2014年猪场五种病毒性疾病的血清抗体检测

丁文格朱秀高,叶　晶侯　博,蒋文明石勇耀程福生樊学坤陆　军熊剑锋唐万勇

（1武汉回盛生物科技有限公司，湖北武汉430042；2湖北省兽药工程技术研究中心，湖北武汉430042）

2014年猪场五种病毒性疾病的血清抗体检测

丁文格1朱秀高1,2叶晶2侯博1,2蒋文明1石勇耀1程福生1樊学坤1陆军1熊剑锋1唐万勇1

（1武汉回盛生物科技有限公司，湖北武汉430042；2湖北省兽药工程技术研究中心，湖北武汉430042）

摘要：采用ELISA方法，对186个中小规模猪场的母猪群、保育猪群和育肥猪群的1 400余份血清检测猪瘟、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍综合征、圆环病毒2型和口蹄疫O型的抗体水平。结果表明，75%～87%的猪群抗体水平合格，种猪群抗体合格率高于保育猪群和育肥猪群。伪狂犬病野毒gE抗体阳性率较高，母猪群中gE抗体阳性样品数占检测样品总数的40.93%，而母猪群中阳性场占总场数的89.74%。

关键词：猪病毒性疾病；ELISA；抗体检测

猪瘟、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍综合征、圆环病毒病和口蹄疫等5种病毒病是目前严重影响我国养猪业的主要疾病。对猪群进行这5种病毒病的抗体监测，可以及时掌握猪群免疫抗体水平，了解免疫状况或感染状态，猪场可根据实际抗体监测结果建立科学、合理的免疫程序，这是疾病控制的基础性工作。湖北省兽药工程技术研究中心猪病检测所对湖北、湖南、山东、河南、海南等5个省份部分规模化猪场送检的1 400余份血清进行了猪瘟、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍综合征、圆环病毒病和口蹄疫抗体的检测，并对检测结果汇总和分析，现将结果报告如下。

1　材料与方法

1.1试验材料

1.1.1送检猪场及待检血清样品

来源于2014年我国湖北、河南、湖南、海南、山东等5个省份存栏规模为30～500头母猪的中小型规模猪场。送检猪场的免疫背景清楚，大多在送检前已书面说明。猪只经耳静脉或前腔静脉采血，血样样品自然凝固，包装后，经冷链运送至湖北省兽药工程技术研究中心。本文对其中不同批次送检的共1 400余份血样进行统计分析。

1.1.2抗体检测试剂盒

猪伪狂犬病病毒gE蛋白ELISA抗体检测试剂盒、猪伪狂犬病病毒gB蛋白ELISA抗体检测试剂盒、猪瘟抗体检测ELISA试剂盒、猪圆环病毒2型抗体检测ELISA试剂盒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒抗体检测ELISA试剂盒、猪口蹄疫病毒O型抗体检测ELISA试剂盒，均为武汉科前动物生物制品有限责任公司生产。

1.2试验方法

试验方法均采用ELISA方法，按照ELISA检测试剂盒的使用说明书严格进行操作，并根据试剂盒使用说明书中的判断标准进行阳性和阴性的判断。

1.3数据统计方法

最后，应用基于“三明治”SERS 特性的检测方案开展临床血清样本的检测.如图8(d)所示，对不同稀释比例的血清样品分别进行SERS光谱检测，并由剂量响应曲线(图8(b))计算相应的AFP浓度，结果列于表1中.同时，与采用CLIA方法的检测结果进行对比，可以看出，基于“三明治”结构SERS特性的免疫检测方案与CLIA的检测结果基本一致，并且具有更高的灵敏度.因此，基于PS@Ag免疫探针和Si@Ag免疫基底的SERS光谱检测具有好的可靠性.

本文以送检猪场为统计单元进行数据汇总和分析，对母猪群、保育猪群和育肥猪群的检测结果分别进行统计。猪群抗体合格率按照农业部发布的《国家动物疫病强制免疫计划》中的标准均设定为70%。

表1　猪瘟抗体检测结果

2　结果与分析

2.1猪瘟抗体检测结果

猪瘟抗体检测样品总数为1 333份，来自172个猪场（群），其总抗体阳性率在70%以上的猪群数占84%（表1）。但不同猪群的抗体阳性率有明显区别，其中母猪群的阳性率较高，而有30%的猪场保育猪群的猪瘟抗体阳性率在70%以下，16%的猪场育肥猪群的猪瘟抗性阳性率低于70%。结果表明，部分猪场保育猪群和育肥猪群的猪瘟免疫合格率不高，需要进一步改进猪瘟的免疫工作。

