HPLC测定五味子丸中五味子醇甲的含量

李 岩王 彤赵俊华

(1.吉林省白城市食品药品检验所,白城 137000: 2. 吉林省白城市实验高级中学,白城 137000)

HPLC测定五味子丸中五味子醇甲的含量

李 岩1王 彤2赵俊华1

(1.吉林省白城市食品药品检验所,白城 137000: 2. 吉林省白城市实验高级中学,白城 137000)

目的建立五味子丸中五味子醇甲的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法 谱柱Agilent C18,流动相:甲醇:水(65:35);检测波长:250nm。柱温:30℃,流速:1.0ml/min结果五味子醇甲在0.1076—1.614μg范围内,线性良好(r=0.9998)。【1】平均加样回收率为99.6%,RSD%＝0.2%。结论本方法简便准确,重复性好,可用来控制五味子丸的质量。

五味子醇甲;五味子丸;高效液相色谱法。

五味子丸由五味子、肉苁蓉(酒制)、茯苓、菟丝子(酒炒)、车前子(盐制)、巴戟天(制)中药组成,滋补阴气,填精益髓。用于肾气不足,腰膝疼痛,记忆衰退,头晕耳鸣,四肢无力。原质量标准【3】中不含含量测定项五味子醇甲,为了控制五味子丸的质量,研究设立了高效液相色谱法(Hplc)测定五味子丸中五味子的有效成分五味子醇甲的含量,此方法操作很简单,数据比较稳定,结果很准确

1 材料与仪器

1.1 材料 五味子丸批号:20141012、20141013、20141014;五味子丸阴性对照药材(亳州光大药业股份有限公司);对照品:五味子醇甲(中国药品生物制品检定所,批号11548-20140203共含量测定用);含量测定所用的甲醇为青岛试剂厂生产的色谱纯,其它试剂均为分析纯。

1.2 使用的仪器 Agilent高效液相色谱仪;工作站为Sepμ 3000色谱:岛津uv-2600紫外可见分光光度计

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:AgilentC18色谱柱(4.6×250mm,5μm);柱温30℃。流速:1.0ml/min、流动相:甲醇:水(55:45);检测波长:250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算不得低于3500。【2】【7】

2.2 对照品溶液的配置:精密称取对照品五味子醇甲适量加甲醇使溶解,制成每1ml含50μg 的五味子醇甲对照品溶液。

2.3 供试品溶液的配置:取重量差异项下的本品5g,精密称定加甲醇50ml加热回流1小时,加甲醇补足减失总量。滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇10ml使溶解,置25ml棕色容量瓶中,再加甲醇稀释至刻度,作为供试品溶液。

2.4 阴性对照试验及检测波长的确定:按照五味子丸的处方制备方法配置缺少五味子药材的模拟样品。按照处理供试品溶液的方法制成五味子阴性对照溶液。将五味子阴性对照溶液、五味子供试品溶液及五味子醇甲对照品溶液分别注入液相色谱仪器中再进行检测。岛津uv-2600紫外可见分光光度计对五味子醇甲进行扫描,经扫描五味子醇甲在紫外光谱区250nm处有最大吸收,因此选定250nm为检测波长。五味子丸供试品中五味子醇甲的光谱吸收图标显示,供试品的最大吸收波长与对照品完全一致,而五味子阴性对照定光谱吸收在与五味子醇甲峰相同的保留时间处没有吸收峰。因此说明配方中的其它药品五味子醇甲的检测无扰,见图 1 。

2.5 线性关系考察 分别精密吸取50μg/ml的五味子醇甲对照品溶液2.0,5.0,10.0,15.0,20.0,30.0μl,注入高效液相色谱仪(Hplc)中,按照上述条件测定吸收峰面积,纵坐标设为峰面积积分值,横坐标设为对照品的进样量(μg),绘制出标准曲线,得到五味子醇甲回归方程Y=3.6571×106X+6782r=0.9998,可见,五味子醇甲在0.1076—1.614μg 范围内呈现良好的线性关系。

图1 HPLC色谱图

表1 五味子丸中五味子醇甲的加样回收试验结果

2.6 药物稳定性的试验 精密吸取同一份供试液,依次在0,3,6,12,24小时进行测定,共考察24小时。五味子醇甲峰面积平均的RSD为0.85%,说明五味子醇甲至少在24小时内比较稳定,能满足测试要求。

2.7 精密度试验 精密吸取同一份供试品溶液10μl,连续重复进样9次,测定吸收峰面积,结果供试品中五味子醇甲的评均含量0.062mg/g,RSD为1.0%(n=9)。表明精密度良好

2.8 系统重复性试验 取对同一批量的样品按以上叙述含量测定方法连续进行9次平行试验测定,计算其含量,结果供试品中五味子醇甲的平均含量为0.062mg/g,相对标准偏差为为1.0%(n=9)。

2.9 方法回收率试验 精密称取已知明确含量的供试品5份,每份为5g,分别精密注入五味子醇甲对照液(50μg/ml).2ml,按上述试验方法进行测定,计算其回收率,结果见表1。

2.10 样品测定结果 按照前述方法配置供试品溶液与对照品溶液,分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,测定计算其含量,样品测定的结果见表2。

表2 五味子丸中五味子醇甲的含量测定结果

3 讨论

3.1 《中西新药转正》15册【4】,卫生部药品标准《中药成方制剂》[S]第一册【2】,五味子丸均没有对五味子醇甲的含量进行测定。国家食品药品监督管理局,《中成药地方标准上升国家标准部分》内科[S]2005:9-13【1】对五味子醇甲进行了薄层色谱鉴别,但无含量测定。《中西新药转正》15册五味子丸【4】,中有关五味子醇甲的含量测定方法是薄层扫描法,但是薄层扫描法,灵敏度没有高效液相法准确,灵敏。因此我们决定采用高效液相色谱法来测定五味子丸的五味子醇甲的含量。

