HPLC 法测定利桑-12 中羟基红花黄色素A 的含量

关玉秋

(内蒙古自治区兴安盟人民医院，内蒙古 乌兰浩特 137400)

蒙成药利桑-12 由天竹黄、红花、肉豆蔻、丁香、豆蔻、草果、信筒子、紫钅丱、檀香、紫檀香、冰片、甘松等12 味药组成的复方制剂。有消黏，止痛作用。主要用于头痛，咽鼻不通。红花为处方中主药，文献报道［1］其中含有红花苷、新红花苷、羟基红花黄色素A、山柰素、槲皮素，多糖等成分。参照［2］《中国药典》2005年版一部“红花”项下的含量测定方法，选择羟基红花黄色素A 作为指标成分，对本制剂中的红花进行了HPLC 含量测定方法研究，经分析方法验证，表明该方法重现性好，专属性强，方中其它组分对羟基红花黄色素A 的测定无干扰，故收入质量标准中。

1 仪器与试药

1.1 仪器：岛津LC-10ATVP SPD-10AVP 型检测器，SCL-10AVP 色谱工作站，岛津UV-1700 型紫外分光光度计。

1.2 试剂与试药：羟基红花黄色素A 对照品(批号：111637 -200503)中国药品生物制品检定所;甲醇为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。

2 方法学考察

2.1 色谱条件的选择：色谱柱：色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，本试验研究采用phennmenexC18 柱(250mm×4.6mm，5μm，流动相即甲醇- 乙腈-0.7% 磷酸溶液(26：2：72)为流动相，检测波长为403nm，采用柱温：30℃，理论板数按羟基红花色素A 计算应不低于3000。

2.2 供试品溶液的制备：取本品粗粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz)30 分钟，取出，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 对照品溶液的制备：精密称取羟基红花黄色素A 对照品适量加25%甲醇制成1mL 中含40ug 的溶液，即得。

2.4 阴性对照试验：另取按处方比例并以相同工艺制备的缺红花的阴性对照，按供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，测得结果为：阴性对照色谱图中在与红花黄色素A 对照品以及供试品色谱图中相对应的保留时间处无色谱峰出现，表明其它组分对红花黄色素A 的测定无干扰。见图1、图2、图3。

2.5 线性关系考察：取红花黄色素A 对照品约5mg，精密称定，置50mL 棕色量瓶中，加25%甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀(相当于含羟基红花黄色素A 0.1002mg/mL)然后精密吸取0.5、1、2、3、4、5mL 溶液分别置10mL 棕色量瓶中，加25%甲醇至刻度，摇匀，各取20μL 进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对进样量进行回归分析，结果羟基红花黄色素A 在0.01001μg ～0.1002μg 范围内呈良好的线性关系。回归方程为Y=54609738X-9333.2575，r=0.9999

2.6 稳定性试验：取同一份供试品溶液，分别于0h、2h、4h、8h、12h、24h 进样测定，结果羟基红花黄色素A 在24h内的面积积分值基本稳定不变，RSD 为0.29%。

2.7 精密度试：精密吸取同一份供试品溶液，连续进样5次，测定羟基红花黄色素A 峰面积积分值RSD 为1.52%。

2.8 重复性试验：取同一批号(2006043)供试品6 份，各约0.5g，精密称定，分别按含量测定项下方法操作，测定每份含量，RSD 为1.52%。

2.9 准确度：取本品(批号20060527，含量1.767mg/g)9份，各约0.25g，精密称定，分别置50mL 容量瓶中再分别在其中3 个容量瓶中精密加入用浓度为0.2332mg/mL 羟基红花黄色素A 对照品25%甲醇溶液1mL(约相当于供试品含量的50%)、另3 个容量瓶中各精密加入上述对照品溶液2mL(约相当于供试品含量的100%)、其余3 个容量瓶中各精密加入上述对照品3mL，(约相当于供试品含量的150%)分别按含量测定项下方法操作，测定每份含量，计算回收率，结果见表1 。

序号 样品量(g)供试品含量(mg)对照品加入量(mg)测得总量(mg)回收率(%)平均(%)RSD(%)1 0.2589 1.767 0.2332 0.6978 103.03 2 0.2599 1.767 0.2332 0.6994 103.00 3 0.2578 1.767 0.2332 0.6958 103.04 1 0.2501 1.767 0.4664 0.9112 100.62 2 0.2567 1.767 0.4664 0.9217 100.36 3 0.2500 1.767 0.4664 0.9085 100.06 1 0.2596 1.767 0.6996 1.1716 101.90 2 0.2576 1.767 0.6996 1.1676 101.83 101.66 1.17 3 0.2502 1.767 0.6996 1.1497 101.14images/BZ_171_1092_1578_1094_1579.png

3 供试品含量测定

取本品按质量标准【含量测定】项下的方法处理，三批供试品及模拟样的测定结果见表2。

批号 取样量 测得峰面积值含量(mg/g)平均含量(mg/g)RSD(%)0.5266 963896 1.6741 2006061 0.4902 858816 1.6022 1.6483 2.427 0.5478 1052623 1.7574 2006043 0.5308 1019079 1.756 1.7556 0.11 0.5392 1033825 1.7535 0.5300 1013216 1.7485 2006080 0.5298 1013896 1.7503 1.7469 0.27 0.5274 1013216 1.7418 0.5344 1065222 1.769模拟样 0.5373 1075350 1.776 1.7823 0.97 0.5493 1115262 1.802

4 讨论

样品制备考察时，提取时间等均进行了比较试验，最终确定超声处理30min 效果较稳定。

［1］北京中医药大学.中药鉴定学(供中药类专业用)［M］.北京：科学出版社，2002：290.

［2］国家药典委员会.中国药典［S］.一部，北京：化学工业出版社，2005：103.