2.2伪狂犬抗体检测结果

猪伪狂犬抗体检测包括gB和gE抗体检测，分别反映猪场免疫合格率和野毒感染比例，检测结果见表2、表3。

2.2.1伪狂犬gB抗体检测结果

2.2.2伪狂犬gE抗体检测结果

对76个猪场（群）的655份血清的伪狂犬gE抗体检测发现（表3），在母猪群中gE阳性样品数占40.93%，而gE抗体呈阳性的猪场比例为89.74%，保育猪群的gE抗体阳性结果和阳性猪场数均比母猪群的阳性比例较低，育肥猪群阳性率最低。由于这些猪场在送检样品时已经说明其最近一年使用的伪狂犬疫苗是gE基因缺失疫苗（Bartha K-61毒株），故检测出的gE抗体被认为是野毒抗体，结果说明我国中小规模猪场母猪群野毒感染情况严重，应该采取有力措施进行野毒净化。

2.3猪繁殖与呼吸障碍综合征(蓝耳病）抗体检测结果

蓝耳病抗体检测样品总数为1 464份，分别来自186个猪场（群）。其中，抗体阳性率在100%～90%的猪群数占73.12%，其中母猪群最高，为90.53%，其次为育肥猪群，最后为保育猪群。而保育猪群抗性阳性率低于70%的猪场数明显高于其他猪群，结果详见表4。

表2　猪伪狂犬gB抗体检测结果

表3　猪伪狂犬gE抗体检测结果

2.4猪圆环病毒2型抗体检测结果

猪圆环病毒2型抗体检测样品总数为877份，分别来自116个猪场（群），其总抗体阳性率在100%～90%的猪群数占76.72%，其中母猪群为88.14%，其次为保育猪群，最后为育肥猪群。而大约有20%的保育猪群的圆环病毒2型抗性阳性率低于70%（表5），说明仔猪的免疫有待进一步增强。此外，有部分中小规模猪场未曾免疫猪圆环病毒疫苗，或未对商品猪进行免疫，因此对圆环病毒疫苗抗体阳性需要结合实际免疫情况进行分析，如果未曾免疫而检测到圆环病毒抗体，则说明猪群中存在圆环病毒的感染。

表4　猪繁殖与呼吸障碍综合征抗体检测结果

表5　猪圆环病毒2型抗体检测结果

2.5猪口蹄疫O型抗体检测结果

猪口蹄疫O型抗体检测样品总数为420份，分别来自57个猪场（群）。其中，抗体阳性率在100%～90%的猪群数占70.18%，其中母猪群为100%，其次为保育猪群，为64.29%，最后为育肥猪群，为47.83%（表6）。而育肥猪群抗性阳性率低于70%的猪场数明显偏多，这与口蹄疫的实际发生情况较为吻合。目前猪群中发生的口蹄疫在大多数情况下是从育肥猪群开始而逐步蔓延至整个猪场的。

表6　猪口蹄疫病毒O型抗体检测结果

3　小结与讨论

⑴本文利用ELISA的方法，对2014年部分中型规模化猪场的5种重要病毒性疾病的血清抗体进行了检测，并以猪场（群）为统计单元进行汇总分析。结果发现，猪瘟、伪狂犬病、猪繁殖与呼吸障碍综合征、圆环病毒病和口蹄疫的免疫合格率范围在75%～87%之间，相应则有13%～25%的猪场出现免疫失败。这可能与近年来猪群免疫抑制性疾病增多、应激或霉菌毒素等其他环境因素的影响相关，另外也与毒力变异株的出现、疫苗质量不稳定、免疫程序不合理、疫苗保存不当等客观因素有关。因此需要兽医工作者在临床工作中根据检测结果以及猪场的实际情况采取适当的措施，以提高免疫合格率。

⑵对不同猪群的免疫合格率比较可见，保育猪群、生长育肥猪群的免疫合格率普遍低于母猪群，这一方面可能和母猪经反复加强免疫、免疫力较为坚强有关；另一方面，也表明仔猪的免疫程序、免疫操作可能存在不合理因素，如母源抗体干扰、免疫抑制性因素在猪群存在影响免疫效果等，这需要进一步摸索和调整仔猪的免疫程序。

⑶对伪狂犬gE抗体检测结果统计分析发现，在中小规模猪场中，大部分猪场gE抗体阳性，其中对母猪群的血清样品检测发现89.74%的猪场存在gE抗体阳性，部分猪场送检的母猪血清样品100%呈现gE抗体阳性，说明我国猪伪狂犬野毒感染仍普遍存在，这对我国养猪业的健康发展具有极大威胁。因此在中小规模猪场，应该充分重视猪伪狂犬野毒感染的严重性和普遍性，应采取选用优质的伪狂犬活疫苗、制定合理的免疫程序、加强生物安全等措施进行综合控制。同时，要加强猪伪狂犬野毒gE抗体阳性率的检测，每年定期检测两次，及时了解本场野毒感染情况，逐步淘汰带毒猪只，建立健康种群。

⑷对于中小规模猪场来讲，亟需提高抗体检测的意识，切实加强猪群采样、送检和结果分析，及时发现问题，及早进行查漏补缺，才能真正做到早发现、早治疗，从而消除疾病风险，提升养猪的经济效益。

Gloria Solano Elida Bautista Thomas Molitor Joaquim Segalés Carlos Pijoan

中图分类号：S858.28，S854.4+3

文献标识码：B

文章编号：1673-4645(2015)08-0076-04

收稿日期：2015-06-17