3.2在供试品溶液的制备过程中, 为了保证样品中五味子醇甲的充分提取, 本实验考察了相关文献【5-19】报道方法后, 采用加入 70%乙醇、 90%甲醇、 100%甲醇超声提取,70%乙醇、90%甲醇、 100%甲醇回流提取并对不同提取时间进行了试验,结果表明,70%乙醇、 90%甲醇、 100%甲醇超声提取,提出杂质比较多; 70%乙醇、 90%甲醇,不能完全提取充分,100%甲醇回流1小时, 提取效果佳, 故选定此方法。

3.3样品检测中, 曾以不同比例的甲醇-0.1%醋酸,乙腈-水,甲醇- 水-冰醋酸为流动相等度和梯度洗脱, 结果表明,以甲醇-0.1%醋酸,乙腈-水,甲醇- 水-冰醋酸洗脱时分离效果均不好,而《中华人民共和国药典》2010年版五味子项下测定五味子醇甲以甲醇-水(65:35)为流动相,测定时发现样品分离度差,经反复实验,选定甲醇-水(55:45)作为流动性进行测定,结果显示供试品溶液峰形较好,五味子醇甲能够达到基线分离,理论板数按五味子醇甲峰计算不得低于3500。故最终采用此流动相。【2.5.6.7.8.11】

3.4 本实验是对五味子丸的质量标准进一步提高,原标准无含量测定,现选择增加五味子醇甲的含量测定,可以在质量标准对五味子药材的来源质量进行控制,从而达到对产品的质量进行更好的监控。

[1] 国家食品药品监督管理局,《中成药地方标准上升国家标准部分》内科[S]2005:9-13

[2] 《中国药典》一部[S]2010:61

[3] 卫生部药品标准《中药成方制剂》[S]第一册,1998;35

[4] 《中西新药转正》第15册五味子丸[S];109

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[6] 徐道情 HPLC测定通脉养心丸中五味子醇甲的含量［J］天津药学, 2012 .24(4):6.

[7] 韩宁宁．RP-HPLC测定益气固本糖浆中五味子醇甲的含量［J］湖北中医药大学学报, 2013.6.15.3(36)

[8] 潘建锋;庄波阳 HPLC法测定太太静心助眠口服液中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量［J］福建医药杂志, 2013.02

[9] 杨锡 倪琳 HPLC法同时测定生脉饮中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素［J］中成药, 2012 (5):120.

[10] 周竹琇 不同产地生五味子饮片中五味子醇甲含量比较 ［J］《亚太传统医药》, 2014 (23)

[11] 王芳 半仿生提取-高效液相色谱法测定芪白平肺胶囊中五味子醇甲的含量［J］海峡药学, 2013 (25)-8.85.

[12] 赵艳 HPLC法测定三子降酶胶囊中五味子醇甲的含量［J］中国药物警戒,2014 06.

[13] 赵鹰 HPLC同时测定五子颗粒中补骨脂素和五味子醇甲含量［J］天津药学,2014、 03.

[14] 罗艳 HPLC-DAD法同时测定复方益肝灵胶囊中水飞蓟宾和五味子醇甲的含量［J］中国药师,2013、 12.

[15] 单鑫 HPLC同时测定复方五味含片中葛根素、甘草苷、甘草酸铵、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素［J］南京中医药大学学报,2014、01.18.

[16] 周山 HPLC法同时测定复方五仁醇软胶囊中绿原酸、芍药苷、五味子醇甲、五味子乙素［J］南京中医药大学学报,2014、 01.20.

[17] 张秀丽RP-HPLC法测定脑灵素胶囊中五味子醇甲的含量［J］中国医药指南,2014、 11.20.

[18] 陈丽萍 五味通心胶囊质量标准研究［J］生物技术世界,2014、 05.15.

[19] 潘国良 市售生脉饮中五味子醇甲含量的比较分析［J］中国处方药,2014.1.30.

HPLC determination of the content of fructus schisandrae alcohol armour in fructus schisandrae pill

Li Yan1, Wang Tong2, Zao Junhua1
(1.The baicheng city of jilin province food and drug inspection. Baicheng city of jilin province, baicheng 137000;2. The baicheng of jilin province experimental high school, baicheng 137000)

Objective to establish determination method of the content of fructus schisandrae alcohol armour in fructus schisandrae pill.Methodsusing HPLC spectrum of Agilent using C18 column, mobile phase: methanol: water (65:35). : detection wavelength 250 nm. Column temperature: 30 ℃, velocity: 1.0 ml/min .Resultsfructus schisandrae alcohol armour, within the scope of 0.1076-1.614 mu g, good linear (r = 0.9998).【1】the average sample recovery rate was 99.6%, RSD % = 0.2%.Conclusionthis method is simple and accurate, and reproducible, can be used to control the quality of the fruit of Chinese magnoliavine pill.

fructus schisandrae alcohol armour; Fructus schisandrae pill; High performance liquid chromatography.

R19[文献表示码]A

1672-5654(2015)2(C)-0000-00

李岩(1981,11—),男,民族：汉族 籍贯：吉林白城,学历：大学本科 职称：主管药师 从事10多年的药品检验工作，现主要从事药品检验及综合性规范的制定工作。

期刊邮寄地址：吉林省白城市食品药品检验所 白城市海明西路50号，邮编：137000收件人：李岩，电话：1384609650