宫颈癌上皮间质转化相关因子ZEB1与microRNA-200c的关系

汤雅玲，冉静，赵岩

(1.厦门大学附属第一医院 妇产科，福建 厦门 361003；2.厦门大学附属第一医院 中心实验室，福建 厦门 361003)



宫颈癌上皮间质转化相关因子ZEB1与microRNA-200c的关系

汤雅玲1，冉静1，赵岩2

(1.厦门大学附属第一医院 妇产科，福建 厦门 361003；2.厦门大学附属第一医院 中心实验室，福建 厦门 361003)

目的 探讨宫颈癌上皮间质转化相关因子ZEB1与microRNA-200c水平及其意义。方法 选取2013年7月～2015年1月于厦门大学附属第一医院普外科已确诊为宫颈癌的患者50例，取其肿瘤部位组织作为实验组，同期选取50例在本院行子宫肌瘤切除手术患者的子宫颈正常组织作为对照组，检测2组患者子宫组织的ZEB1与microRNA-200c水平。结果 实验组ZEB1平均水平明显高于对照组(P<0.05)，在宫颈癌中是否淋巴转移及深肌层浸润组之间差异均有统计学意义(P<0.05)；实验组microRNA-200c平均水平低于对照组(P<0.05)；在宫颈癌中不同肿瘤病理分级组、是否淋巴转移及深肌层浸润组之间差异有统计学意义(P<0.05)；实验组ZEB1与microRNA-200c呈负相关(r=-0.270，P=0.001)。结论 ZEB1在宫颈癌中表达水平较高，microRNA-200c在宫颈癌中表达水平降低，提示2者在宫颈癌的浸润和侵袭转移中可能起重要作用，2者之间的相关性提示microRNA-200c可能通过ZEB1参与宫颈癌上皮间质化过程。

宫颈癌；ZEB1；microRNA-200c；肿瘤标记物

宫颈癌(cervical cancer)是女性常见的恶性肿瘤，发病率占女性生殖系统恶性肿瘤中首位，目前已明确其发病原因与高危型HPV持续感染有关[1]。国际癌症研究机构于2012年对全球范围内的妇女新发癌症进行了统计，结果证实全球女性新发子宫颈癌病例约有528,000例;死亡人数约为266,000例[2]。而这庞大的新发病例和死亡数中约有85%都处在发展中国家的女性患者中。我国也是子宫颈癌的高发国家之一，每年有13.15万新发病例[3]。随着现代医学的发展以及广泛妇科病普查的开展，宫颈癌的发病率及死亡率已有所降低，但其发病人群呈逐渐年轻化趋势，仍是医疗工作者急需解决的问题。上皮间质转化 (epithelial mesenchymal transition,EMT)是指上皮细胞获得成纤维细胞特性后所具备侵袭邻近组织的能力，在肿瘤细胞的侵袭、转移过程中具有重要意义，而ZEB1是调节EMT的重要因子之一，在大多数肿瘤中均有表达。微小RNA(microRNA)[4]是一种能与靶mRNA进行特异性结合从而达到靶mRNA降解、抑制或活化目的的RNA，且能作为原癌基因或抑癌基因参与肿瘤的发生过程，并在肿瘤增殖、侵袭及转移等进展过程中起到重要作用。临床对于肿瘤患者ZEB1表达虽有报道，但是对于宫颈癌患者ZEB1与microRNA-200c 2者的关系却较为少见，本研究通过观察比较正常人和宫颈癌患者ZEB1及microRNA-200c的变化，探讨2者在宫颈癌发生发展过程中的作用，为宫颈癌患者的治疗提供新的思路和方法。

1 资料与方法

1.1 一般资料 病例来源选择2013年7月～2015年1月于厦门大学附属第一医院肿瘤科确诊为宫颈癌而收入院的50例患者切除的肿瘤组织作为实验组，包括宫颈鳞癌39例，宫颈腺癌11例；根据FIGO分期标准为宫颈癌Ⅰb1期到Ⅱb期之间，患者术前均无放、化疗史。同期选取50例在我院行子宫肌瘤切除手术患者的子宫颈正常组织作为对照组，2组研究对象的年龄均在28～70岁。其中实验组年龄23～69岁，平均年龄(40.15±6.14)岁；对照组年龄22～70岁，平均年龄(41.72±5.23)岁。

