可通过添加香蕉汁来缓解褐变。

组培苗在无菌、有营养供给、适宜光照、温度、100%相对湿度环境中生长［6］，但在驯化移栽过程中，环境发生了剧烈变化，如果不能谨慎处理好与环境因子的关系，就有可能造成大量死苗，进而影响整体经济效益。‘阿里山’蝴蝶兰更喜低温，因此，调节环境条件，特别是移栽前期的湿度与温度控制是提高移栽成活率的重要环节。

［1］张颖，郭晓东，王芳，等.蝴蝶兰组织培养快繁技术研究［J］.北方园艺，2010(8):122 －124.

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［3］张敏，黄利斌，蒋泽平.蝴蝶兰组织培养生根影响因子的筛选［J］.江苏林业科技，2011(1):20 －22.

［4］陈玲，徐信，李苇洁，等.蝴蝶兰组织培养技术研究进展［J］.安徽农业科学，2011(5):2565 －2566.

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［6］周文兰.蝴蝶兰组培苗的炼苗移栽技术研究［J］.现代园艺，2013(6):6 －8.

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［8］李杰，黄敏仁，王明庥，等.植物外源激素对大花蕙兰体胚发生影响的研究［J］.北京林业大学学报，2005，27(4):35－38.

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