诊断标准：根据第八版《妇产科学》[5]中有关于宫颈癌的诊断标准而拟定以下纳入标准：①不规则阴道流血、血性阴道排液等宫颈癌症状；②病理检验确诊为宫颈癌；③术前未接受过放、化疗等治疗者；④患者或其家属同意并自愿参与本实验。

排除标准：①不愿参与本研究或不符合纳入标准者；②既往患有精神神经障碍疾病者；③患有乙肝、艾滋病等具有传染性较强疾病者；④合并有严重肝、肾功能不全疾病患者；⑤患有心肌梗死、心力衰竭、肺心病、呼吸衰竭、严重血液病等重大原发疾病者；⑥并发其他肿瘤者；⑦年龄低于20岁或超过70岁者。

1.2 方法 通过观察行子宫癌切除术后患者ZEB1、microRNA以及肿瘤标志物的情况进行比较研究。

组织标本采集：标本于离体半小时内迅速取材，将癌组织或正常组织放入液氮中并及时放入-80 ℃冰箱保存。

ZEB1和microRNA水平测定：将上述组织分别放入液氮冷冻后的研钵中迅速研磨至粉末状(研磨过程中不断加入液氮以保证组织低温状态)，将粉末放入EP管中，室温下孵育5 min以使组织完全裂解后，12000 r/min，冷冻离心15 min，取其上清液。一部分上清液行ELISA法测定ZEB1浓度水平(试剂盒由广东通蔚实业有限公司提供，其操作方法完全按照试剂盒说明书严格执行)。余下上清液行实时定量PCR法测定microRNA-200c浓度。

2 结果

2.1 2组患者宫颈组织ZEB1水平比较 本研究中，实验组ZEB1平均水平明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；在宫颈癌中ZEB1在不同病理分级、肿瘤大小之间差异无统计学意义，在是否淋巴转移及深肌层浸润之间差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组患者宫颈组织ZEB1水平比较Tab.

*P<0.05，与同组比较，compared with the same group；#P<0.05，与对照组比较，compared with control group

2.2 2组患者宫颈组织microRNA-200c水平比较 本研究中，实验组microRNA-200c平均水平明显低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；microRNA-200c在不同肿瘤大小之间差异无统计学意义，在不同病理分级，是否淋巴转移及深肌层浸润组之间差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 2组患者宫颈组织microRNA-200c水平比较Tab.2 Comparison of microRNA-200c levels between two groups ±s)

*P<0.05，与同组比较，compared with the same group；#P<0.05，与对照组比较，compared with control group

2.3 microRNA-200c与ZEB1相关性分析 采用Spearman秩相关分析，对照组microRNA-200c与ZEB1无相关性，r=0.125，P=0.384，实验组microRNA-200c与ZEB1呈负相关，r=-0.270，P=0.001。见表3。

表3 microRNA-200c与ZEB1之间的相关分析Tab.3 Comparison of relationship between microRNA-200c and ZEB1

3 讨论

宫颈癌是一种具有高发病率、高死亡率特点的女性高发恶性肿瘤，是世界性较为重要的公众卫生问题之一。其在女性人群中的发病率仅次于乳腺癌，发展中国家高于发达国家。研究证实[6]，上皮间质转化在肿瘤细胞的侵袭、转移过程中具有重要意义，而上皮间质转化因子ZEB1在大多数肿瘤患者体内均有表达。microRNA-200c在肿瘤增殖、侵袭及转移等进展过程中具有重要作用，且研究表明，microRNA-200c在肿瘤组织中的表达与ZEB1表达具有负相关关系[7]，但是2者在宫颈癌组织中变化的关系临床少见报道。

本研究结果发现，宫颈癌组织中ZEB1的水平与肿瘤病理分级、肿瘤大小无关，在是否淋巴转移及深肌层浸润组之间差异有统计学意义。研究显示[8]，EMT在恶性肿瘤的浸润和转移细胞形成过程中可能发挥着关键性的作用，而ZEB1是调节EMT的重要因子。另有文献报道[9]，ZEB1在正常上皮细胞及分化较好的癌组织中并不表达或水平较低，但在子宫内膜癌、宫颈癌等癌组织侵袭前的肿瘤干细胞中大量表达，进而促进肿瘤的侵袭及转移。进一步的研究显示[10]，ZEB1能够通过调节EMT达到促进肿瘤侵袭和转移的作用，从表1中可以看出，宫颈癌组织中ZEB1水平高低与是否局部浸润及淋巴结转移有较大关系，其原因可能与ZEB1的高度表达能够促进宫颈癌细胞EMT，进而与肿瘤侵袭转移有关。

从表2中可以看出，实验组microRNA-200c平均水平明显低于对照组， microRNA-200c在不同病理分级，是否淋巴转移及深肌层浸润组之间差异有统计学意义(P<0.05)。研究发现[11]，microRNAs表达谱在各种肿瘤中均不相同，提示microRNAs有可能成为新的肿瘤标记物，并应用于临床。Barrett食管上皮细胞中microRNA-200c表达低于正常的胃黏膜上皮，microRNA-200c的异常低表达与食管上皮异型增生以及食管癌的发生具有密切联系，由此可见microRNA-200c可能具有抑癌基因的作用从而抑制肿瘤的发生发展[12]。在本研究中，microRNA-200c水平在低分化组低于高中分化组，深肌层浸润性子宫癌中低于非深肌层浸润性子宫癌，有淋巴转移组低于无淋巴结转移组(P<0.05)，其原因可能与microRNA-200c抑制宫颈癌发生进展的作用有关。表3中可以看出，在宫颈癌组织中microRNA-200c与ZEB1之间存在负相关，提示microRNA-200c可以负性调节ZEB1功能，进而抑制宫颈癌的EMT过程，阻止宫颈癌的发生发展。

本研究通过对50例宫颈癌患者肿瘤组织内microRNA-200c、ZEB1水平进行分析，发现了microRNA-200c、ZEB1水平与宫颈癌的关系，2者在宫颈癌中的负相关性，提示EMT过程在宫颈癌的浸润和转移中起到重要作用，而microRNA200c可能对EMT起调节作用，为宫颈癌的发病机制提供新思路，为宫颈癌治疗提供可能的新靶点。在未来的研究中，我们将对扩大样本量，在体外实验及动物实验研究中进一步探究microRNA-200c和ZEB1影响宫颈癌EMT过程的具体分子机制，为本实验所得出的结果做出进一步的论证和分析。

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(编校：谭玲)

Relationship between microRNA-200c and ZEB1 of epithelial mesenchymal transition factor in cervical cancer

TANG Ya-ling1, RAN Jing1, ZHAO Yan2

(1. Department of Obstetrics and Gynecology, The First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen 361003, China; 2. Center Laboratory, The First Affiliated Hospital of Xiamen University, Xiamen 361003, China)

ObjectiveTo investigate relationship between microRNA-200c and ZEB1 in cervical epithelial mesenchymal transition factor.Methods50 cases diagnosed with cervical cancer whose tumor tissue were taken to be the experiment group.50 cases diagnosed with uterine myoma whose normal tissue were taken to be the control group.ZEB1 and microRNA-200c of uterine tissue were were detected.ResultsThe average level of ZEB1 in the experimental group was significantly higher than that of the control group (P<0.05), and in cervical cancer, lymph node metastasis and the depth of myometrial invasion had statistically significant (P<0.05). In experimental group, microRNA-200c average was lower than control group(P<0.05), and in cervical cancer, different pathological grade group, lymph node metastasis and deep muscular layer infiltration had statistically significant(P<0.05). In experimental group, ZEB1 and microRNA-200c showed negative correlation(r=-0.270P=0.001). ConclusionThe expression level of ZEB1 in cervical cancer is higher, and the expression level of microRNA-200c in cervical cancer is lower, suggesting that the two factors may play an important role in the invasion and metastasis of cervical cancer. The correlation between the two factors suggests that microRNA-200c may be involved in the process of cervical cancer by ZEB1.

cervical cancer; ZEB1; microRNA-200c; tumor markers

汤雅玲，女，硕士，副主任医师，研究方向：妇科肿瘤，E-mail：applesouphyl@sina.com。

R737.3

A

1005-1678(2015)06-0095-03